Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> המחברים רוצים להכיר את הסיוע של גב &#39;סו Connell עבור המומחיות שלה הטבעה שרף גב קברים סטפניה עבור המומחיות שלה במעבדה. המחברים מבקשים להודות פרופסור פרנק Kandziora ד&quot;ר מארי אן Polboth עבור עצתם. </p>

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמה ממוקם מיכל אטום המכיל פוספט 10% שנאגרו פתרון פורמלין <sup>3.</sup> להבטיח חשיפה מינימלית לאור, אם ניתוח fluorochrome יש לבצעם, כמו fluorochromes הם רגישים לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקם אשר האוריינטציה של רקמת יידרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך את הדגימה לגוד...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>ממיסים:</u> <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10% Normal שנאגרו חומצה אתנול פורמלין, קסילן Butanol <br /> כל כיתה היסטולוגיה, ללא גופרית. <br /> Grale מדעי Pty בע&quot;מ <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Moulds:</u> <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיל משם, תבניות פלסטיק <br /> Grale מדעי </li></ul> <u>שקופיות:</u> <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SUPERFROST PLUS שקופיות מיקרוסקופ <br /> לומב מדעי Pty בע&quot;מ <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>שרף:</u> <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גיבוי שרף-Technovit 3040 בלוק בלוק histo <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>כתמים</u> <br /> <span>(ריאגנטים מ Grale מדעי)</span> <p style=";text-align:right;direction:rtl"> Trichrome גולדנר של כתם </li><p style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl"> 1. Weigert של ברזל hemotoxylin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> א) Hemotoxylin פתרון </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Absolute אלכוהול </td><td> 100 מ&quot;ל </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> ב) ברזל פתרון </td></tr><tr><td> 30% כלור וברזל מימית </td><td> 4mL </td></tr><tr><td> חומצה הידרוכלורית (מרוכז) </td><td> 1mL </td></tr><tr><td> מים מזוקקים </td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" > מסוננים והוסיף נפח שווה של hemotoxylin מיד לפני כתם בשימוש. </p><p style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" > 2. Ponceau-fuchsin-azophloxin מניות פתרונות </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> א) Ponceau דה פתרון xylidine </td></tr><tr><td> Ponceau דה xylidine </td><td> 0.75g </td></tr><tr><td> חומצה fuchsion </td><td> 0.25g </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> לערבב, ולהוסיף מים מזוקקים (100 מ&quot;ל) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> ב) azophloxin פתרון </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> 0.6mL </td></tr><tr><td colspan="2"> לערבב, ולהוסיף מים מזוקקים (100 מ&quot;ל) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> ג) פתרון סופי עבודה כתם </td></tr><tr><td> Ponceau-fuchsin פתרון </td><td> 5-10ml </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2ml </td></tr><tr><td> 0.2% חומצה אצטית פתרון </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl"> 3. הפתרון אור ירוק </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td> אור ירוק </td><td> 1g </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> לערבב, ולהוסיף מים מזוקקים (500ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl"> 4. Phophomolybdic חומצה אורנג&#39; G פתרון </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td> Phosphomolybdic חומצה </td><td> 3g </td></tr><tr><td> אורנג&#39; G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> להמיס 500ml של מים מזוקקים ולהוסיף תימול קריסטל. </td></tr></table><p style=";text-align:right;direction:rtl"> פון Kossa כתמים </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td> 1% חנקת הכסף מימית </td></tr><tr><td> נתרן 2.5% thiosulfate </td></tr><tr><td> 1% safranin O </td></tr></table><p style=";text-align:right;direction:rtl"> Alcian כתם כחול </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td> Alcian כחול 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> 3% חומצה אצטית פתרון </td><td> 100 מ&quot;ל </td></tr></table><p style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemotoxylin ו Eosin כתם </p><table style="margin-left:40px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> א) האריס hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2.5G </td></tr><tr><td> Absolute אלכוהול </td><td> 25mL </td></tr><tr><td> אשלגן אלום </td><td> 50 גרם </td></tr><tr><td> מים מזוקקים </td><td> 500ml </td></tr><tr><td> כספיתי תחמוצת </td><td> 1.25g או </td></tr><tr><td> נתרן iodate </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> חומצה אצטית קרחונית </td><td> 20mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> ב) Eosin פתרון </td></tr><tr><td colspan="2"> Eosin המיוצר מסחרית היה בשימוש. </td></tr></table><p style=";text-align:right;direction:rtl"> כל אבקות צבע הכתם הם Gurr אבקות צבע. <br /> ריאגנטים כל ריאגנטים אנליטיים, ולא מעבדת ריאגנטים </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> <u>Fluorochromes</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td><br /> יצרן </td><td> Fluorochrome </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> סיגמא אולדריץ, סידני </td><td> Calcein גרין </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> סיגמא אולדריץ, סידני </td><td> Alizarin Complexone </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet אוסטרליה, ויקטוריה </td><td> Oxytetracycline <br /> (את התרופה מדף מיקרוביאלית) </td><td> Tradename; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> היסטולוגיה עצם Undecalcified מדגים את המיקרו ארכיטקטורה של העצם. זה מראה גם את הרכיבים mineralized ואת התאי של העצם, אשר מספק מידע חיוני על מחזור או עצם היווצרות העצם resorption. זה יש חשיבות עצומה במגוון רחב של יישומים קליניים ומחקר. זה מניב תמונות יפות <sup>1</sup> ומאפשר טכניקות כגון הערכה fluorochrome ו histomorphometry <sup>2.</sup> ניתוח Fluorochrome היא טכניקה שבה צבעי ניאון אשר נקלטות על ידי סידן מוזרקים בנקודת זמן מסוימת, אשר מאפשרת כימות של כמות מינרליזציה באותו זמן נתון. Histomorphometry זהו תהליך של כימות העצם ברמה המיקרוסקופית. </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> עצם ביצוע היסטולוגיה undecalcified מבחינה טכנית מאתגרת, במיוחד עם דגימות גודל גדול. זה דורש שינויים טכניקה מאלה המשמשים פרפין תקן מוטבע היסטולוגיה. וידאו זה ממחיש את תהליך ייצור חלקים באיכות טובה מדגים את הקשיים הטכניים ושיטות שבה להתגבר עליהם. הכנת הדגימה, קיבעון ועיבוד מושגות עם באופן דומה רקמות רכות אחרות, אולם בשל לצפיפות וחדירות התחתון של עצם ניכרת קיבעון ארוך פי עיבוד נדרשים, לעיתים לוקח מספר שבועות. הטבעת מושגת באמצעות מדיום תמיכה עם קשיות דומה או שווה צפיפות העצם כגון methacrylate מבוססי שרפים, אך בניגוד חדירת פרפין והטבעה, זהו צעד בלתי הפיך. חתך ניתן להשיג על ידי שחיקה אשר מייצרת חלק עבה, שהוא אופטימלי עבור מחקרים כגון ניתוח fluorochrome. זו מושגת באמצעות מיטב להב היהלום על macrotome. לחלופין, קטעים רזה יכול להיות מיוצר עבור מיקרוסקופ אור זו מושגת באמצעות microtome המזחלת עם סכין חדה מאוד. Microtome המזחלת מספק את הכוח יציבות נוספים הדרושים, בלוקים גדולים קשה. שרף חלקים מוטבע יכול להיות מוכתם עם מגוון רחב של כתמים, אשר הפגינו. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">היסטולוגיה עצם Undecalcified מספק מידע חשוב עבור מגוון של יישומים קליניים ומחקר. זה מאתגר מבחינה טכנית, בעיקר עם דגימות גודל גדול. וידאו זה ממחיש את תהליך ייצור חלקים באיכות טובה מדגים את הקשיים הטכניים ושיטות שבה להתגבר עליהם.</p>

עצם הכנת Undecalcified עבור היסטולוגיה, Histomorphometry וניתוח Fluorochrome

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

הכנת ראשי בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine עבור electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

הכנת למבוגרים<em> תסיסנית</em> עיניים עבור חתך דק ניתוח מיקרוסקופי

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

רנ&quot;א<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה בעוברי הר שלמים והיסטולוגיה הסלולרית מותאמת לElasmobranchs הימי

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

בינוני אוויר עצם: הכנה ומבדק

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

לדוגמא הכנה לניתוח Cytometry Mass

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

גישה חלופית עבור הכנת דוגמאות עם מספר סלולרי נמוך עבור ניתוח TEM

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

מדריך מקטעים, קורינג ועיבוד תמונה לרכש וניתוח מדגם עצם קליפת המוח בעל תפוקה גבוהה עבור מיקרו-CT של Synchrotron

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

איסוף רקמות ומיצוי RNA ממפרק הברך האוסטאוארטכרטית האנושי

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

שימוש במנתח שטף מטבולי של תאים בזמן אמת לניטור ביו-אנרגיה של אוסטאובלסט

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...