Name: a reversible, non-invasive method for airway resistance measurements and bronchoalveolar lavage fluid sampling in mice
Uploaded: 2010-04-13T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice at JoVE.com

Wij danken dr. W. Mintzer voor de suggestie om fiberoptische intubatie orotracheal uit te voeren. Ondersteund door subsidies U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 en R01HL082487 van de National Institutes of Health.

Allergeen uitdaging: <ol><li> C57BL / 6 muizen, 4-8 weken oud zijn, worden verdoofd in een luchtdichte plexiglas kamer gezuiverd met een 3,2% isofluraan in zuurstof damp mengsel gedurende 10 minuten tot een diepe algemene gevoelloosheid te bereiken. </li><li> Intranasale allergeen uitdagingen (45μL OVA (22,5 pg) en 7μL A. oryzae (7 microgram), in PBS) worden toegediend, elke dinsdag, donderdag en zondag, voor een totaal van zeven opeenvolgende toepassingen. </li></ol> Anesthesie: <ol start=...

<ol>
	<li>Hamelmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+airway+responsiveness+in+allergic+mice+using+barometric+plethysmography.">Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).</li><li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice.">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J. Appl. Physiol. 97, 286-292 (2004).</li><li>Bates, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+and+misuse+of+penh+in+animal+models+of+lung+disease.">The use and misuse of penh in animal models of lung disease.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 373-374 (2004).</li><li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice.">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J. Appl. Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li><li>Grunig, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+IL-13+independently+of+IL-4+in+experimental+asthma.">Requirement for IL-13 independently of IL-4 in experimental asthma.</a> Science. 282, 2261-2263 (1998).</li><li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirements+for+allergen-induced+airway+hyperreactivity+in+T+and+B+cell-deficient+mice.">Requirements for allergen-induced airway hyperreactivity in T and B cell-deficient mice.</a> Mol. Med. 4, 344-355 (1998).</li><li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+4,+but+not+interleukin+5+or+eosinophils,+is+required+in+a+murine+model+of+acute+airway+hyperreactivity.">Interleukin 4, but not interleukin 5 or eosinophils, is required in a murine model of acute airway hyperreactivity.</a> J. Exp. Med. 183, 109-117 (1996).</li><li>Amdur, M. O., Mead, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+respiration+in+unanesthetized+guinea+pigs.">Mechanics of respiration in unanesthetized guinea pigs.</a> Am J Physiol. 192, 364-368 (1958).</li></ol>

De studie van astma, en diverse andere obstructieve luchtweg aandoeningen, vormt een actieve en groeiende sector van het biomedisch onderzoek. Een belangrijk onderdeel van astma-gerelateerde experimenteel onderzoek is het vermogen om veranderingen in de luchtwegen omvang te meten onder verschillende omstandigheden. Overmatige luchtwegvernauwing in reactie op provocerende uitdaging, een canonieke kenmerk van astma en aanverwante longziekten en een eigenschap van de luchtwegen genoemd luchtwegovergevoeligheid, is een bela...

Luchtwegen fysiologie meetsoftware (Rescomp) was bereid op maat (Millennium Premier Group, 415-519-4371). De gegevens werden geanalyseerd met behulp van een PC-werkstation met Windows XP uitgerust met een Pentium III processor (Intel, Inc Santa Clara, CA) en een 17-pin analoog naar digitaal signaal omzetter (National Instruments, # PC-LPM16). Een klein dier luchtwegen fysiologie werkstation was op maat samengesteld (Millennium Premier Group) met behulp van commercieel verkrijgbare druk transducers (deel # TRD5700 en TRD4510), voorversterker modules (deel # MAX2270), chassis (onderdeel # MAX1320; allemaal uit Buxco, Inc Wilmington, NC ) en een op maat gemaakte kleine dieren plethysmograaf. 0.5mm uitwendige diameter glasvezel draad, verbonden aan lichtbron (Cole Palmer Illuminator, 41722-serie) Ventilator (Harvard Apparatuur Mouse Ventilator, # 687) 10 mm, 27ga naald (BD Biosciences, cat. Nee. 309602) Warmtelamp 1 ml spuit (BD Biosciences, cat. Nee. 305109) 4 klemmen (Pony 3200 veerklem) 0,5 mm externe draad voor intubatie gids Hemacytometer Superfrost / plus objectglaasjes (Fisher cat. Nee. 12-550-15) Shandon Filter Kaarten (Thermo cat. Nee. 5991022) Differentiële cel slide vlek (Fisher cat. Nee. 122911) Lichtmicroscoop (Leica) Cytospin 3 (Shandon) 20 GA, 1.25 inch ProtectIV intraveneuze katheters (Smith Medical) 0,5 mm polymere optische vezel (Edmund Optics # NT02-532).

a reversible, non-invasive method for airway resistance measurements and bronchoalveolar lavage fluid sampling in mice

Luchtweg hyperreactiviteit (AHR) metingen en bronchoalveolaire lavage (BAL) vloeistof bemonstering zijn essentieel voor experimentele astma modellen, maar herhaalde procedures om dergelijke metingen te verrichten in hetzelfde dier zijn over het algemeen niet haalbaar. Hier tonen we protocollen voor het verkrijgen van muizen herhaalde metingen van de AHR en bronchoalveolaire lavage vloeistof monsters. De muizen werden intranasaal uitgedaagd zeven keer meer dan 14 dagen met een krachtige allergeen of sham behandeld. Voorafgaand aan de eerste uitdaging, en binnen 24 uur na elke intranasale uitdaging, dezelfde dieren waren verdoofd, oraal geïntubeerd en mechanisch geventileerd. AHR, beoordeeld door dosis-respons curves van de ademhalingswegen weerstand (RRS) veroorzaakt door het verhogen van intraveneuze doses van acetylcholine (Ach) chloride tussen nep en allergeen-uitgedaagd dieren, werden bepaald. Daarna, en via dezelfde intubatie, was de linker long lavaged zodat differentieel opsomming van de luchtwegen cellen kunnen worden uitgevoerd. Deze studies laten zien dat herhaalde metingen van AHR en BAL vochtophopingen mogelijk zijn van dezelfde dieren en dat de maximale luchtwegovergevoeligheid en luchtwegen eosinofilie worden bereikt binnen 7-10 dagen na het begin van allergeen uitdaging. Deze nieuwe techniek vermindert het aantal muizen nodig zijn voor longitudinale experimenteren en is van toepassing op diverse soorten knaagdieren, ziekte-modellen en luchtwegen fysiologie instrumenten.

Watch this Scientific Journal Video about A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice at JoVE.com

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Herhaalde metingen van knaagdieren respiratoire fysiologie en bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen wenselijk zijn, maar over het algemeen niet haalbaar. Hier beschrijven we een herhaalbare methode voor het mondeling intuberen muizen dat herhaalde metingen van de luchtwegen hyperreactiviteit en de bemonstering van de luchtwegen ontstekingscellen vergunningen.

Een reversibele, niet-invasieve methode voor Airway Resistance Metingen en bronchoalveolaire lavage Fluid Sampling in Muizen

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: een eenvoudige methode voor Nauwkeurige Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Etikettering hESC &#39;s en hMSCs met ijzeroxide nanodeeltjes voor niet-invasieve in vivo Tracking met MR Imaging

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Labeling stamcellen met fluorescente kleurstoffen voor niet-invasieve detectie met optische beeldvorming

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Seawater Sampling and Collection

Zeewater Bemonstering en Collection

This video documents methods for collecting coastal marine water samples and processing them for various downstream applications including biomass ...

A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Een 3D-systeem voor het kweken van menselijke articulaire chondrocyten in gewrichtsvloeistof

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Het uitvoeren van vaginale lavage, Crystal Violet kleuring, en vaginale cytologische Evaluatie Mouse loopsheid Staging identificatie

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo Method for High Resolution Imaging of Cilia Motility in Rodent Airway Epithelia

Ex vivo methode voor High Resolution Imaging van Cilia Motility in Knaagdieren luchtwegepithelen

An ex vivo technique for imaging mouse airway epithelia for quantitative  analysis of motile cilia function important for insight into mucociliary  ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Functionele Het oplossen en Channel activiteit Metingen van gezuiverde wildtype en mutante CFTR eiwit

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Fecale Glucocorticoïd Analyse: Niet-invasieve bijnier Toezicht op Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

Filtratie Isolatie van nucleïnezuren: Een eenvoudige en snelle DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...