Name: undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis
Uploaded: 2010-01-08T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

<p class="jove_content"> Yazarlar, laboratuvar uzmanlık için reçine gömme ve Bayan Stephania Mezarları Bayan Sue Connell onun uzmanlık yardımı kabul etmek istiyorum. Yazarlar, onların tavsiyelerini Profesör Frank Kandziora ve Dr Marie-Anne Polboth teşekkür etmek istiyorum. </p>

<ol><li> Dokusu,% 10 fosfat içeren kapalı bir kapta tamponlu <sup>formalin</sup> 3 içinde yer alır . Florokrom analizi fluorochromes ışığa duyarlı olarak, olması ise, minimal ışığa maruz kalma olun. </li><li> Doku hangi yönlendirme gerekli olacak kurulması. </li><li> Numune boyutuna kesin, doğru yönde, bir grup gördüm. Emin olun güvenlik önlemleri yapıştırılır. Numune sonra opak bir kap içine konur, hacmi yeterli fiksasyon elde etmek için yaklaşık on katı numune boyutu olmalıdır. Numune boyutuna bağlı olarak ...

<ol>
	<li>Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Atlas of Functional Histology</em>. , 164-168 (2000).</li><li>Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+histomorphometry:+standardization+of+nomenclature,+symbols,+and+units.+Report+of+the+ASBMR+Histomorphometry+Nomenclature+Committee.">Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee.</a> <em style='font-style: italic'>J Bone Miner Res</em>. <b>2</b>, 595-610 (1987).</li><li>An, Y. H., Martin, K. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Handbook of histology methods for bone and cartilage</em>. , (2003).</li><li>Bancroft, J. D., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Theory and Practice of Histological Techniques</em>. , 352-360 (2008).</li></ol>

<u>Çözücüler:</u> <ul><li> Normal% 10 Formalin, Etanol, ksilen ve Butanol asit Tamponlu <br /> Tüm histoloji notu, kükürt ücretsiz. <br /> Grale Bilimsel Sanayi ve Ticaret Ltd. <br /> http://www.grale.com.au </li></ul> <u>Kalıplar:</u> <ul><li> Uzakta Peel, plastik kalıpları <br /> Grale Bilimsel </li></ul> <u>Slaytlar:</u> <ul><li> SuperFrost Plus Mikroskop slaytlar <br /> Lomb Bilimsel Sanayi ve Ticaret Ltd. <br /> <a href="http://www.lomb.com.au/">http://www.lomb.com.au</a> </li></ul> <u>Reçine:</u> <ul><li> GlycolMethacrylate Technovit 7100 <br /> Heraeus Kulzer <br /> <a href="http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm">http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm</a> </li><li> Blok Reçine-Technovit 3040 Histolojik blok, bir <br /> Heraeus Kulzer </li></ul> <u>Lekeler</u> <br /> <span>(Grale Bilimsel Reaktifler)</span> <p> Goldner Kullanıcı trikrom leke </li><p style="margin-left:40px;"> 1. Weigert demir hemotoxylin (DeGroat) </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2" style="font-weight:bold;"> a) Hemotoxylin çözüm </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 1g </td></tr><tr><td> Saf alkol </td><td> 100 mL </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Demir Çözüm </td></tr><tr><td> % 30 sulu demir klorür </td><td> 4ml </td></tr><tr><td> Hidroklorik asit (konsantre) </td><td> 1mL </td></tr><tr><td> distile su </td><td> 95mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;" > Filtrelenmiş ve eşit hemotoxylin hacmi hemen önce leke kullanılan eklendi. </p><p style="margin-left:40px;" > 2. Ponceau-fuksin-azophloxin stok çözümleri </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Ponceau de xylidine çözüm </td></tr><tr><td> Ponceau de xylidine </td><td> 0.75g </td></tr><tr><td> asit fuchsion </td><td> 0.25g </td></tr><tr><td> Asetik asit </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> mix ve distile su (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) azophloxin çözüm </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Asetik asit </td><td> 0.6mL </td></tr><tr><td colspan="2"> mix ve distile su (100 ml) </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> c) Final çalışma leke çözüm </td></tr><tr><td> Ponceau-fuksin çözüm </td><td> 5-10ml </td></tr><tr><td> Azophloxin </td><td> 2mL </td></tr><tr><td> % 0.2 asetik asit çözeltisi </td><td> 88mL </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 3. Açık Yeşil Çözüm </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Açık Yeşil </td><td> 1g </td></tr><tr><td> asetik asit </td><td> 1mL </td></tr><tr><td colspan="2"> Mix ve distile su (500ml) </td></tr></table><p style="margin-left:40px;"> 4. Phophomolybdic asit-Turuncu G çözüm </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Phosphomolybdic asit </td><td> 3g </td></tr><tr><td> Turuncu G </td><td> 2g </td></tr><tr><td colspan="2"> 500ml distile su içinde çözülür ve kristal timol ekleyin. </td></tr></table><p> Von Kossa KORUYUCU </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> % 1 sulu gümüş nitrat </td></tr><tr><td> % 2,5 sodyum tiyosülfat </td></tr><tr><td> % 1 safranin O </td></tr></table><p> Alsiyan mavi KORUYUCU </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td> Alsiyan mavi 8GX </td><td> 1g </td></tr><tr><td> % 3 asetik asit çözeltisi </td><td> 100 mL </td></tr></table><p> Hemotoxylin ve Eozin leke </p><table style="margin-left:40px;" border="0"><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> a) Harris hemotoxylin </td></tr><tr><td> Hemotoxylin </td><td> 2.5g </td></tr><tr><td> Saf alkol </td><td> 25ml </td></tr><tr><td> Potasyum Şap </td><td> 50g </td></tr><tr><td> distile su </td><td> 500ml </td></tr><tr><td> cıva oksit </td><td> 1.25g VEYA </td></tr><tr><td> Sodyum iyodat </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> Asetik sirke asidi </td><td> 20ml </td></tr><tr><td colspan="2"  style="font-weight:bold;"> b) Eozin çözüm </td></tr><tr><td colspan="2"> Ticari olarak üretilen Eozin kullanılmıştır. </td></tr></table><p> Tüm leke boya tozları Gurr boya tozları. <br /> Bütün çözeltiler analitik reaktifler ve Laboratuar reaktifleri </p><p> <u>Fluorochromes</u> </p><table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td><br /> Üretici </td><td> Florokrom </td><td> Katalog Numarası </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Calcein Yeşil </td><td> C0875 </td></tr><tr><td> Sigma-Aldrich, Sydney </td><td> Alizarin Complexone </td><td> A3882 </td></tr><tr><td> Intervet Avustralya, Victoria </td><td> Oksitetrasiklin <br /> (Raf antimikrobiyal ilaç kapalı) </td><td> Unvanı; Engemycin 100 </td></tr></table>

undecalcified bone preparation for histology, histomorphometry and fluorochrome analysis

<p class="jove_content"> Undecalcified kemik histolojisi kemik mikro-mimari göstermektedir. Bu mineralize kemik, kemik döngüsü ve kemik yapım ve yıkım ile ilgili önemli bilgiler sağlar ve hücresel bileşenleri gösterir. Bu, klinik ve araştırma uygulamaları çeşitli büyük bir öneme sahiptir. Çok güzel görüntüler <sup>1</sup> verim ve florokrom değerlendirme ve histomorfometri <sup>2</sup> gibi teknikler sağlar. Florokrom analizi, o bir zamanda mineralizasyon miktarı ölçümü için sağlar belirli bir zaman noktasında, kalsiyum bağlamak floresan boya enjekte edilir bir tekniktir. Histomorfometri mikroskobik düzeyde kemik nicelikleme bir süreçtir. </p><p class="jove_content"> Undecalcified kemik histolojisi Sahne teknik özellikle büyük boyutlu örnekleri zordur. Histoloji gömülü standart parafin kullanılan bu tekniği farklılıklar gerektirir. Bu video kaliteli bölümleri üretim sürecini göstermektedir ve bunların üstesinden gelmek için hangi teknik zorluklar ve yöntemler göstermektedir. Genellikle birkaç hafta Ancak, yoğunluk ve düşük kemik geçirgenliği oldukça uzun fiksasyon ve işlem süreleri gereklidir nedeniyle diğer yumuşak dokularda benzer bir şekilde, numune hazırlama, fiksasyon ve işlenmesi ile elde edilir. Gömme metakrilat esaslı reçineler gibi kemik, benzer ya da eşit sertlik ve yoğunluk ile destekleyici bir ortam kullanılarak, ancak elde parafin infiltrasyon ve gömme aksine, bu geri dönüşü olmayan bir bir adımdır. Kesit florokrom analizi gibi çalışmalar için en uygun kalın bir bölümü, üretir öğütülmesi ile elde edilebilir. Bu iyi bir macrotome bir elmas bıçak kullanılarak elde edilir. Alternatif olarak, ince kısımların ışık mikroskobu için üretilen ve bu çok keskin bir bıçak ile bir kızak mikrotom kullanılarak elde. Kızak mikrotom büyük, sert bloklar için gerekli ek güç ve kararlılık sağlar. Reçine gömülü gösterilmektedir lekeleri çeşitli bölümleri ile boyanmış olabilir. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis at JoVE.com

Undecalcified Bone Preparation for Histology, Histomorphometry and Fluorochrome Analysis

<p class="jove_content">Undecalcified kemik histolojisi, klinik ve araştırma uygulamaların çeşitliliği için önemli bilgiler sağlar. Bu teknik, özellikle büyük boyutlu örnekleri, zordur. Bu video kaliteli bölümleri üretim sürecini göstermektedir ve bunların üstesinden gelmek için hangi teknik zorluklar ve yöntemler göstermektedir.</p>

Histoloji, histomorfometri ve Florokrom Analiz Undecalcified Kemik Hazırlık

Undecalcified bone histology demonstrates the micro-architecture of bone. It shows both the mineralised and cellular components of bone, which provides ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Hazırlık Elektroporasyon murin Kemik İliği itibaren İlköğretim Hematopoetik Hücre Kültürleri

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Nörotoksisite Yüksek İçerik Analizi Nöronal ve Astrosit Hücre Co-Kültür Testi

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Preparation of Adult <em>Drosophila</em> Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Yetişkin hazırlanması<em> Drosophila</em> Gözler İnce Kesit ve Mikroskobik Analizi

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

RNA <em>In situ</em> Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; Yerinde</emTüm Dağı Embriyolar ve Hücre histolojisi&gt; Hibridizasyon Deniz Elasmobranchs İçin Uyarlanmış

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Kemik koşullu ortam: Hazırlama ve Biyo-

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

Kütle Sitometri Analizi için Numune Hazırlama

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

TEM analizi için düşük Hücre sayısı ile örnek hazırlanması için alternatif bir yaklaşım

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Synchrotron Micro-CT için Yüksek Verimli Kortikal Kemik Örneği Alımı ve Analizi için Kesitleme, Coring ve Görüntü İşleme Kılavuzu

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

İnsan Osteoartrit Diz Ekleminden Doku Toplama ve RNA Ekstraksiyonu

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Using Real-Time Cell Metabolic Flux Analyzer to Monitor Osteoblast Bioenergetics

Osteoblast Biyoenerjetik Teknolojilerini İzlemek için Gerçek Zamanlı Hücre Metabolik Akı Analizörünü Kullanma

Bone formation by osteoblasts is an essential process for proper bone acquisition and bone turnover to maintain skeletal homeostasis, and ultimately, ...