Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Авторы выражают признательность за помощь г-жа Сью Коннелл для нее опыт в вложение смолы и г-жи Стефании гробниц для нее лабораторной экспертизы. Авторы хотели бы поблагодарить профессора Франка Kandziora и д-р Мари-Анн Polboth за их советы. </p>

<ol><li> Ткань помещается в герметичный контейнер, содержащий 10% фосфатным буферным раствором формалина <sup>3.</sup> Обеспечить минимальное воздействие света, если флуорохромом анализ должен быть выполнен, так как флуорохромами являются светочувствительными. </li><li> Установить, какая ориентация ткани потр?...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Растворители:</u> <ul><li> 10% Нормальные буферный формалин, этанол, бутанол и ксилола кислоты <br /> Все классе гистологии, без серы. <br /> ГДООВ Научно Pty ООО <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Формы:</u> <ul><li> Пил же, пластиковые формы <br /> Научно ГДООВ </li></ul> <u>Слайды:</u> <ul><li> SuperFrost слайды PLUS микроскоп <br /> Lomb Научно Pty ООО <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Смола:</u> <ul><li> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Резервное Блок Смола-Technovit 3040 историка блок <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Пятна</u> <br /> <span>(Реагенты от ГДООВ Scientific)</span> <p> Trichrome Голднер это пятно </li><p style="margin-left:40px;"> 1. Вайгерт железной hemotoxylin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> а) решение Hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Чистый спирт </td><td> 100 мл </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> б) Железная решения </td></tr><tr><td> 30% водный раствор хлорида железа </td><td> 4 мл </td></tr><tr><td> Соляная кислота (концентрированный) </td><td> 1 мл </td></tr><tr><td> дистиллированная вода </td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Фильтрованный и добавляют в равном объеме hemotoxylin непосредственно перед пятно используется. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Пунцовый-фуксин-azophloxin растворы </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> а) пунцовый де ксилидин решение </td></tr><tr><td> Пунцовый де ксилидин </td><td> 0.75g </td></tr><tr><td> кислоты fuchsion </td><td> 0,25 </td></tr><tr><td> Уксусная кислота </td><td> 1 мл </td></tr><tr><td colspan="2"> перемешать и добавить дистиллированной воды (100 мл) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> б) решение azophloxin </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0,5 г </td></tr><tr><td> Уксусная кислота </td><td> 0.6mL </td></tr><tr><td colspan="2"> перемешать и добавить дистиллированной воды (100 мл) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> в) Окончательный рабочий пятно решение </td></tr><tr><td> Пунцовый-фуксином решение </td><td> 5-10 мл </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2 мл </td></tr><tr><td> 0,2% раствор уксусной кислоты </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Светло-зеленый решения </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Светло-зеленый </td><td> 1g </td></tr><tr><td> уксусная кислота </td><td> 1 мл </td></tr><tr><td colspan="2"> Перемешать, и добавить дистиллированной воды (500 мл) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic кислотно-оранжевый G решение </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Фосфорномолибденовой кислоты </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Оранжевый G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> Растворить в 500 мл дистиллированной воды и добавляют кристаллический тимол. </td></tr></table><p> Фон Косса пятно </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1% водного раствора нитрата серебра </td></tr><tr><td> 2,5% раствор натрия тиосульфата </td></tr><tr><td> 1% сафранина O </td></tr></table><p> Альциановый синевы </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Альциановый голубой 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> 3% раствор уксусной кислоты </td><td> 100 мл </td></tr></table><p> Hemotoxylin и эозином пятно </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> а) Харриса hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2,5 г </td></tr><tr><td> Чистый спирт </td><td> 25 мл </td></tr><tr><td> Алюмокалиевые квасцы </td><td> 50г </td></tr><tr><td> дистиллированная вода </td><td> 500 мл </td></tr><tr><td> оксид ртути </td><td> 1.25 ИЛИ </td></tr><tr><td> Натрий йодат </td><td> 0,5 г </td></tr><tr><td> Ледяная уксусная кислота </td><td> 20 мл </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> б) решение Eosin </td></tr><tr><td colspan="2"> Промышленно производимые Eosin был использован. </td></tr></table><p> Все пятна порошков красителей Gurr красителя порошков. <br /> Все реагенты аналитических реагентов, а не Лаборатории реагентов </p><p> <u>Флуорохромами</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Производитель </td><td> Флюорохром </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Сидней </td><td> Кальцеин Зеленый </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Сидней </td><td> Ализарин комплексона </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Интервет Австралия, Виктория </td><td> Окситетрациклин <br /> (С полки антимикробного препарата) </td><td> Торговое название; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Undecalcified гистологии костей показывает, микро-архитектуру кости. Он показывает, как минерализованные и клеточных компонентов кости, что обеспечивает жизненно важную информацию об обороте кости или образования и резорбции кости. Это имеет огромное значение в различных клинических и научных исследований. Она дает прекрасные образы <sup>1</sup> и позволяет такие методы, как флуорохромом оценки и гистоморфометрии <sup>2.</sup> Флуорохромами анализ техники, где флуоресцентные красители, которые связываются с кальцием вводятся в определенный момент времени, что позволяет количественно оценить количество минерализации в то время. Гистоморфометрии это процесс количественного кости на микроскопическом уровне. </p><p class="jove_content"> Выполнение undecalcified гистологии костей является технически сложной задачей, особенно в крупных особей размера. Это требует изменения техники от используемых в стандартных парафин гистологии. В этом видео показан процесс получения хороших разделы качества и демонстрирует технические трудности и методы их преодоления. Подготовка образца, фиксации и обработки достигаются при аналогично других мягких тканей, однако из-за плотности и нижней проницаемость костей значительно больше времени, фиксации и обработки пояс требуется, часто занимает несколько недель. Вложение достигается с помощью поддержки среду с таким же или близким твердость и плотность кости, такие как метакрилат основе смол, но в отличие от проникновения парафина и вложение, это необратимый шаг. Секционирование может быть достигнуто путем измельчения, которая производит толстый раздел, который является оптимальным для исследования, такие как флуорохромом анализа. Лучше всего это достигается с помощью алмаза лезвие на macrotome. Кроме того, тонкие разделы могут быть произведены для световой микроскопии и это достигается с помощью саней микротома с очень острым лезвием. Сани микротома обеспечивает дополнительную прочность и устойчивость, необходимые для больших, жестких блоков. Смола срезы могут быть окрашены в различные пятна, которые демонстрируются. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Undecalcified гистологии костей дает важную информацию для различных клинических и научных исследований. Это технически сложно, особенно крупные экземпляры размером. В этом видео показан процесс получения хороших разделы качества и демонстрирует технические трудности и методы их преодоления.</p>

Undecalcified Подготовка костей для гистологии, гистоморфометрии и флуорохромами Анализ

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Подготовка первичных гемопоэтических клеточных культур из костного мозга мышей для Электропорация

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Нейронов и астроцитов сотрудничеству культуры Пробирной высоких Анализ содержания Нейротоксичность

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Подготовка взрослых<em> Drosophila</em> Глаза для тонких Секционирование и микроскопический анализ

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

РНК<em&gt; В месте</em&gt; Гибридизации эмбрионов Всего в гору и сотовых гистологии адаптированный для морских хрящевых рыб

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Кость кондиционированной среды: Подготовка и биопроб

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Подготовка проб для анализа Масс-цитометрии

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

Альтернативный подход к Подготовка проб с низкой Количество сотовых для анализа ПЭМ

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Руководство по секционной обработке, корингу и обработке изображений для закупок и анализа образцов высокой пропускной способности кортикальной кости для синхротронной микро-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Сбор тканей и извлечение РНК из остеоартритного коленного сустава человека

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

Использование анализатора метаболического потока клеток в реальном времени для мониторинга биоэнергетики остеобластов

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...