Name: visualizing rna localization in xenopus oocytes
Uploaded: 2010-01-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes at JoVE.com

ويدعم عملنا على توطين RNA عن طريق منحة من المعاهد الوطنية للصحة (R01GM071049) لKLM.

الجزء 1 : النسخ من مرنا fluorescently المسمى. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصبح خطي DNA البلازميد التي تحتوي على عنصر أو تسلسل الحمض النووي الريبي التعريب الأخرى ذات الصلة وresuspend في 1 ميكروغرام / ميكرولتر مع DEPC المعاملة O. 2 H يجب أن يكون القالب الحمض ال?...

<ol>
	<li>Cohen, S., Au, S., Pant, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Xenopus+laevis+oocytes.">Microinjection of Xenopus laevis oocytes.</a> JoVE. 24, (2009).</li><li>Dumont, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+in+Xenopus+laevis+(Daudin).+I.+Stages+of+oocyte+development+in+laboratory+maintained+animals.">Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). I. Stages of oocyte development in laboratory maintained animals.</a> J. Morphol. 136, 153-179 (1972).</li><li>Gagnon, J. A., Mowry, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+transport+in+ovo:+Simultaneous+visualization+of+two+RNAs.">RNA transport in ovo: Simultaneous visualization of two RNAs.</a> Mol Reprod Dev. 76, 1115-1115 (2009).</li><li>Gautreau, D., Cote, C. A., Mowry, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+copies+of+a+subelement+from+the+Vg1+RNA+localization+sequence+are+sufficient+to+direct+vegetal+localization+in+Xenopus+oocytes.">Two copies of a subelement from the Vg1 RNA localization sequence are sufficient to direct vegetal localization in Xenopus oocytes.</a> Development. 124, 5013-5020 (1997).</li><li>Lewis, R. A., Gagnon, J. A., Mowry, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTB/hnRNP+I+is+required+for+RNP+remodeling+during+RNA+localization+in+Xenopus+oocytes.">PTB/hnRNP I is required for RNP remodeling during RNA localization in Xenopus oocytes.</a> Mol Cell Biol. 28, 678-6786 (2008).</li><li>Messitt, T. J., Gagnon, J. A., Kreiling, J. A., Pratt, C. A., Yoon, Y. J., Mowry, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+kinesin+motors+coordinate+cytoplasmic+RNA+transport+on+a+subpopulation+of+microtubules+in+Xenopus+oocytes.">Multiple kinesin motors coordinate cytoplasmic RNA transport on a subpopulation of microtubules in Xenopus oocytes.</a> Dev Cell. 15, 426-436 (2008).</li><li>Mowry, K. L., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vegetal+messenger+RNA+localization+directed+by+a+340-nt+RNA+sequence+element+in+Xenopus+oocytes.">Vegetal messenger RNA localization directed by a 340-nt RNA sequence element in Xenopus oocytes.</a> Science. 255, 991-994 (1992).</li><li>Yoon, Y. J., Mowry, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+Staufen+is+a+component+of+a+ribonucleoprotein+complex+containing+Vg1+RNA+and+kinesin.">Xenopus Staufen is a component of a ribonucleoprotein complex containing Vg1 RNA and kinesin.</a> Development. 131, 3035-3045 (2004).</li></ol>

هنا قدمنا ​​مشروع بروتوكول لتصور التعريب مرنا في القيطم البويضات. هذا الأسلوب ، وذلك باستخدام الحمض النووي الريبي fluorescently المسمى النصوص وأعلى إشارة إلى نسبة الضوضاء من الحصول مسبقا مع digoxigenin المسمى النصوص وأبسط وأسرع من الوضع الطبيعي في النهج القائمة (موري ومي...

A correction to the step 2 of Part 1 for article Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes.

Erratum: Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

10X تكساس العازلة <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 60 ملم MgCl 2 </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 400 ملم تريس ، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 7.5) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 ملي سبيرمدين - حمض الهيدروكلوريك </li></ul> 20X قبعة / NTP مزيج <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 ملي CTP </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 ملي ATP </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 9 ملم UTP </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 مم GTP </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 ملي G (PPP) G رسملة تماثلي (نيو إنجلاند Biolabs) </li></ul> G - 50 عمود <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> منزوع الأيونات هيدرات 5 ز Sephadex G - 50 حبات (سيغما الدريتش) في 100 مل من H 2 O. لمدة 30 دقيقة DEPC علاج. والأوتوكلاف. تخزين الأوراق المالية غير مكتملة في درجة حرارة الغرفة. قبل الاستخدام ، إضافة التالية ريبونوكلياز خالية من الحلول : </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.5 مل 0.2 M EDTA </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 مل 1 تريس M الرقم الهيدروجيني 8.0 </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.5 مل SDS 20 ٪ </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> مخزن كاملة G - 50 درجة مئوية في حل 4 </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة وتجاهل المكبس من المحاقن مل 3 دينار بحريني (العلوم البيولوجية) ، ومكان للبرميل من الحقنة في أنبوب 15 مل المخروطية (كورنينج). سد المحاقن مع كمية صغيرة من الصوف الزجاجي (قابس حول حجم نصف بنس واحد). </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> دوامة كاملة G - 50 حل لresuspend الخرز. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل G - 50 حل للعمود فارغ. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور لمدة 1 دقيقة في ز س 1000 جهاز طرد مركزي في الفوق. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 DEPC المعاملة منزوع الأيونات ميكرولتر H 2 O إلى كل عمود. زيادة ونقصان. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار غسل مرتين أكثر من أجل ما مجموعه ثلاثة يغسل. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> حقنة لإزالة برميل أنبوب جديد 15 مل المخروطية. </li></ul> كولاجيناز الحل <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 75 ملغ من نسج كلوستريديوم كولاجيناز (سيغما الدريتش) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 25 مل 0.1 م 3 + KPO (الرقم الهيدروجيني 7.4) </li></ul> MBSH العازلة <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 88 مم كلوريد الصوديوم </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ملم بوكل </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 2.4 ملي NaHCO 3 </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.82 ملي MgSO 4 X 7H 2 O </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.33 ملي كا (NO 3) 2 X 4H 2 O </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.41 ملي CaCl 2 X 6H 2 O </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 HEPES ملم (7.6 درجة الحموضة) </li></ul> البويضة مستنبت <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ٪ L15 المتوسطة </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 HEPES ملم (7.6 درجة الحموضة) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ملغ / مل الأنسولين </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 ملغ / مل جنتاميسين </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 U / مل النيستاتين </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 U / مل البنسلين </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ملغ / مل الستربتوميسين </li></ul> MEMFA الحل <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.1 اجتماعات الأطراف M (الرقم الهيدروجيني 7.4) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 مم EGTA </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 ملم MgSO 4 </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> 3.7 ٪ الفورمالدهيد </li></ul> الحوسبة RNA العائد <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> الاجتماع التحضيري للمؤتمر في تحديد &quot;الإدخال&quot; و &quot;دمج&quot; العينات باستخدام عداد التلألؤ القياسية. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> التأسيس = (&quot;دمج&quot;) / (10 س &quot;الإدخال&quot;) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> إدماج القيم النموذجية تتراوح ما بين 0.03 و 0.10 ~. </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> نظرية الحد الأقصى للغلة polymerases مختلفة : T7 ، T3 ، SP6 -- 2.64 ميكروغرام </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> رد الفعل في ميكروغرام العائد = (الغلة القصوى من بوليميريز المستخدمة) X (التأسيس) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع RNA إلى 50 نانومتر = (RNA ميكروغرام) / 320 / (طول الحمض النووي الريبي في قواعد) / (5X10 -8) </li><li class="none" style=";text-align:right;direction:rtl"> رد الفعل عادة غلات ~ 5-10 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي في 50 نانومتر. </li></ul>

visualizing rna localization in xenopus oocytes

RNA الترجمة هي آلية الحفظ إنشاء خلية قطبية. Vg1 مرنا يموضع إلى القطب نباتية من البويضات القيطم المورق ويعمل على تقييد مكانيا التعبير الجيني للVg1 البروتين. مطلوب رقابة مشددة من Vg1 التوزيع بهذه الطريقة المناسبة لمواصفات طبقة الجرثومية في الجنين النامية. تسلسل الحمض النووي الريبي العناصر في UTR 3 &#39;من مرنا ، وتوطين عنصر Vg1 (VLE) هي المطلوبة والكافية لنقل المباشر. لدراسة الاعتراف ونقل Vg1 مرنا في الجسم الحي ، قمنا بتطوير تقنية التصوير التي تسمح للتحليل واسعة من العوامل عبر آليات النقل الموجهة عبر قراءات بصرية بسيطة. الحمض النووي الريبي لتصور التعريب ، ونحن توليف fluorescently المسمى VLE RNA وهذا نص في microinject البويضات الفردية. ثقافة البويضة بعد للسماح بنقل الحمض النووي الريبي حقن ، البويضات يتم إصلاحها والمجففة قبل التصوير بواسطة المجهر مبائر. تصور أنماط توطين مرنا يتيح قراءة لرصد المسار الكامل لنقل الحمض النووي الريبي وتحديد الأدوار في توجيه نقل الحمض النووي الريبي لرابطة الدول المستقلة المفعول عناصر داخل النص ، والعوامل التي تعمل عبر ربط VLE (لويس وآخرون ، 2008 ، Messitt وآخرون ، 2008). لقد قدمنا ​​من خلال هذه التقنية بالتعاون مع التعريب الرناوات إضافية والبروتينات (غانيون وموري ، 2009 ، Messitt وآخرون ، 2008) ، وبالاشتراك مع تعطل المحرك والهيكل الخلوي البروتينات و(Messitt وآخرون ، 2008) إلى التحقيق الآليات الكامنة وراء توطين مرنا.

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes at JoVE.com

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

تصور<em&gt; في الجسم الحي</emويتم إنجاز&gt; RNA النقل microinjection النصوص الحمض النووي الريبي في fluorescently المسمى<em&gt; القيطم</em&gt; البويضات ، تليها المجهري متحد البؤر.

تصور التعريب في الحمض النووي الريبي القيطم البويضات

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

التصحيح تسجيل المشبك من القنوات ايون معبرا عنه البويضات القيطم

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection من البويضات المورق القيطم

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

تسميد البويضات القيطم باستخدام أسلوب نقل المضيف

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

أعربت المشبك التصحيح وتقنيات الإرواء لدراسة في قنوات ايون القيطم البويضات

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

In vitro Transcription and Capping of Gaussia Luciferase mRNA Followed by HeLa Cell Transfection

في المختبر، والسد النسخ من مرنا luciferase المراسل Gaussia تلاه ترنسفكأيشن الخلية هيلا

In vitro transcription is the synthesis of RNA transcripts by RNA polymerase from a linear DNA template containing the corresponding promoter sequence ...

Measuring Cation Transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus Oocytes by Atomic Absorption Spectrophotometry: An Alternative to Radioisotope Assays

Measuring Cation Transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus Oocytes by Atomic Absorption Spectrophotometry: An Alternative to Radioisotope Assays

قياس الكاتيونات النقل من نا، K-H و، K-أتباز في<em&gt; القيطم</em&gt; البويضات بواسطة الامتصاص الذري الطيفي: بديل لفحوصات النظائر المشعة

Whereas cation transport by the electrogenic membrane transporter Na+,K+-ATPase can be measured by electrophysiology, the electroneutrally operating ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

زرع الوجه في<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأجنة

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Xenopus Oocytes: Optimized Methods for Microinjection, Removal of Follicular Cell Layers, and Fast Solution Changes in Electrophysiological Experiments

Xenopus Oocytes: Optimized Methods for Microinjection, Removal of Follicular Cell Layers, and Fast Solution Changes in Electrophysiological Experiments

القيطم البويضات: طرق الأمثل ل microinjection، إزالة طبقات الخلية مسامي، والتغييرات الحل السريع في التجارب الكهربية

The Xenopus oocyte as a heterologous expression system for proteins, was first described by Gurdon et al.1 and has been widely used since its discovery ...

Visualizing Genetic Variants, Short Targets, and Point Mutations in the Morphological Tissue Context with an RNA In Situ Hybridization Assay

Visualizing Genetic Variants, Short Targets, and Point Mutations in the Morphological Tissue Context with an RNA In Situ Hybridization Assay

تصور المتغيرات الجينية وأهداف قصيرة والطفرات في سياق الأنسجة المورفولوجية الجيش النيبالي الملكي في الموقع تهجين المقايسة

Because precision medicine is highly dependent on the accurate detection of biomarkers, there is an increasing need for standardized and robust ...

TChIP-Seq: Cell-Type-Specific Epigenome Profiling

تشيب-Seq: التنميط Epigenome الخلية-نوع معين

Epigenetic regulation plays central roles in gene expression. Since histone modification was discovered in the 1960s, its physiological and pathological ...