Name: split-ubiquitin based membrane yeast two-hybrid (myth) system: a powerful tool for identifying protein-protein interactions
Uploaded: 2010-02-01T16:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Рассвет Эдмондс для критического прочтения этой статьи. Лаборатория Stagljar поддерживается за счет средств Канадского фонда для инноваций (CFI), Канадский институт исследований в области здравоохранения (CIHR), сердца и инсульта фонда Канадского общества рака, и Novartis.

1. Исходная информация Белок-белковые взаимодействия (ИПП) являются основными строительными блоками участие в управлении всех клеточных процессах. Следовательно, очень важно, чтобы все взаимодействия жестко регулируется в целях поддержания клеточного гомеостаза, так к?...

<ol>
	<li>Stagljar, I., Fields, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+membrane+protein+interactions+using+yeast-based+technologies.">Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies.</a> Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).</li><li>Iyer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+the+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system+to+identify+protein-protein+interactions+of+integral+membrane+proteins.">Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system to identify protein-protein interactions of integral membrane proteins.</a> Sci STKE. 275, pl3-pl3 (2005).</li><li>Paumi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+protein-protein+interactions+for+the+yeast+ABC+transporter+Ycf1p+by+integrated+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+analysis.">Mapping protein-protein interactions for the yeast ABC transporter Ycf1p by integrated split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid analysis.</a> Mol Cell. 26 (1), 15-25 (2007).</li><li>Stagljar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+system+based+on+split-ubiquitin+for+the+analysis+of+interactions+between+membrane+proteins+in+vivo.">A genetic system based on split-ubiquitin for the analysis of interactions between membrane proteins in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (9), 5187-5192 (1998).</li><li>Gisler, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+protein-protein+interactions+between+the+mammalian+integral+membrane+transporters+and+PDZ-interacting+partners+using+a+modified+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system.">Monitoring protein-protein interactions between the mammalian integral membrane transporters and PDZ-interacting partners using a modified split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system.</a> Mol Cell Proteomics. 7 (7), 1362-1377 (2008).</li><li>Scheper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+of+N-glycosylation+and+protein+translocation+across+the+endoplasmic+reticulum+membrane+by+Sss1+protein.">Coordination of N-glycosylation and protein translocation across the endoplasmic reticulum membrane by Sss1 protein.</a> J Biol Chem. 278 (39), 37998-38003 (2003).</li><li>Thaminy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+ErbB3-interacting+factors+using+the+split-ubiquitin+membrane+yeast+two-hybrid+system.">Identification of novel ErbB3-interacting factors using the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system.</a> Genome Res. 13 (7), 1744-1753 (2003).</li><li>Johnsson, N., Varshavsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split+ubiquitin+as+a+sensor+of+protein+interactions+in+vivo.">Split ubiquitin as a sensor of protein interactions in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (22), 10340-10344 (1994).</li><li>Kelleher, D. J., Gilmore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Saccharomyces+cerevisiae+oligosaccharyltransferase+is+a+protein+complex+composed+of+Wbp1p,+Swp1p,+and+four+additional+polypeptides.">The Saccharomyces cerevisiae oligosaccharyltransferase is a protein complex composed of Wbp1p, Swp1p, and four additional polypeptides.</a> J Biol Chem. 269 (17), 12908-12917 (1994).</li><li>Chevallier, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+transcriptional+control+of+a+eucaryotic+permease+gene.">Cloning and transcriptional control of a eucaryotic permease gene.</a> Mol Cell Biol. 2 (8), 977-984 (1982).</li></ol>

Миф первый высокой пропускной способности системы, что позволяет идентифицировать взаимодействие между полнометражный мембранных белков и цитозольного или мембраной партнеров. Он был использован для изучения мембранных белков из различных организмов [3-7]. Есть, однако, конкретные де...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Polyethenlene Glycol (PEG3350)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>PEG335</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lithium Acetate Bihydrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LIA001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>XGA001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N`,N-dimethyl formamide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>DMF 451</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-amino-1,2,4-triazole (3-AT)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ATT124</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium phosphate dibasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>SPD307</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium phosphate monobasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP329-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Salmon Sperm DNA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>CA80601-120</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>GLU501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LB Broth LENOX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LBL405</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Nitrogen Base</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>YNB406</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>YEX401</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Peptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckton Dickinson</td>
<td>211677</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Tryptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>TRP402</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenine Sulphate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ADS201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Uracil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>URA241</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Threonine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>THR002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Histidine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>HIS200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Methionine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>MET222</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Valine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>VAL201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Phenylalanine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>PHA302</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Isoleucine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ISO910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Tyrosine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>TYR333</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Leucine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LEU222</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Arginine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>ARG006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Tryptophane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP395-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Lysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>LYS101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Alanine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FisherBiotech</td>
<td>BP369-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>AGR001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Soda Lime Galss Beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioSpec Product</td>
<td>11079105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bioshop</td>
<td>SLD002</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

split-ubiquitin based membrane yeast two-hybrid (myth) system: a powerful tool for identifying protein-protein interactions

Фундаментальные биологические и клинические важность интегральные мембранные белки стимулировали развитие дрожжей-системы для высокой пропускной способности идентификации белок-белковых взаимодействий (PPI) за полнометражный белками трансмембранного. С этой целью в нашей лаборатории разработаны сплит-убиквитин основан дрожжей Мембрана два-Hybrid (МИФ) системы. Эта технология позволяет чувствительны обнаружения переходных и стабильных белковых взаимодействий использованием<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em&gt; Как организма-хозяина. Миф использует наблюдение, что убиквитин могут быть разделены на два устойчивых фрагментов: С-концевой половине дрожжей убиквитин (C<sub&gt; Иь</sub&gt;) И N-концевую часть убиквитин фрагмент (N<sub&gt; Иь</sub&gt;). В МИФ, этот принцип адаптирован для использования в качестве &quot;датчика&quot; белок-белковых взаимодействий. Короче говоря, интегральный белок мембраны приманка сливается с C<sub&gt; Иь</sub&gt;, Которая связана с искусственным фактором транскрипции. Prey белки, либо в формате индивидуальных или библиотеку, слиты в N<sub&gt; Иь</sub&gt; Части. Белки взаимодействия между приманкой и добычу приводит к изменению состава убиквитин фрагменты, образуя полнометражных &quot;псевдо-убиквитин&quot; молекулы. Эта молекула в свою очередь, признаются цитозольного deubiquitinating ферментов, в результате расщепления фактора транскрипции и последующей индукции репортер экспрессии генов. Система легко адаптируется, и особенно хорошо подходит для высокопроизводительного скрининга. Он был успешно применен для исследования взаимодействий с помощью интегральных мембранных белков с обеих дрожжей и других организмов.

Watch this Scientific Journal Video about Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions at JoVE.com

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Миф позволяет чувствительны обнаружения переходных и стабильного взаимодействия между белками, которые выражаются в модели CEREVISIAE организме Saccharomyces. Она была успешно применена для изучения экзогенных и дрожжи интегральные мембранные белки с целью выявления их взаимодействия партнеров в высоком образом пропускную способность.

Сплит-Убиквитин основе дрожжей Мембрана два-Hybrid (МИФ) Система: Мощный инструмент для выявления белок-белковых взаимодействий

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

Research

JoVE Journal

Biology

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Изображениями белок-белковых взаимодействий В естественных условиях</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Associated Chromosome Trap for Identifying Long-range DNA Interactions

Связанные хромосомы Ловушка для выявления дальних взаимодействий ДНК

Genetic information encoded by DNA is organized in a complex and highly regulated chromatin structure.  Each chromosome occupies a specific territory, ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Измененный Дрожжи-Two-гибридная система для идентификации белков Взаимодействие с фактор роста Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

Протокол для идентификации белок-белковых взаимодействий на основе<sup&gt; 15</sup&gt; N Метаболический маркировки, Иммунопреципитация, Количественный масс-спектрометрии и Affinity модуляции

Protein-protein interactions are fundamental for many biological processes in the cell. Therefore, their characterization plays an important role in ...

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification (TAP)

Identifying Protein-protein Interaction in Drosophila Adult Heads by Tandem Affinity Purification TAP

Определение белок-белковых взаимодействие в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Взрослые Главы по Tandem аффинной очистки (TAP)

Genetic screens conducted using Drosophila melanogaster (fruit fly) have made numerous milestone discoveries in the advance of biological sciences. ...

Reverse Yeast Two-hybrid System to Identify Mammalian Nuclear Receptor Residues that Interact with Ligands and/or Antagonists

Реверс дрожжевой Два-гибридная система для идентификации Mammalian ядерного рецептора Остатки, которые взаимодействуют с лигандами и / или антагонистов

As a critical regulator of drug metabolism and inflammation, Pregnane X Receptor (PXR), plays an important role in disease pathophysiology linking ...

Capture Compound Mass Spectrometry - A Powerful Tool to Identify Novel c-di-GMP Effector Proteins

Захват соединения масс-спектрометрия - мощный инструмент для идентификации новых гр-ди-GMP эффекторных белков

Considerable progress has been made during the last decade towards the identification and characterization of enzymes involved in the synthesis ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Исследование белок-белковых взаимодействий в живых клетках с помощью биолюминесценции резонансный перенос энергии

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

Исследование высокой плотности белковых Функциональные Microarrays для обнаружения белок-белковых взаимодействий

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...

Identifying Protein-protein Interaction Sites Using Peptide Arrays

Выявление белок-белковых сайтов взаимодействие по пептидов массивов

Protein-protein interactions mediate most of the processes in the living cell and control homeostasis of the organism. Impaired protein interactions may ...