Name: a protocol for the production of klrg1 tetramer
Uploaded: 2010-01-12T16:01:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer at JoVE.com

نشكر الدكتور Naidenko للمساعدة في تحسين ظروف refolding. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة AI58181 منح البحوث لوران Brossay. سيندي تيا بانه معتمد من قبل المعاهد الوطنية للصحة NRSA AI080230 F31. ستيفاني Terrizzi تيا بانه وسيندي أيضا أن تساهم في هذا العمل.

إعداد الأجهزة إدراج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم 4 × 500 مل من السل قوارير تحتوي كل منها على 50 ميكروغرام / مل من كربنيسيلين والكلورامفينيكول مع الثقافة بين عشية وضحاها من البكتيريا معربا عن بناء KLRG1 البلازميد. عندما تصل إلى 0.6 Å OD في 600 نانومتر ،...

<ol>
	<li>Tessmer, M. S., Fugere, C., Stevenaert, F., Naidenko, O. V., Chong, H. J., Leclercq, G., Brossay, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLRG1+binds+cadherins+and+preferentially+associates+with+SHIP-1.">KLRG1 binds cadherins and preferentially associates with SHIP-1.</a> Int Immunol. 19, 391-400 (2007).</li><li>Grundemann, C., Bauer, M., Schweier, O., von Oppen, N., Lassing, U., Saudan, P., Becker, K. F., Karp, K., Hanke, T., Bachmann, M. F., Pircher, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+identification+of+E-cadherin+as+a+ligand+for+the+murine+killer+cell+lectin-like+receptor+G1.">Cutting edge: identification of E-cadherin as a ligand for the murine killer cell lectin-like receptor G1.</a> J Immunol. 176, 1311-1315 (2006).</li><li>Ito, M., Maruyama, T., Saito, N., Koganei, S., Yamamoto, K., Matsumoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killer+cell+lectin-like+receptor+G1+binds+three+members+of+the+classical+cadherin+family+to+inhibit+NK+cell+cytotoxicity.">Killer cell lectin-like receptor G1 binds three members of the classical cadherin family to inhibit NK cell cytotoxicity.</a> J Exp Med. 203, 289-295 (2006).</li><li>Li, Y., Hofmann, M., Wang, Q., Teng, L., Chlewicki, L. K., Pircher, H., Mariuzza, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+natural+killer+cell+receptor+KLRG1+bound+to+E-cadherin+reveals+basis+for+MHC-independent+missing+self+recognition.">Structure of natural killer cell receptor KLRG1 bound to E-cadherin reveals basis for MHC-independent missing self recognition.</a> Immunity. 31, 35-46 (2009).</li><li>Nakamura, S., Kuroki, K., Ohki, I., Sasaki, K., Kajikawa, M., Maruyama, T., Ito, M., Kameda, Y., Ikura, M., Yamamoto, K., Matsumoto, N., Maenaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=K.+Molecular+basis+for+E-cadherin+recognition+by+killer+cell+lectin-like+receptor+G1+(KLRG1).">K. Molecular basis for E-cadherin recognition by killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1).</a> J Biol Chem. , .</li></ol>

في هذا البروتوكول ، فإنه يظهر كيفية تنقية ، biotinylate وKLRG1 tetramerize. يمكن أن تستخدم لتسمية KLRG1 tetramer KLRG1 يغاندس بواسطة التدفق الخلوي. على الرغم من الظروف refolding سيتعين اختبارها تجريبيا لكل من البروتين ، يمكن tetramerized غيرها من نوع C - lectins باستخدام بروتوكول مماثل. ويمكن استخدام الب?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BirA Enzyme and Buffer</td>
<td>Biotinylation Kit</td>
<td>Avidity</td>
<td>BIRA500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Complete Mini Protease Inhibitor Tablets, EDTA Free</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche</td>
<td>11 836 170 001</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Amicon Stirred Cell</td>
<td>Equipment</td>
<td>Millipore</td>
<td>Model #8400</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>YM10 NMWL 10K ultrafiltration membrane</td>
<td>Filtration Supply</td>
<td>Millipore</td>
<td>13642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 ml YM10 concentrator</td>
<td>Filtration Supply</td>
<td>Millipore</td>
<td>4411</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AKTAFPLC</td>
<td>Equipment</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>18-1900-26</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sephacryl S-200 16/60 high-resolution column</td>
<td>Equipment</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>17-1166-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Strepavidin PE</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>554061</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

a protocol for the production of klrg1 tetramer

قاتل مستقبلات الخلية G1 lectin مثل (KLRG1) هي عبر الغشاء مستقبلات بروتين سكري من النوع الثاني المثبطة ينتمون إلى الفصيلة C lectin تشبه النوع. KLRG1 موجود بوصفه على حد سواء ونتيجة لمونومر homodimer ثاني كبريتيد مرتبطة. تم العثور على هذه المستقبلات جيدا الحفاظ على خلايا NK الأكثر نضجا وتفعيلها مؤخرا فضلا عن مجموعة فرعية من خلايا تي المستجيب / الذاكرة. باستخدام KLRG1 tetramer فضلا عن أساليب أخرى ، E ، N ، وحددت R - cadherins كما KLRG1 يغاندس. هذه كا + التي تعتمد على خلية خلية التصاق جزيئات تتكون من خارج الخلية التي تحتوي على مجال يكرر كادهيرين الخمسة المسؤولة عن الخلية الخلية والتفاعلات ، ومجال وعبر الغشاء مجال هيولي مرتبط إلى الهيكل الخلوي أكتين 2 وكان جيل من tetramer KLRG1 ضرورية لتحديد يغاندس KLRG1. KLRG1 tetramer هو أيضا أداة فريدة لإلقاء الضوء على الأدوار واللعب كادهيرين KLRG1 في تنظيم الاستجابة المناعية وسلامة الأنسجة.

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer at JoVE.com

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

يصف هذا البروتوكول إنتاج tetramer KLRG1 ، الذي هو أداة قوية لتحليل KLRG1 يغاندس.

بروتوكول لإنتاج Tetramer KLRG1

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

بروتوكول للتربية البعوض (A. الغامبية)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers

المستضد CD4 + تصور معين باستخدام خلايا T MHC الدرجة الثانية Tetramers

Major histocompatibility complex (MHC) class II tetramers allow the direct visualization of antigen specific CD4+ T cells by flow cytometry.  This method ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

لإنتاج C. ايليجانس الجينات المحورة عبر Recombineering مع galK إختيار ماركر

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

ومنهاج عمل مريحة والتعبير العام لانتاج البروتينات يفرز من خلايا الإنسان

Recombinant protein expression in bacteria, typically E. coli, has been the most successful strategy for milligram quantity expression of proteins. ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

A بروتوكول بسيط لاستخراج اليرقات من Hemocytes البرية

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

بروتوكول SIVQ-LCM لالصك ArcturusXT

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

قياس وتحليل حمض خارج الخلية الإنتاج لتحديد معدل حال السكر

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Novel Production Protocol for Small-scale Manufacture of Probiotic Fermented Foods

بروتوكول إنتاج رواية لتصنيع على نطاق صغير من بروبيوتيك المخمرة للأغذية

A novel dried bacterial consortium of Lactobacillus rhamnosus yoba 2012 and Streptococcus thermophilus C106 is cultured in 1 L of milk. This fresh starter ...

A Multi-hole Cryovial Eliminates Freezing Artifacts when Muscle Tissues are Directly Immersed in Liquid Nitrogen

A متعدد حفرة Cryovial يزيل تجميد قطع أثرية عندما منغمسين الأنسجة العضلية مباشرة في النيتروجين السائل

Studies on skeletal muscle physiology face the technical challenge of appropriately processing the specimens to obtain sections with clearly visible ...

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

بروتوكول لمختبر الإسكان من الفيروز Killifish (فورزيري نوثوبرانتشيوس)

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...