Name: a protocol for the production of klrg1 tetramer
Uploaded: 2010-01-12T16:01:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר Naidenko עזרה אופטימיזציה התנאים refolding. עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק מחקר AI58181 אל לורן Brossay. סינדי Banh נתמך על ידי NIH NRSA F31 AI080230. סטפני Terrizzi וסינדי Banh לתרום באופן שווה על עבודה זו.

הכנת גופים הכללה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן 4 x 500 מ&quot;ל צלוחיות של שחפת שכל אחת מהן מכילה 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​ו carbenicillin chloramphenicol עם תרבות הלילה של חיידקים ביטוי לבנות KLRG1 פלסמיד. כאשר מגיע OD 0.6 בבית 600 ננומטר, להשרות עם תוספת של 0.4 M ו - IPTG דגירה ...

<ol>
	<li>Tessmer, M. S., Fugere, C., Stevenaert, F., Naidenko, O. V., Chong, H. J., Leclercq, G., Brossay, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLRG1+binds+cadherins+and+preferentially+associates+with+SHIP-1.">KLRG1 binds cadherins and preferentially associates with SHIP-1.</a> Int Immunol. 19, 391-400 (2007).</li><li>Grundemann, C., Bauer, M., Schweier, O., von Oppen, N., Lassing, U., Saudan, P., Becker, K. F., Karp, K., Hanke, T., Bachmann, M. F., Pircher, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+identification+of+E-cadherin+as+a+ligand+for+the+murine+killer+cell+lectin-like+receptor+G1.">Cutting edge: identification of E-cadherin as a ligand for the murine killer cell lectin-like receptor G1.</a> J Immunol. 176, 1311-1315 (2006).</li><li>Ito, M., Maruyama, T., Saito, N., Koganei, S., Yamamoto, K., Matsumoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Killer+cell+lectin-like+receptor+G1+binds+three+members+of+the+classical+cadherin+family+to+inhibit+NK+cell+cytotoxicity.">Killer cell lectin-like receptor G1 binds three members of the classical cadherin family to inhibit NK cell cytotoxicity.</a> J Exp Med. 203, 289-295 (2006).</li><li>Li, Y., Hofmann, M., Wang, Q., Teng, L., Chlewicki, L. K., Pircher, H., Mariuzza, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+natural+killer+cell+receptor+KLRG1+bound+to+E-cadherin+reveals+basis+for+MHC-independent+missing+self+recognition.">Structure of natural killer cell receptor KLRG1 bound to E-cadherin reveals basis for MHC-independent missing self recognition.</a> Immunity. 31, 35-46 (2009).</li><li>Nakamura, S., Kuroki, K., Ohki, I., Sasaki, K., Kajikawa, M., Maruyama, T., Ito, M., Kameda, Y., Ikura, M., Yamamoto, K., Matsumoto, N., Maenaka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=K.+Molecular+basis+for+E-cadherin+recognition+by+killer+cell+lectin-like+receptor+G1+(KLRG1).">K. Molecular basis for E-cadherin recognition by killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1).</a> J Biol Chem. , .</li></ol>

בפרוטוקול זה, הראה כיצד לטהר, biotinylate ו KLRG1 tetramerize. KLRG1 tetramer ניתן להשתמש בתווית KLRG1 ligands ידי cytometry הזרימה. למרות התנאים refolding יצטרך להיבדק באופן אמפירי של חלבון זה לזה, C-סוג לקטינים יכול להיות tetramerized באמצעות פרוטוקול דומה. באמצעות חלבונים tetramerized כמו בדיקות, ligands ל-C מסוג קול?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BirA Enzyme and Buffer</td>
<td>Biotinylation Kit</td>
<td>Avidity</td>
<td>BIRA500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Complete Mini Protease Inhibitor Tablets, EDTA Free</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche</td>
<td>11 836 170 001</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>Amicon Stirred Cell</td>
<td>Equipment</td>
<td>Millipore</td>
<td>Model #8400</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>
<tr>
<td>YM10 NMWL 10K ultrafiltration membrane</td>
<td>Filtration Supply</td>
<td>Millipore</td>
<td>13642</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 ml YM10 concentrator</td>
<td>Filtration Supply</td>
<td>Millipore</td>
<td>4411</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AKTAFPLC</td>
<td>Equipment</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>18-1900-26</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sephacryl S-200 16/60 high-resolution column</td>
<td>Equipment</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>17-1166-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Strepavidin PE</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>554061</td>
<td>or equivalent</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

a protocol for the production of klrg1 tetramer

תא רוצח לקטינים כמו קולטן ה-G1 (KLRG1) הוא סוג II הטרנסממברני גליקופרוטאין קולטן מעכבות השייכים superfamily לקטינים כמו סוג ג&#39;. KLRG1 קיים הן מונומר וכן homodimer דיסולפיד צמודות. קולטן זה היטב נשמרת נמצא על תאים NK בוגרת ביותר הופעל לאחרונה, כמו גם על קבוצת תאים T מפעיל / זיכרון. שימוש KLRG1 tetramer כמו גם שיטות אחרות, דואר, N-, ו-R-cadherins זוהו KLRG1 ligands. אלה Ca 2 + תלויי תאים תאים מולקולות הדבקה כוללת של תחום תאי המכיל חמש חזרות cadherin אחראי תאים תאים אינטראקציות, תחום הטרנסממברני ואת תחום cytoplasmic המקושר cytoskeleton אקטין. הדור של tetramer KLRG1 היה חיוני לזיהוי של KLRG1 ligands. KLRG1 tetramer היא גם כלי ייחודי כדי להבהיר את cadherin תפקידים לשחק KLRG1 בוויסות התגובה החיסונית ושלמות הרקמות.

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer at JoVE.com

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

פרוטוקול זה מתאר את ייצור KLRG1 tetramer, אשר הוא כלי רב עוצמה לניתוח KLRG1 ligands.

פרוטוקול לייצור KLRG1 Tetramer

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers

Antigen CD4 + הדמיה ספציפיות תאים T באמצעות MHC Class II Tetramers

Major histocompatibility complex (MHC) class II tetramers allow the direct visualization of antigen specific CD4+ T cells by flow cytometry.  This method ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

הייצור של ג elegans Transgenes דרך Recombineering עם GalK לבחירה מרקר

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

פלטפורמת ביטוי נוח כללי לייצור חלבונים המופרשים מ תאים אנושיים

Recombinant protein expression in bacteria, typically E. coli, has been the most successful strategy for milligram quantity expression of proteins. ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

פרוטוקול פשוט לחילוץ Hemocytes מזחלי Wild

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

SIVQ-LCM Protocol for the ArcturusXT Instrument

SIVQ-LCM פרוטוקול עבור מכשיר ArcturusXT

SIVQ-LCM is a new methodology that automates and streamlines the more traditional, user-dependent laser dissection process.&#160;It aims to create an ...

Measurement and Analysis of Extracellular Acid Production to Determine Glycolytic Rate

מדידה וניתוח של תאי ייצור חומצה לקביעת glycolytic דרג

Extracellular measurement of oxygen consumption and acid production is a simple and powerful way to monitor rates of respiration and glycolysis1. Both ...

Novel Production Protocol for Small-scale Manufacture of Probiotic Fermented Foods

פרוטוקול הפקה חדשנית לייצור בקנה מידה קטן של מזונות מותססים פרוביוטיים

A novel dried bacterial consortium of Lactobacillus rhamnosus yoba 2012 and Streptococcus thermophilus C106 is cultured in 1 L of milk. This fresh starter ...

A Multi-hole Cryovial Eliminates Freezing Artifacts when Muscle Tissues are Directly Immersed in Liquid Nitrogen

מבטל Multi-חור cryovial הקפאת חפצים כאשר השרירים שקועים ישירות בחנקן נוזלי

Studies on skeletal muscle physiology face the technical challenge of appropriately processing the specimens to obtain sections with clearly visible ...

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

פרוטוקול עבור המעבדה דיור של טורקיז דגים גמבוזיים (Nothobranchius furzeri)

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...