Name: murine model of cd40-activation of b cells
Uploaded: 2010-03-05T17:30:09
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

نشكر الدكتور كليمنس تتكرم Wendtner لتوفير tmuCD40 - يجند الحله خط الخلية.

ينقسم بروتوكول لجيل من الفئران خلايا B - CD40 تنشيط (mCD40B) من splenocytes إلى جزأين : الجزء ألف يوضح إعداد يجند CD40 الفئران (CD40L) معربا عن خلايا هيلا (tmuCD40L هيلا) ، والتي سوف تستخدم لوحة ، كما منضم الخلايا المغذية. الجزء باء يصف الفعلية الفئران CD40 - B الثقافة. <p class="jove_title" style=";text-align:ri...

<ol>
	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, e1464-e1464 (2008).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+using+retrovirally+transduced+CD40-activated+B+cells.">Efficient generation of antigen-specific cytotoxic T cells using retrovirally transduced CD40-activated B cells.</a> J Immunol. 169 (4), 2164-2171 (2002).</li><li>Liebig, T. M., Fiedler, A., Zoghi, S., Shimabukuro-Vornhagen, A., Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+CD40-activated+B+cells.">Generation of human CD40-activated B cells.</a> J Vis Exp. 32, (2009).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107 (7), 2786-2789 (2006).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63 (11), 2836-2843 (2003).</li><li>Ahmadi, T., Flies, A., Efebera, Y., Sherr, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+Ligand-activated,+antigen-specific+B+cells+are+comparable+to+mature+dendritic+cells+in+presenting+protein+antigens+and+major+histocompatibility+complex+class+I-+and+class+II-binding+peptides.">CD40 Ligand-activated, antigen-specific B cells are comparable to mature dendritic cells in presenting protein antigens and major histocompatibility complex class I- and class II-binding peptides.</a> Immunology. 124 (1), 129-140 (2008).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. S. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99 (9), 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155 (2), 249-256 (2009).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25 (12), 659-664 (2004).</li><li>Mayr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+translocations+are+associated+with+poor+prognosis+in+chronic+lymphocytic+leukemia.">Chromosomal translocations are associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia.</a> Blood. 107 (2), 742-751 (2006).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15 (13), 955-965 (2008).</li></ol>

إدخال تعديلات على هذا البروتوكول أمر ممكن ، وخصوصا فيما يتعلق أصل التحفيز CD40 ونوع السلالة الماوس المستخدمة ، مما أسفر أيضا في توليد خلايا الفئران كفاءة B - CD40 تفعيلها. الأحمدي وآخرون. وقد أظهرت نتائج مماثلة بالنسبة لالليفية الماوس transfected مع الفئران CD40 - يجند. ويمكن في ه...

A. إعداد وسائل الإعلام : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> التغذية المتوسطة الخلية نوع البرية </td><td> اختيار الخلية المتوسطة المغذية </td><td></td></tr><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز </td><td> الكاشف </td><td> تركيز </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> RPMI 1640 </td><td></td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 300 ميكروغرام / مل </td><td> L - الجلوتامين </td><td> 300 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10 ٪ </td><td> FBS </td><td> 10 ٪ </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td></tr><tr><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td></td><td></td><td> هيغروميسين B </td><td> 0.2 ملغ / مل </td></tr></table><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> mCD40 B غسل المتوسطة </td><td> mCD40 B - مستنبت </td></tr><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز </td><td> الكاشف </td><td> تركيز </td></tr><tr></tr><tr><td> D - MEM </td><td> </td><td> D - MEM </td><td> </td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 580 ميكروغرام / مل </td><td> L - الجلوتامين </td><td> 580 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> 4.5 ملغ / مل </td><td> جلوكوز </td><td> 4.5 ملغ / مل </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td></tr><tr><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> MEM </td><td> 0.1mM (1X) </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> FBS </td><td> 10 ٪ </td></tr></tbody></table> B. متنوعة الكواشف : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> لكي لا </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 21875 </td></tr><tr><td> D - MEM </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 41965 </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS (10X) </td><td> PAA </td><td> القط لا H15 - 011 </td></tr><tr><td> Gencin </td><td> حدد الدلتا </td><td> الفن لا يوجد 7395800 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> LONZA </td><td> القط لا DE14 - 802C </td></tr><tr><td> HEPES العازلة </td><td> PAA </td><td> القط لا S11 - 001 </td></tr><tr><td> MEM NEAA </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 11140 </td></tr><tr><td> هيغروميسين B </td><td> PAA </td><td> القط لا P02 - 015 </td></tr><tr><td> المؤتلف الفئران إينترليوكين - 4 </td><td> Immunotools </td><td> القط لا 12340045 </td></tr><tr><td> السيكلوسبورين A </td><td> شركة نوفارتيس </td><td> القط لا 0078-0109-01 NDC </td></tr><tr><td> التربسين / EDTA (10X) </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 15400-054 </td></tr></table> جيم لوازم متنوعة : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> لكي لا </td></tr><tr><td> ماصة معقمة نصائح </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6 كذلك لوحة </td><td> نونك </td><td> القط لا 140675 </td></tr><tr><td> 50mL أنبوب مخروطي </td><td> دينار بحريني فالكون ™ </td><td> القط لا 352070 </td></tr><tr><td> نسيج الثقافة القارورة </td><td> Sarstedt </td><td> القط لا 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

murine model of cd40-activation of b cells

وقد أظهرت البحوث على الخلايا البائية أن التنشيط CD40 يحسن قدرتها على تقديم المستضد. عندما حفز مع وانترلوكين 4 - CD40 يجند (CD40L) ، يمكن توسيع خلايا B الإنسان دون صعوبات من كميات صغيرة من الدم المحيطي في غضون 14 يوما لكميات كبيرة جدا من خلايا CD40 - B نقية عالية (&gt; 10<sup&gt; 9</sup&gt; خلايا لكل مريض) من المتبرعين الأصحاء فضلا عن مرضى السرطان<sup&gt; 1-4</sup&gt;. CD40 - B المهم التعبير عن جزيئات الخلايا اللمفاوية صاروخ موجه ، ويمكن أن تجذب الخلايا التائية<em&gt; في المختبر</em<sup&gt; 5</sup&gt;. وعلاوة على ذلك أنها تأخذ بكفاءة أعلى ، والعملية الحالية لمستضدات الخلايا التائية<sup&gt; 6،7</sup&gt;. عرضت CD40 - B الخلايا ليست فقط ساذجة الوزراء ، وإنما أيضا توسيع الخلايا التائية الذاكرة<sup&gt; 8،9</sup&gt;. ولذلك قد درست CD40 تنشيط خلايا B (CD40 - B الخلايا) كمصدر بديل للالمناعية تنشيطية مستضد تقديم الخلايا (APC) لخلية مقرها immunotherapy1 ، 5،10. من أجل مزيد من الدراسة ما إذا كانت الخلايا CD40 - B تحفز الاستجابات فعالية الخلايا التائية في الجسم الحي ، ودراسة الآلية الكامنة أنشأنا نظاما ثقافة الخلية لتوليد خلايا الفئران B - CD40 تفعيلها. كانوا يستخدمون splenocytes أو تنقيتها من خلايا الفئران C57BL B / 6 ، لتفعيل CD40 ، حددت الظروف المثلى على النحو التالي : يتم تنقيتها ابتداء من splenocytes من C57BL / 6 الفئران (النمط الفرداني H - 2B) الخلايا الليمفاوية بواسطة الطرد المركزي المتدرج الكثافة وشارك في تربيتها مع هيلا خلايا الفئران معربا عن المؤتلف CD40 يجند (tmuCD40L هيلا)<sup&gt; 11</sup&gt;. هي خلايا recultured كل 3-4 أيام والمكونات الرئيسية مثل CD40L ، انترلوكين 4 - المركابتويثانول ويتم تجديد السيكلوسبورين A. في هذا البروتوكول ونحن لشرح كيفية الحصول على تفعيلها بشكل كامل الفئران CD40 - B الخلايا (mCD40B) مع APC - مماثل النمط الظاهري لخلايا CD40 - B الإنسان (الشكل 1A ، ب). CD40 - يؤدي إلى تحفيز نمو السريع والتوسع في نقية للغاية (&gt; 90 ٪) CD19 خلايا B + في غضون 14 يوما من زراعة الخلايا (الشكل 1C ، د). لتجنب التلوث مع المنظمات غير transfected الخلايا ، والتعبير ليجند CD40 الفئران على transfectants يجب أن يكون للرقابة بشكل منتظم (الشكل 2). ويمكن استخدام الفئران CD40 تنشيط خلايا B لدراسة الخلية B - التنشيط والتمايز ، وكذلك للتحقيق إمكاناتها لتؤدي وظيفة APC في المختبر والمجراة. وعلاوة على ذلك ، لأنها تمثل أداة واعدة لإقامة التطعيم علاجية أو وقائية ضد الأورام وسوف تساعد على الإجابة عن الأسئلة المتعلقة بالسلامة واستمناع هذا النهج<sup&gt; 12</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

Murine Model of CD40-activation of B cells

في هذا الفيديو ، ونحن لشرح اجراءات التنشيط CD40 ، والتوسع في خلايا الفئران B من splenocytes من C57BL / 6 الفئران ، والتي يمكن استخدامها بوصفها خلية مستضد تقديم نموذج (APC) لدراسة تحريض الحصانة.

الفئران نموذج تفعيل CD40 - B من الخلايا

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

الاستقراء والتقييم من فئة التوحد التبديل في تنقية خلايا الفئران B

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

المؤتلف إنتاج فيروسات الرجعية والعدوى من خلايا B

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

الفئران نموذج من الربو المستحثة مسببات الحساسية

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Plaque Assay for Murine Norovirus

الفحص وحة لنوروفيروس الفئران

Murine norovirus (MNV) is the only member of the Norovirus genus that efficiently grows in tissue culture 1, 2. Cell lysis and cytopathic effect (CPE) are ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

كشف صحيح فريق الخبراء الحكومي الدولي، معربا عن ماوس B خلايا سلالته

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

الجيل المؤتلف الإنسان مفتش حيدة النسيلة من مخلد خلايا التصنيف B

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

نموذج الفئران من المجموعة الثانية<em&gt; العقدية</em&gt; المهبلية الاستعمار

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

تحليل القص الناجمة عن تدفق الهجرة من المنطقة الهامشية الفاري ب الخلايا في المختبر

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

في المختبر التمايز نموذج الذاكرة البشرية العادية ب الخلايا إلى خلايا البلازما المعمرة

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...