Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Les auteurs tiennent à remercier l&#39;assistance de Mme Sue Connell pour son expertise dans l&#39;intégration de la résine et Mme Stephania Tombeaux pour son expertise en laboratoire. Les auteurs tiennent à remercier le professeur Frank Kandziora et le Dr Marie-Anne Polboth pour leurs conseils. </p>

<ol><li> Le tissu est placé dans un récipient scellé contenant du phosphate tamponnée à 10% une solution de formol <sup>3.</sup> Assurer une exposition minimale à la lumière, si l&#39;analyse fluorochrome doit être exécuté, comme les fluorochromes sont sensibles à la lumière. </li><li> Établir dont l&#39;orientation du tissu sera nécessaire. </li><li> Coupez le spécimen à la taille, l&#39;orientation correcte, en utilisant une scie à ruban. Mesures de sécurité Assurez-vous sont respectées. L&#39;échantillon est ensuite plac...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Solvants:</u> <ul><li> 10% d&#39;acide normal tamponné formol, l&#39;éthanol, xylène et le butanol <br /> Tous grade histologique, sans soufre. <br /> GRALE scientifique Pty Ltd <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Moules:</u> <ul><li> Peler, des moules en plastique <br /> GRALE scientifique </li></ul> <u>Diapositives:</u> <ul><li> Microscope diapositives SuperFrost PLUS <br /> Lomb scientifique Pty Ltd <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Résine:</u> <ul><li> Technovit GlycolMethacrylate 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Sauvegarde bloc de résine-Technovit 3040 blocs Histo <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Taches</u> <br /> <span>(Réactifs provenant GRALE scientifique)</span> <p> Trichrome de Goldner tache </li><p style="margin-left:40px;"> 1. De fer selon Weigert hemotoxylin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> a) Solution Hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Alcool absolu </td><td> 100mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Solution de fer </td></tr><tr><td> Aqueuse à 30% de chlorure ferrique </td><td> 4mL </td></tr><tr><td> L&#39;acide chlorhydrique (concentré) </td><td> 1ml </td></tr><tr><td> Eau distillée </td><td> 95ml </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Filtrée et ajoutée à un volume égal de hemotoxylin immédiatement avant teinture utilisée. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Ponceau-fuchsine-azophloxin solutions de stock </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Ponceau de xylidine solution </td></tr><tr><td> Ponceau de xylidine </td><td> 0,75 g </td></tr><tr><td> fuchsion l&#39;acide </td><td> 0.25g </td></tr><tr><td> Acide acétique </td><td> 1ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mélanger l&#39;eau, et ajouter distillée (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) une solution azophloxin </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> L&#39;acide acétique </td><td> 0.6ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mélanger l&#39;eau, et ajouter distillée (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> c) travail final solution de coloration </td></tr><tr><td> Ponceau-solution de fuchsine </td><td> 5-10ml </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2mL </td></tr><tr><td> 0,2% de solution d&#39;acide acétique </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Lumière verte Solution </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Green Light </td><td> 1g </td></tr><tr><td> l&#39;acide acétique </td><td> 1ml </td></tr><tr><td colspan="2"> Mélanger et ajouter de l&#39;eau distillée (500 ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic acide orangé G </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> L&#39;acide phosphomolybdique </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Orange G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> Dissoudre dans 500 ml d&#39;eau distillée et ajouter le thymol cristal. </td></tr></table><p> Von Kossa Stain </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1% de nitrate d&#39;argent aqueuse </td></tr><tr><td> Thiosulfate de sodium à 2,5% </td></tr><tr><td> 1% de safranine O </td></tr></table><p> Alcian bleuissement </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Bleu Alcian 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> 3% de solution d&#39;acide acétique </td><td> 100mL </td></tr></table><p> Hemotoxylin et éosine </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) de Harris hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2.5g </td></tr><tr><td> L&#39;alcool absolu </td><td> 25mL </td></tr><tr><td> Alun de potassium </td><td> 50g </td></tr><tr><td> l&#39;eau distillée </td><td> 500mL </td></tr><tr><td> l&#39;oxyde de mercure </td><td> 1,25 g OU </td></tr><tr><td> Iodate de sodium </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> L&#39;acide acétique glacial </td><td> 20mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) une solution d&#39;éosine </td></tr><tr><td colspan="2"> Eosine produit commercialement a été utilisé. </td></tr></table><p> Toutes les poudres de teinture tache sont Gurr poudres colorant. <br /> Tous les réactifs sont des réactifs d&#39;analyse, et non réactifs de laboratoire </p><p> <u>Fluorochromes</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Fabricant </td><td> Fluorochrome </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Calcéine verte </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Alizarine complexone </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet Australie, Victoria </td><td> Oxytétracycline <br /> (Hors médicaments antimicrobiens étagères) </td><td> Nom commercial; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Histologie osseuse décalcifiés démontre la micro-architecture du tissu osseux. Il montre à la fois les composants minéralisés et cellulaires de l&#39;os, qui fournit des informations vitales sur le remodelage osseux ou de la formation et la résorption osseuse. Cela a une importance énorme dans une variété d&#39;applications cliniques et de recherche. Il donne de belles images <sup>1</sup> et permet de techniques comme l&#39;évaluation et l&#39;histomorphométrie fluorochrome <sup>2.</sup> Analyse fluorochrome est une technique où les colorants fluorescents qui se lient au calcium sont injectés à un point de moment particulier, qui permet de quantifier la quantité de minéralisation à ce moment donné. Histomorphométrie est un processus de quantification des os au niveau microscopique. </p><p class="jove_content"> Exécution histologie osseuse décalcifiés est techniquement difficile, en particulier avec des spécimens de grande taille. Elle exige des variations dans la technique de celles utilisées dans de la paraffine Embedded Standard histologie. Cette vidéo illustre le processus de production de sections de bonne qualité et démontre les difficultés techniques et des méthodes permettant de les surmonter. Préparation de l&#39;échantillon, la fixation et le traitement sont réalisés avec une manière similaire à d&#39;autres tissus mous, mais en raison de la densité et la faible perméabilité de l&#39;os considérablement plus longue de fixation et de délais de traitement sont nécessaires, prenant souvent plusieurs semaines. Embedding est réalisé en utilisant un milieu de support avec une dureté semblable ou égal et la densité de l&#39;os comme le méthacrylate de résines à base de mais, contrairement à l&#39;infiltration de paraffine et d&#39;enrobage, il s&#39;agit d&#39;une étape irréversible. Sectionnement peut être réalisé par broyage qui produit une section plus épaisse, ce qui est optimal pour les études telles que l&#39;analyse fluorochrome. Le mieux est réalisé en utilisant une lame de diamant sur une macrotome. Alternativement, des sections plus minces peuvent être produites pour la microscopie optique et ceci est réalisé à l&#39;aide d&#39;un microtome luge avec une lame très aiguisée. Le microtome luge fournit la force supplémentaire et la stabilité requises pour les grands, les blocs durs. Résine sections intégrées peuvent être colorés avec une variété de taches, qui sont démontrés. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Histologie osseuse décalcifiés fournit des informations importantes pour une variété d&#39;applications cliniques et de recherche. Il est techniquement difficile, en particulier avec des spécimens de grande taille. Cette vidéo illustre le processus de production de sections de bonne qualité et démontre les difficultés techniques et des méthodes permettant de les surmonter.</p>

Préparation des os décalcifiés pour l&#39;histologie, histomorphométrie et analyse Fluorochrome

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

La préparation des cultures primaires de cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse murine pour l&#39;électroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Recherche

Biologie

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Un neuronale et astrocytes de co-culture de dosage pour l&#39;analyse du contenu haute de la neurotoxicité

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Préparation des adultes<em> Drosophile</em> Yeux pour la coupe mince et analyse microscopique

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

ARN<em&gt; In situ</emHybridation&gt; en embryons entiers de montage et histologie Adapté pour les élasmobranches marins

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Os milieu conditionné: Préparation et essais biologiques

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Préparation d&#39;échantillons pour l&#39;analyse de masse Cytométrie

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

Une approche alternative pour la préparation de l&#39;échantillon avec une faible Nombre de cellules d&#39;analyse TEM

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Un guide de sectionnement, de coring et de traitement d’image pour l’approvisionnement et l’analyse d’échantillons d’os cortical à haut débit pour le micro-CT synchrotron

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Prélèvement de tissus et extraction d’ARN de l’articulation ostéoarthritique humaine du genou

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

Utilisation d’un analyseur de flux métabolique cellulaire en temps réel pour surveiller la bioénergétique des ostéoblastes

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...