Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Los autores desean agradecer la asistencia de la Sra. Sue Connell por su experiencia en la incrustación de resina y tumbas Sra. Stephania por su experiencia de laboratorio. Los autores desean agradecer al profesor Frank Kandziora y la Dra. Marie-Anne Polboth por sus consejos. </p>

<ol><li> El tejido se coloca en un recipiente sellado que contiene un 10% de tampón fosfato solución de formalina al <sup>3.</sup> Garantizar una mínima exposición a la luz, si el análisis fluorocromo se va a realizar, como los fluorocromos son sensibles a la luz. </li><li> Establecer que la orientación de los tejidos será necesario. </li><li> Desbastar la muestra con el tamaño, la orientación correcta, usando una sierra de cinta. Garantizar las medidas de seguridad se cumplen. La muestra se coloca en un recipiente opaco, el volumen de...

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	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Disolventes:</u> <ul><li> 10% normal formol, etanol, xileno y butanol ácido <br /> Todos los histología de grado, sin azufre. <br /> GRALE Ciencia Pty Ltd. <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Moldes:</u> <ul><li> Despegue, moldes de plástico <br /> GRALE Científico </li></ul> <u>Diapositivas:</u> <ul><li> Superfrost Plus portaobjetos <br /> Lomb Ciencia Pty Ltd. <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Resina:</u> <ul><li> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Respaldo de bloques de resina Technovit 3040 bloques Histo <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Las manchas</u> <br /> <span>(Reactivos de GRALE Científica)</span> <p> Tricrómico de Goldner mancha </li><p style="margin-left:40px;"> 1. Férrica de Weigert hematoxilina (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> a) hematoxilina solución </td></tr><tr><td> Hematoxilina </td><td> 1g </td></tr><tr><td> El alcohol absoluto </td><td> 100 ml </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Solución de Hierro </td></tr><tr><td> 30% de cloruro férrico acuoso </td><td> 4 ml </td></tr><tr><td> El ácido clorhídrico (concentrado) </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> agua destilada </td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Filtra y se añade a un volumen igual de hematoxilina inmediatamente antes de utilizar la mancha. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Ponceau-fucsina-azophloxin soluciones de archivo </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Ponceau xilidina de solución </td></tr><tr><td> Ponceau de xilidina </td><td> 0,75 g </td></tr><tr><td> ácido fuchsion </td><td> 0,25 g </td></tr><tr><td> El ácido acético </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mezclar y añadir agua destilada (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) azophloxin solución </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0,5 g </td></tr><tr><td> El ácido acético </td><td> 0,6 ml </td></tr><tr><td colspan="2"> mezclar y añadir agua destilada (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> c) Solución de trabajo de final de la mancha </td></tr><tr><td> Ponceau-fucsina solución </td><td> 5-10mL </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> 0,2% de solución de ácido acético </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Solución La luz verde </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Luz verde </td><td> 1g </td></tr><tr><td> ácido acético </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td colspan="2"> Mezclar y añadir agua destilada (500 ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic ácido-Orange G solución </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Fosfomolíbdico ácido </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Orange G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> Se disuelven en 500 ml de agua destilada y añadir timol cristal. </td></tr></table><p> Von Kossa </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> 1% de nitrato de plata acuoso </td></tr><tr><td> 2,5% de tiosulfato de sodio </td></tr><tr><td> 1% safranina O </td></tr></table><p> Alcian mancha azul </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Alcian blue 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> 3% de solución de ácido acético </td><td> 100 ml </td></tr></table><p> Hematoxilina y eosina </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) hematoxilina de Harris </td></tr><tr><td> Hematoxilina </td><td> 2.5g </td></tr><tr><td> Alcohol absoluto </td><td> 25 ml </td></tr><tr><td> Alumbre de potasio </td><td> 50g </td></tr><tr><td> agua destilada </td><td> 500 ml </td></tr><tr><td> óxido de mercurio </td><td> 1,25 g O </td></tr><tr><td> El yodato de sodio </td><td> 0,5 g </td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Eosina solución </td></tr><tr><td colspan="2"> Eosina producidos comercialmente se utilizó. </td></tr></table><p> Todos los polvos colorantes mancha se Gurr polvos colorantes. <br /> Todos los reactivos son reactivos para análisis, y no reactivos de laboratorio </p><p> <u>Fluorocromos</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Fabricante </td><td> Fluorocromo </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Calceína Verde </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Alizarina complexona </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet Australia, Victoria </td><td> Oxitetraciclina <br /> (De la droga útil a los antimicrobianos) </td><td> Nombre comercial; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Histología ósea descalcificados demuestra la microarquitectura del hueso. Muestra tanto los componentes mineralizados y celular del hueso, que proporciona información vital sobre el recambio óseo o formación y resorción ósea. Esto tiene una importancia enorme en una variedad de aplicaciones clínicas y de investigación. Se produce bellas imágenes <sup>1</sup> y permite técnicas tales como la evaluación y el fluorocromo histomorfometría <sup>2.</sup> Análisis fluorocromo es una técnica donde los tintes fluorescentes que se unen al calcio se inyectan en un momento determinado punto, lo que permite la cuantificación de la cantidad de mineralización en ese momento dado. Histomorfometría es un proceso de cuantificación de hueso a nivel microscópico. </p><p class="jove_content"> Realización de la histología del hueso descalcificados es técnicamente difícil, sobre todo con ejemplares de gran tamaño. Se requiere de variaciones en la técnica de los utilizados en parafina estándar integrado histología. Este vídeo muestra el proceso de producción de las secciones de buena calidad y demuestra las dificultades técnicas y métodos con los que para superarlos. La preparación de muestras, fijación y el procesamiento se obtienen con una forma similar a otros tejidos blandos, sin embargo debido a la densidad y baja permeabilidad de los huesos mucho más tiempo de fijación y los tiempos de procesamiento se requieren, a menudo tomando durante varias semanas. Incrustación se logra utilizando un medio de soporte con una dureza similar o igual y la densidad de los huesos, tales como resinas basadas en metacrilato, pero a diferencia de la infiltración de parafina y la inclusión, este es un paso irreversible. Seccionamiento se puede lograr mediante molienda que produce una sección más gruesa, lo cual es óptimo para los estudios como el análisis de fluorocromo. Esto se logra mejor usando una cuchilla de diamante en una macrotome. Por otra parte, las secciones más finas pueden ser producidos por microscopía de luz y esto se logra utilizando un micrótomo de trineo con una cuchilla muy afilada. El microtomo trineo ofrece la mayor resistencia y estabilidad necesaria para los bloques grandes y duras. Resina incrustada secciones se pueden teñir con una variedad de manchas, que se demuestran. </p>

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Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Histología ósea descalcificados proporciona información importante para una variedad de aplicaciones clínicas y de investigación. Es un desafío técnico, sobre todo con ejemplares de gran tamaño. Este vídeo muestra el proceso de producción de las secciones de buena calidad y demuestra las dificultades técnicas y métodos con los que para superarlos.</p>

Preparación ósea descalcificados para histología, histomorfometría y Análisis Fluorocromo

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

La preparación de cultivos primarios de células hematopoyéticas de la médula ósea murina por electroporación

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Investigación

Biología

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

A neuronales y astrocitos Co-cultivo de ensayo para el análisis de alto contenido de neurotoxicidad

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparación de los adultos<em> Drosophila</em> Ojos de seccionamiento fino y análisis microscópico

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

ARN<em&gt; In situ</emHibridación&gt; Los embriones en todo el montaje y la histología de células Adaptado para elasmobranquios marinos

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Bone Medium acondicionado: Preparación y Bioensayo

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Preparación de muestras para análisis de masas Citometría

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

Un enfoque alternativo para la preparación de muestras con bajo número de celular para el análisis TEM

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Una guía de sección, corte y procesamiento de imágenes para adquisición y análisis de muestras óseas corticales de alto rendimiento para Micro-TC sincrotrón

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Recolección de tejidos y extracción de ARN de la articulación de la rodilla osteoartrítica humana

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

Uso del analizador de flujo metabólico celular en tiempo real para monitorear la bioenergética de osteoblastos

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...