Name: magnetic resonance spectroscopy of live drosophila melanogaster using magic angle spinning
Uploaded: 2010-04-15T16:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis av en National Institutes of Health (NIH) bevilja AI063433 till Laurence G. Rahme, en National Institute Institutes of Health (NIH) Center Grant (P50GM021700) till Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, chef för NMR kärna), och en Shriner sjukhus för barn forskningsanslag (# 8893) till A. Aria Tzika. Vi tackar Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. för att få hjälp i de inledande faserna för att utveckla detta protokoll och Ovidiu C. Andronesi Ph.D. för hjälp med TOBSY pulssekvens.

Del 1: Förbereda Drosophila för HRMAS Mått <ol><li> Med standard flylab förfaranden 1, samla nya eclosing flugor i 3 dagar och överföra dem att flyga injektionsflaskor med färska flyga mat. Inkubera samlas flugor i 5 dagar så att flugorna kommer att bli 5-8 dagar gammal strax före experimentet. Endast det ena könet (oftast män) används för experiment. </li><li> Använd sunt, flugor intakt vildtyp att jämföra med behandlade t.ex. traumatiserade eller genetiskt förändrade flugor <sup...

<ol>
	<li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+host+for+studying+Pseudomonas+aeruginosa+infection.">Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection.</a> Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).</li><li>Meiboom, S., Gill, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+spin-echo+method+for+measuring+nuclear+relaxation+time.">Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time.</a> Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).</li><li>Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-state+NMR+adiabatic+TOBSY+sequences+provide+enhanced+sensitivity+for+multidimensional+high-resolution+magic-angle-spinning+1H+MR+spectroscopy.">Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy.</a> J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).</li><li>Astrakas, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proton+NMR+spectroscopy+shows+lipids+accumulate+in+skeletal+muscle+in+response+to+burn+trauma-induced+apoptosis.">Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis.</a> Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).</li><li>Fan, T. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolite+profiling+by+one-+and+two+dimensional+NMR+analysis+of+complex+mixtures.">Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures.</a> Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).</li><li>Null, B., Liu, C. W., Hedehus, M., Conolly, S., Davis, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution,+in+vivo+magnetic+resonance+imaging+of+Drosophila+at+18.8+Tesla.">High-resolution, in vivo magnetic resonance imaging of Drosophila at 18.8 Tesla.</a> PLoS One. 3, e2817-e2817 (2008).</li><li>Zektzer, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+signal+to+noise+in+high-resolution+magic+angle+spinning+total+correlation+spectroscopy+studies+of+prostate+tissues+using+rotor-synchronized+adiabatic+pulses.">Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses.</a> Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).</li></ol>

Med undantag av den senaste rapporten från möjligheten att in vivo MRT i bananflugor 6 har in vivo MRS studier i bananfluga ännu inte rapporterats. I det nuvarande protokollet beskriver vi genomförandet av en ny in vivo HRMAS 1 H-MRS metod för att upptäcka biologiskt viktiga molekyler. Vi upptäckte framförallt lipider och små metaboliter i levande Drosophila flyger på 14,1 T i ca 45 min, vilket ger tillräcklig förvärvet tid, och samtidigt up...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Deuterium oxide</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>7789-20-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>24493-21-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>agar, sucrose, yeast, cornmeal</td>
<td>Food</td>
<td>Genesee Scientific Corporation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.flystuff.com/">http://www.flystuff.com/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Oregon RS or Canton-S flies</td>
<td>Adult fly lines</td>
<td>Bloomington Stock Center</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://flystocks.bio.indiana.edu/">http://flystocks.bio.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Paintbrush</td>
<td>Equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>(size 0)</td>
</tr>
<tr>
<td>2ml tubes</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>K749521-1590</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fly incubators</td>
<td>Equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle.</td>
</tr>
<tr>
<td>Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe </td>
<td>Equipment</td>
<td>Bruker Bio-Spin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit</td>
<td>Equipment</td>
<td>Bruker Bio-Spin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul)</td>
<td>Equipment</td>
<td>Bruker Bio-Spin</td>
<td>B3829 (Bruker store)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MestReC (Mestrelab Research) </td>
<td>Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1D NMR spectra analysis <a href="http://mestrelab.com/">http://mestrelab.com/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>SPARKY 3, USCF</td>
<td>Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2D NMR spectra
analysis
 <a href="http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/">http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

magnetic resonance spectroscopy of live drosophila melanogaster using magic angle spinning

Högupplösta Magic-Angle Spinning (HRMAS) protoner magnetisk resonans spektroskopi (<sup&gt; 1</sup&gt; H-MRS) är en ny icke-förstörande teknik som förbättrar spektrallinje-bredder och ger högupplösta spektra som kan fås från extrakt, intakta celler, cellodlingar, och ännu viktigare intakt vävnad för att undersöka relationer mellan metaboliter och cellulära processer.<em&gt; In vivo</em&gt; HRMAS<sup&gt; 1</sup&gt; H-MRS studier har ännu inte rapporterats i levande bananfluga<em&gt; Drosophila melanogaster.</em&gt;<em&gt; Drosophila,</em&gt; Som en enklare genetisk organism, kan de många biologiska funktioner och olika evolutionärt bevarat signalvägar som skall undersökas på hela organismen nivå och det är en användbar modell för att undersöka genetik och fysiologi. För detta ändamål har vi utvecklat och genomfört en<em&gt; In vivo</em&gt; HRMAS<sup&gt; 1</sup&gt; H-MRS-metoden för att undersöka leva<em&gt; Drosophila</em&gt; På 14,1 T. Vi presenterar här ett HRMAS<sup&gt; 1</sup&gt; H-MRS protokoll för molekylär karakterisering av<em&gt; Drosophila</em&gt; Med en konventionell MR spektrometer utrustad med en HRMAS sond. Denna teknik är en roman,<em&gt; In vivo,</em&gt; Oförstörande<em&gt; Drosophila</em&gt; Metabolit mätmetod, som möjliggör identifiering av sjukdomen biomarkörer och därmed kan bidra till nya terapeutiska utvecklingen.

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning at JoVE.com

Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning

Denna teknik möjliggör användandet av högupplösta magiska vinkel spinning proton MR spektroskopi (HRMAS 1H-MRS) för molekylär karakterisering av levande<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Med en konventionell 14,1 Tesla spektrometer utrustad med en HRMAS sond.

Resonansspektroskopi av levande Drosophila melanogaster Med hjälp av Magic Angle Spinning

High-Resolution Magic Angle Spinning (HRMAS) proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) is a novel non-destructive technique that improves spectral ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

Flera-mus neuroanatomiska Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulering av Escape Beteende i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Bestämning av spontan rörelseaktivitet i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

The Use of Magnetic Resonance Spectroscopy as a Tool for the Measurement of Bi-hemispheric Transcranial Electric Stimulation Effects on Primary Motor Cortex Metabolism

Användning av magnetisk resonansspektroskopi som ett verktyg för mätning av Bi-hemisfären transkraniell elektriska retningar Effekter på Primär Motor Cortex Metabolism

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a neuromodulation technique that has been increasingly used over the past decade in the treatment of ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvneuroblaster

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Metabolomic Analysis of Rat Brain by High Resolution Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy of Tissue Extracts

Metabolomic Analys av råtthjärna genom högupplöst NMR-spektroskopi av vävnadsextrakt

Studies of gene expression on the RNA and protein levels have long been used to explore biological processes underlying disease. More recently, genomics ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Villkor som påverkar Social Space i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Högupplöst Kvantifiering av Lukt styrd Beteende i<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Använda<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Födosök Path längd protokoll för<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larver

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

Metabolisk analys av Drosophila melanogaster Larval och vuxna hjärnor

This protocol describes a method for measuring the metabolism in Drosophila melanogaster larval and adult brains. Quantifying metabolism in whole organs ...