Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content">著者は、彼女の研究室の専門知識のための樹脂の埋め込みとMsステファニの墓の中に彼女の専門知識にMSスーコネルの支援に感謝したい。著者は、彼らのアドバイスを教授フランクKandzioraと博士マリー=アンヌPolbothに感謝したいと思います。 </p>

<ol><li>組織は、10％のリン酸塩を含む密閉容器にホルマリン溶液<sup>3を</sup>バッファに配置されます。蛍光分析は蛍光色素が光に敏感であるため、実行する場合は、光に最小限の露出を確認してください。 </li><li>組織の方向が要求される確立。 </li><li>サイズの試料をトリミング、正しい向きで、バンドを使用して見た。安全対策が守られることを確認します。試料はその後不透明な容器に入れている、の量は?...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>溶剤：</u> <ul><li>通常の10％ホルマリン、エタノール、キシレン、ブタノール酸バッファ付き<br />すべての組織学的グレード、硫黄フリー。 <br /> Grale科学Pty株式会社<br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>鋳型：</u> <ul><li>離れて皮をむき、プラスチック金型<br /> Graleサイエンティフィック</li></ul> <u>スライド：</u> <ul><li> SUPERFROST PLUS顕微鏡のスライド<br />ボシュロム科学Pty株式会社<br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>樹脂：</u> <ul><li> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br />ヘレウスKulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li>バッキングブロック樹脂Technovit 3040ヒストグラムブロック<br />ヘレウスKulzer </li></ul> <u>汚れ</u> <br /> <span>（Grale科学から試薬）</span> <p>ゴールドナーのトリクローム染色</li><p style="margin-left:40px;"> 1。ワイゲルトの鉄hemotoxylin（DeGroat） </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> A）Hemotoxylinソリューション</td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1グラム</td></tr><tr><td>無水アルコール</td><td> 100mLの</td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> B）鉄溶液</td></tr><tr><td> 30％水性塩化第二鉄</td><td> 4mlの</td></tr><tr><td>塩酸（濃縮） </td><td> 1mLの</td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" >染色が使用されてすぐに前に濾過し、hemotoxylinの等量に追加。 </p><p style="margin-left:40px;" > 2。ポンソー-フクシン- azophloxin株式ソリューション</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> A）ポンソーデキシリジンソリューション</td></tr><tr><td>ポンソーデキシリジン</td><td> 0.75グラム</td></tr><tr><td>酸fuchsion </td><td> 0.25グラム</td></tr><tr><td>酢酸</td><td> 1mLの</td></tr><tr><td colspan="2">ミックス、および追加蒸留水（100ml） </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> B）azophloxinソリューション</td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5グラム</td></tr><tr><td>酢酸</td><td> 0.6mL </td></tr><tr><td colspan="2">ミックス、および追加蒸留水（100ml） </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> C）決勝は、染色液を進め</td></tr><tr><td>ポンソー-フクシン液</td><td> 5 - 10mLを</td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2mLの</td></tr><tr><td> 0.2パーセント酢酸溶液</td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3。ライトグリーンソリューション</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td>ライトグリーン</td><td> 1グラム</td></tr><tr><td>酢酸</td><td> 1mLの</td></tr><tr><td colspan="2">ミックス、および蒸留水を（500ミリリットル）に追加</td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4。 Phophomolybdic酸オレンジGソリューション</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td>リンモリブデン酸</td><td> 3グラム</td></tr><tr><td>オレンジG </td><td> 2グラム</td></tr><tr><td colspan="2">蒸留水の500ミリリットルに溶解し、結晶チモールを追加。 </td></tr></table><p>フォンコッサ染色</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1％水溶液硝酸銀</td></tr><tr><td> 2.5％チオ硫酸ナトリウム</td></tr><tr><td> 1パーセントサフラニンO </td></tr></table><p>アルシアンブルー染色</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td>アルシアンブルー8GX </td><td> 1グラム</td></tr><tr><td> 3％酢酸溶液を</td><td> 100mLの</td></tr></table><p> Hemotoxylinとエオシン染色</p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a）のハリスのhemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2.5グラム</td></tr><tr><td>絶対アルコール</td><td> 25mL </td></tr><tr><td>カリウムミョウバン</td><td> 50グラム</td></tr><tr><td>蒸留水</td><td> 500mLに</td></tr><tr><td>酸化水銀</td><td> 1.25グラムOR </td></tr><tr><td>ナトリウムヨウ素酸</td><td> 0.5グラム</td></tr><tr><td>氷酢酸</td><td> 20mlの</td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> B）エオシン液</td></tr><tr><td colspan="2">市販のエオシンを使用した。 </td></tr></table><p>すべての染色色素粉末は、ガー色素粉末である。 <br />すべての試薬は分析用試薬であり、ではなくラボ試薬</p><p> <u>蛍光色素</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br />メーカー</td><td>蛍光色素</td><td>カタログ番号</td></tr><tr><td> Sigma - Aldrich社、シドニー</td><td>カルセイングリーン</td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma - Aldrich社、シドニー</td><td>アリザリンコンプレクソン</td><td> A3882 </td></tr><tr><td>インターオーストラリア、ビクトリア</td><td>オキシテトラサイクリン<br /> （棚抗菌薬オフ） </td><td>商品名; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Undecalcified骨組織は、骨のマイクロアーキテクチャを示しています。それは、骨代謝や骨形成と骨吸収に関する重要な情報を提供する骨の鉱化と細胞成分の両方を示しています。これは、臨床と研究のさまざまなアプリケーションにおいて非常に大きな重要性を持っています。それは、美しい画像<sup>1を</sup>得られますし、そのような蛍光色素の評価や組織形態計測<sup>2</sup>のようなテクニックが可能になります。蛍光色素の分析ではカルシウムに結合する蛍光色素がその時点で鉱化量の定量化を可能にする特定の時点、で注入されている技術です。組織形態計測は、顕微鏡レベルで骨の定量化のプロセスです。 </p><p class="jove_content"> undecalcified骨の組織学を実行すると、特に大きなサイズの標本で、技術的に困難です。それは組織学を埋め込まれた標準的なパラフィンで使用されているものから技術の変化を必要とします。このビデオでは、良質のセクションを生成するプロセスを示していますし、それらを克服することで技術的な問題とメソッドを示しています。試料の準備、固定と処理が他の軟部組織と同様の方法で達成されている、しかし密度に起因すると骨の低透過性がかなり長く固定して、処理時間が必要とされる、多くの場合、数週間服用。埋め込みは、メタクリレート系樹脂などの骨に似てたり、同じ硬さと密度との支持体を使用して達成が、パラフィン浸透および埋め込みとは異なり、これは不可逆的な段階です。切片は、蛍光分析などの研究に最適な厚いセクションを、産生する研削することによって達成することができます。これは、最善のmacrotomeにダイヤモンドブレードを使用して実現されます。また、薄い切片を光学顕微鏡のために製造することができ、これは非常に鋭い刃でそりのミクロトームを使用して実現されます。そりミクロトームは、大規模な、ハードブロックに必要な追加の強度と安定性を提供します。樹脂埋込みのセクションは、実証されている汚れの様々な、で染色することができます。 </p>

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Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Undecalcified骨の組織学、臨床と研究のさまざまなアプリケーションのための重要な情報を提供します。それは、特に大きなサイズの標本で、技術的に困難です。このビデオでは、良質のセクションを生成するプロセスを示していますし、それらを克服することで技術的な問題とメソッドを示しています。</p>

組織学、組織形態計測および蛍光色素分析のためのUndecalcified骨の準備

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

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RNAを<em&gt;その場</emホールマウント胚および細胞組織学で&gt;ハイブリダイゼーションは、海洋軟骨魚類に適合した

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高スループットコルティカル骨サンプルの採取と分析のための断面化、スコアリング、画像処理ガイド

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Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

ヒト変形性膝関節からの組織採取とRNA抽出

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

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リアルタイム細胞代謝フラックス分析装置を使用して骨芽細胞生体エネルギーをモニタリング

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