Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Die Autoren bedanken sich bei der Unterstützung von Frau Sue Connell für ihr Know-how erkennen in Harz eingebettet und Frau Stephania Gräber für ihre Labor-Know-how. Die Autoren bedanken sich bei Professor Frank Kandziora und Dr. Marie-Anne Polboth für ihre Ratschläge danken. </p>

<ol><li> Das Gewebe wird in einem geschlossenen Behälter mit 10% Phosphat-gepufferter Formalin-Lösung <sup>3</sup> platziert. Stellen Sie sicher, minimal Einwirkung von Licht, wenn Fluorochrom-Analyse durchgeführt werden, da die Fluorochrome lichtempfindlich sind. </li><li> Stellen Sie die Ausrichtung des Gewebes erforderlich. </li><li> Schneiden Sie die Probe auf Größe, in der richtigen Ausrichtung, mit einer Bandsäge. Stellen Sie sicher, Sicherheitsmaßnahmen eingehalten werden. Die Probe wird dann in eine undurchsichtige Behälter gele...

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	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Lösungsmittel:</u> <ul><li> 10% Normal-Buffered Formalin, Ethanol, Xylol und Butanol Säure <br /> Alle Histologie grade, schwefelfrei. <br /> GRALE Scientific Pty Ltd <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Schimmelpilze:</u> <ul><li> Peel entfernt, Kunststoffformen <br /> GRALE Scientific </li></ul> <u>Slides:</u> <ul><li> SuperFrost Plus Objektträger <br /> Lomb Scientific Pty Ltd <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Harz:</u> <ul><li> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Sichern blockieren Resin-Technovit 3040 Histo-Block <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Stains</u> <br /> <span>(Reagenzien aus GRALE Scientific)</span> <p> Goldner ist Trichrom </li><p style="margin-left:40px;"> 1. Weigert Eisen Hämatoxilin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> a) Hämatoxilin Lösung </td></tr><tr><td> Hämatoxilin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Absoluter Alkohol </td><td> 100ml </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Eisen-Lösung </td></tr><tr><td> 30% ige wässrige Eisenchlorid </td><td> 4mL </td></tr><tr><td> Salzsäure (konzentriert) </td><td> 1ml </td></tr><tr><td> destilliertem Wasser </td><td> 95ml </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Filtriert und zu gleichen Volumen Hämatoxilin unmittelbar vor verwendet Fleck. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Ponceau-Fuchsin-azophloxin Stammlösungen </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Ponceau de Xylidin Lösung </td></tr><tr><td> Ponceau de Xylidin </td><td> 0.75g </td></tr><tr><td> Säure fuchsion </td><td> 0.25g </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> 1ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mischen, und fügen Sie destilliertes Wasser (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) azophloxin Lösung </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> 0,6 ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mischen, und fügen Sie destilliertes Wasser (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> c) Letzter Arbeitstag Färbelösung </td></tr><tr><td> Ponceau-Fuchsin-Lösung </td><td> 5-10ml </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 0,2% Essigsäure-Lösung </td><td> 88ml </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Light Green-Lösung </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Light Green </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> 1ml </td></tr><tr><td colspan="2"> Mix, und fügen Sie destilliertes Wasser (500 ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic Säure-Orange G-Lösung </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Phosphormolybdänsäure </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Orange G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> Man löst in 500 ml destilliertem Wasser und fügen Kristall Thymol. </td></tr></table><p> Von Kossa Stain </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1% ige wässrige Silbernitratlösung </td></tr><tr><td> 2,5% Natriumthiosulfat </td></tr><tr><td> 1% Safranin O </td></tr></table><p> Alcianblau Fleck </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Alcianblau 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> 3% Essigsäure-Lösung </td><td> 100ml </td></tr></table><p> Hämatoxilin und Eosin-Färbung </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Harris Hämatoxilin </td></tr><tr><td> Hämatoxilin </td><td> 2.5g </td></tr><tr><td> Absolute Alkohol </td><td> 25ml </td></tr><tr><td> Potassium Alum </td><td> 50g </td></tr><tr><td> destilliertem Wasser </td><td> 500ml </td></tr><tr><td> Quecksilberoxid </td><td> 1,25 g OR </td></tr><tr><td> Natriumjodat </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Eisessig </td><td> 20mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Eosin-Lösung </td></tr><tr><td colspan="2"> Kommerziell hergestellte Eosin verwendet wurde. </td></tr></table><p> Alle Flecken Farbstoffpulvern sind Gurr Farbstoffpulvern. <br /> Alle Reagenzien sind analytische Reagenzien und nicht Lab Reagenzien </p><p> <u>Fluorochrome</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Hersteller </td><td> Fluorochrom </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Calcein Grün </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Alizarin-Komplexon </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet Australia, Victoria </td><td> Oxytetracyclin <br /> (Aus dem Regal antimikrobiellen Wirkstoff) </td><td> Handelsname; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Nichtentkalktem Knochenhistologie zeigt die Mikroarchitektur des Knochens. Es zeigt sowohl die mineralisierten und zellulären Bestandteile des Knochens, die wichtige Informationen auf den Knochenumbau oder Knochenbildung und Resorption zur Verfügung stellt. Dies hat enorme Bedeutung in einer Vielzahl von klinischen und wissenschaftlichen Anwendungen. Es liefert schöne Bilder <sup>1</sup> und ermöglicht Techniken wie Fluorochrom Beurteilung und Histomorphometrie <sup>2.</sup> Fluorochrom-Analyse ist eine Technik, bei der Fluoreszenz-Farbstoffe, die Kalzium binden zu einem bestimmten Zeitpunkt, der für die Quantifizierung der Menge der Mineralisierung können an diesem bestimmten Zeitpunkt gespritzt werden. Histomorphometrisch ist ein Prozess des Knochen-Quantifizierung auf der mikroskopischen Ebene. </p><p class="jove_content"> Performing nichtentkalktem Knochenhistologie ist technisch anspruchsvoll, vor allem bei großformatigen Proben. Es erfordert Veränderungen in Technik von den in Standard-Paraffin eingebetteten Histologie verwendet. Dieses Video zeigt den Prozess der Herstellung guter Qualität Abschnitte und zeigt die technischen Schwierigkeiten und Methoden, mit denen sie zu überwinden. Probenvorbereitung, Fixierung und Verarbeitung sind mit einer ähnlichen Weise wie andere Weichteile, aber aufgrund der Dichte und eine geringere Durchlässigkeit des Knochens erheblich länger Fixierung und Verarbeitung gefordert sind, oft unter mehreren Wochen erreicht. Embedding erfolgt über ein Trägermedium mit ähnlichen oder gleichen Härte und Dichte des Knochens wie Methacrylat-Harze, aber im Gegensatz zu Paraffin Infiltration und Einbettung, ist dies ein irreversibler Schritt. Schnitte können durch Schleifen, die zu einer dickeren Abschnitt, der optimal für Studien wie Fluorochrom Analyse erreicht werden. Dies ist am besten mit einem Diamant-Trennscheibe auf einem macrotome. Alternativ können dünnere Abschnitte für die Lichtmikroskopie hergestellt werden und erreichen Sie dies über einen Schlitten Mikrotom mit einem sehr scharfen Messer. Der Schlitten Mikrotom bietet die zusätzliche Festigkeit und Stabilität für große, harte Blöcke benötigt. Resin eingebettet Abschnitte können mit einer Vielzahl von Flecken, die gezeigt gefärbt werden. </p>

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Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Nichtentkalktem Knochenhistologie liefert wichtige Informationen für eine Vielzahl von klinischen und wissenschaftlichen Anwendungen. Es ist technisch anspruchsvoll, vor allem bei großformatigen Proben. Dieses Video zeigt den Prozess der Herstellung guter Qualität Abschnitte und zeigt die technischen Schwierigkeiten und Methoden, mit denen sie zu überwinden.</p>

Nichtentkalktem Knochen Vorbereitung für Histologie, Histomorphometrisch und Fluorochrom Analysis

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Die Herstellung von primären hämatopoetischen Zellkulturen aus Knochenmark der Maus für die Elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Forschung

Biologie

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Eine Neuronale und Astrocyte Co-Kultur-Assay für High Content Analyse der Neurotoxizität

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Vorbereitung von Adult<em> Drosophila</em> Augen für Thin Schnitte und mikroskopische Untersuchung

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung in whole mount Embryonen und Histologie für Marine Elasmobranchs Angepasst

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Knochen konditioniertem Medium: Vorbereitung und Bioassay

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Probenvorbereitung für die Massen Cytometry-Analyse

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

Ein alternativer Ansatz für die Probenvorbereitung mit geringer Zellzahl für die TEM-Analyse

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Gewebeentnahme und RNA-Extraktion aus dem humanen osteoarthritischen Kniegelenk

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

Verwendung eines Echtzeit-Zellstoffwechselflussanalysators zur Überwachung der Bioenergetik des Osteoblast

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...