Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Os autores gostariam de agradecer o apoio da Sra. Sue Connell por sua especialização na incorporação de resina e Túmulos Ms Stephania para sua perícia em laboratório. Os autores gostariam de agradecer ao professor Frank Kandziora e Dr. Marie-Anne Polboth para os seus conselhos. </p>

<ol><li> O tecido é colocado em um recipiente selado contendo fosfato tamponado a 10% solução de formalina <sup>3.</sup> Garantir que a exposição mínima à luz, se a análise fluorocromo é para ser realizado, como a fluorocromos são sensíveis à luz. </li><li> Estabelecer qual a orientação do tecido serão necessários. </li><li> Apare a amostra com o tamanho, na orientação correta, usando uma serra de fita. Medidas de garantir a segurança são cumpridas. A amostra é então colocada em um recipiente opaco, cujo volume deve ser de...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Solventes:</u> <ul><li> 10% normal Buffered ácido formalina, Xileno Etanol e Butanol <br /> Todos grau histológico, livre de enxofre. <br /> GRALE Scientific Pty Ltd. <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Moldes:</u> <ul><li> Descascar, moldes de plástico <br /> GRALE Scientific </li></ul> <u>Slides:</u> <ul><li> Microscópio SuperFrost slides PLUS <br /> Lomb Scientific Pty Ltd. <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Resina:</u> <ul><li> Technovit GlycolMethacrylate 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Fazendo bloco de resina-Technovit 3040 bloco Histo <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Manchas</u> <br /> <span>(Reagentes de GRALE Científica)</span> <p> Trichrome Goldner da mancha </li><p style="margin-left:40px;"> 1. Ferro Weigert hemotoxylin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> a) solução Hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Álcool absoluto </td><td> 100mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Solução de Ferro </td></tr><tr><td> 30% de cloreto férrico aquosa </td><td> 4mL </td></tr><tr><td> Ácido clorídrico (concentrado) </td><td> 1mL </td></tr><tr><td> água destilada </td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Filtrado e adicionado volume igual de hemotoxylin imediatamente antes mancha usado. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Ponceau-fucsina-azophloxin soluções estoque </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) solução de Ponceau xilidina </td></tr><tr><td> Ponceau de xilidina </td><td> 0,75 g </td></tr><tr><td> fuchsion ácido </td><td> 0.25g </td></tr><tr><td> Ácido acético </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> mix, e adicionar água destilada (100ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) solução azophloxin </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Ácido acético </td><td> 0,6 ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mix, e adicionar água destilada (100ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> c) Final solução de trabalho mancha </td></tr><tr><td> Ponceau-fucsina solução </td><td> 5-10ml </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2mL </td></tr><tr><td> Solução de ácido acético 0,2% </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Solução Green Light </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Luz verde </td><td> 1g </td></tr><tr><td> ácido acético </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> Misture e adicione água destilada (500ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic ácido-Orange solução G </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Ácido fosfomolíbdico </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Laranja G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> Dissolver em 500mL de água destilada e adicionar timol cristal. </td></tr></table><p> Von Kossa Stain </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1% de nitrato de prata aquoso </td></tr><tr><td> Tiossulfato de sódio 2,5% </td></tr><tr><td> 1% de safranina O </td></tr></table><p> Alcian mancha azul </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Alcian blue 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Solução de ácido acético 3% </td><td> 100mL </td></tr></table><p> Hemotoxylin e eosina </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) hemotoxylin Harris </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2.5g </td></tr><tr><td> Álcool absoluto </td><td> 25mL </td></tr><tr><td> Alum de potássio </td><td> 50g </td></tr><tr><td> água destilada </td><td> 500mL </td></tr><tr><td> óxido de mercúrio </td><td> 1,25 g OR </td></tr><tr><td> Iodato de sódio </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> 20mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) solução de Eosina </td></tr><tr><td colspan="2"> Eosina produzido comercialmente foi usado. </td></tr></table><p> Todos os pós corante mancha são pós Gurr corante. <br /> Todos os reagentes são reagentes analíticos, e não Lab reagentes </p><p> <u>Fluorocromos</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Fabricante </td><td> Fluorocromo </td><td> Número Catálogo </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Calceína Verde </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Alizarina complexona </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet Austrália, Victoria </td><td> Oxitetraciclina <br /> (Fora da droga antimicrobiana prateleira) </td><td> Comercial; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Histologia óssea Undecalcified demonstra a micro-arquitetura do osso. Ele mostra tanto os componentes mineralizados e celulares do osso, que fornece informações vitais sobre o turnover ósseo ou formação e reabsorção óssea. Isto tem uma enorme importância em uma variedade de aplicações clínicas e de pesquisa. Ele produz belas imagens <sup>1</sup> e permite técnicas como a avaliação fluorocromo e histomorfometria <sup>2.</sup> Análise fluorocromo é uma técnica onde corantes fluorescentes que se ligam ao cálcio são injetados em um ponto determinado momento, que permite a quantificação da quantidade de mineralização naquele momento. Histomorfometria é um processo de quantificação do osso ao nível microscópico. </p><p class="jove_content"> Realizar histologia óssea undecalcified é tecnicamente desafiador, especialmente com amostras de grande porte. Ela exige variações na técnica dos utilizados em parafina padrão incorporado histologia. Este vídeo ilustra o processo de produção de seções de boa qualidade e demonstra as dificuldades técnicas e métodos com os quais a superá-los. Preparação de amostras de fixação e processamento são alcançados com uma forma semelhante a outros tecidos moles, no entanto, devido à densidade e menor permeabilidade do osso consideravelmente maior fixação e os tempos de processamento são necessárias, muitas vezes levando várias semanas. Incorporação é alcançado usando um meio de suporte com dureza semelhantes ou iguais e densidade do osso, como metacrilato de resinas à base, mas ao contrário de infiltração de parafina e incorporação, este é um passo irreversível. Seccionamento pode ser conseguido através de moagem, que produz uma espessa seção, que é ótimo para os estudos, como a análise fluorocromo. Este é o melhor conseguido usando uma lâmina de diamante em uma macrotome. Alternativamente, as seções mais finas podem ser produzidas por microscopia de luz e isso é conseguido usando um micrótomo trenó com uma lâmina muito afiada. O micrótomo sledge fornece a maior resistência e estabilidade necessária para grandes blocos rígidos. Seções de resina incorporado pode ser manchado com uma variedade de manchas, que são demonstradas. </p>

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Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Histologia óssea Undecalcified fornece informações importantes para uma variedade de aplicações clínicas e de pesquisa. É tecnicamente desafiador, especialmente com amostras de grande porte. Este vídeo ilustra o processo de produção de seções de boa qualidade e demonstra as dificuldades técnicas e métodos com os quais a superá-los.</p>

Preparação óssea Undecalcified de Histologia, Histomorfometria e Análise Fluorocromo

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

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