Name: murine model of cd40-activation of b cells
Uploaded: 2010-03-05T17:30:09
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

אנו מבקשים להודות לד&quot;ר קלמנס Wendtner למתן tmuCD40-ליגנד, הלה קו התא.

פרוטוקול עבור הדור של CD40 המופעל בתאים Murine B (mCD40B) מ splenocytes מחולק לשני חלקים: חלק א &#39;מדגים את הכנת CD40 ליגנד Murine (CD40L) להביע תאים הלה (tmuCD40L הלה), אשר ישמש צלחת מחויב תאים מזין. חלק ב &#39;מתאר את התרבות בפועל Murine CD40-B. א הכנת תאים מזין (tmuCD40L הל...

<ol>
	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, e1464-e1464 (2008).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+using+retrovirally+transduced+CD40-activated+B+cells.">Efficient generation of antigen-specific cytotoxic T cells using retrovirally transduced CD40-activated B cells.</a> J Immunol. 169 (4), 2164-2171 (2002).</li><li>Liebig, T. M., Fiedler, A., Zoghi, S., Shimabukuro-Vornhagen, A., Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+CD40-activated+B+cells.">Generation of human CD40-activated B cells.</a> J Vis Exp. 32, (2009).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107 (7), 2786-2789 (2006).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63 (11), 2836-2843 (2003).</li><li>Ahmadi, T., Flies, A., Efebera, Y., Sherr, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+Ligand-activated,+antigen-specific+B+cells+are+comparable+to+mature+dendritic+cells+in+presenting+protein+antigens+and+major+histocompatibility+complex+class+I-+and+class+II-binding+peptides.">CD40 Ligand-activated, antigen-specific B cells are comparable to mature dendritic cells in presenting protein antigens and major histocompatibility complex class I- and class II-binding peptides.</a> Immunology. 124 (1), 129-140 (2008).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. S. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99 (9), 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155 (2), 249-256 (2009).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25 (12), 659-664 (2004).</li><li>Mayr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+translocations+are+associated+with+poor+prognosis+in+chronic+lymphocytic+leukemia.">Chromosomal translocations are associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia.</a> Blood. 107 (2), 742-751 (2006).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15 (13), 955-965 (2008).</li></ol>

שינויים של פרוטוקול זה אפשרי, במיוחד לגבי מקורו של הגירוי-CD40 ואת סוג של זן העכבר משמש, גם מניב בדור יעילה של תאים Murine CD40-B מופעל. אחמדי et al. הראו תוצאות דומות עבור fibroblasts העכבר transfected עם Murine-CD40 ליגנד. במצגת זו בהקשר של אנטיגן קסנו ניתן לשלול בוודאות, אך מחקרים אינטנסיביים ?...

א הכנת מדיה: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תא מזין בינוני סוג בר </td><td> תא מזין מבחר בינוני </td><td></td></tr><tr><td> מגיב </td><td> ריכוז </td><td> מגיב </td><td> ריכוז </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> RPMI 1640 </td><td></td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> 300 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> L-גלוטמין </td><td> 300 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10% </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamycin </td><td> 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> Gentamycin </td><td> 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td></td><td></td><td> Hygromycin B </td><td> 0.2 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr></table><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> mCD40-B בינוני כביסה </td><td> mCD40-B בינוני תרבות </td></tr><tr><td> מגיב </td><td> ריכוז </td><td> מגיב </td><td> ריכוז </td></tr><tr></tr><tr><td> D-ממ </td><td> </td><td> D-ממ </td><td> </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> 580 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> L-גלוטמין </td><td> 580 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> 4.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> גלוקוז </td><td> 4.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamycin </td><td> 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> Gentamycin </td><td> 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> מ </td><td> 0.1mm (1x) </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr></tbody></table> ב שונות ריאגנטים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> אין סדר </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 21875 </td></tr><tr><td> D-ממ </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 41965 </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS (10x) </td><td> PAA </td><td> חתול לא H15-011 </td></tr><tr><td> Gencin </td><td> דלתא בחר </td><td> לאמנות אין 7395800 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Lonza </td><td> חתול לא DE14-802C </td></tr><tr><td> HEPES הצפת </td><td> PAA </td><td> חתול לא S11-001 </td></tr><tr><td> ממ NEAA </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 11140 </td></tr><tr><td> Hygromycin B </td><td> PAA </td><td> חתול לא P02-015 </td></tr><tr><td> רקומביננטי Murine אינטרלויקין 4 </td><td> Immunotools </td><td> חתול לא 12340045 </td></tr><tr><td> ציקלוספורין </td><td> נוברטיס </td><td> חתול לא 0078-0109-01 NDC </td></tr><tr><td> טריפסין / EDTA (10x) </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 15400-054 </td></tr></table> ג שונות וחומרים: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> אין סדר </td></tr><tr><td> סטרילי פיפטה טיפים </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6 גם צלחת </td><td> NUNC </td><td> חתול לא 140675 </td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל צינור חרוטי </td><td> BD פלקון ™ </td><td> חתול לא 352070 </td></tr><tr><td> תרבות רקמות צפחת </td><td> Sarstedt </td><td> חתול לא 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

murine model of cd40-activation of b cells

המחקר על תאים B הוכיחו כי CD40 ההפעלה משפר את יכולת הצגת האנטיגן שלהן. כאשר מגורה עם interleukin-4 ו CD40 ליגנד (CD40L), תאים B האדם ניתן להרחיב ללא קשיים של כמויות קטנות של דם היקפיים בתוך 14 ימים על כמויות גדולות מאוד של הפערים טהור CD40-B תאים (&gt; 10<sup&gt; 9</sup&gt; התאים לחולה) מתורמים בריאים, כמו גם חולי סרטן<sup&gt; 1-4</sup&gt;. תאים CD40-B להביע חשוב הלימפה מולקולות ביות והוא יכול למשוך ותאי T<em&gt; במבחנה</em<sup&gt; 5</sup&gt;. יתר על כן הם תופסים ביעילות, תהליך להציג אנטיגנים לתאי T<sup&gt; 6,7</sup&gt;. תאים CD40-B הוצגו נאיבי לא רק הממשלה, אלא גם להרחיב את הזיכרון T לתאים<sup&gt; 8,9</sup&gt;. לכן CD40 המופעל בתאי B (CD40-B תאים) נחקרו כמקור חלופי חיסונית של גירוי התאים המציגים אנטיגנים (APC) עבור מבוססי תאים immunotherapy1, 5,10. כדי ללמוד עוד אם התאים CD40-B לגרום האפקטיבית התגובות תא T in vivo ו ללמוד את המנגנון הבסיסי הקמנו מערכת תרבית תאים עבור הדור של CD40 המופעל בתאים Murine B. שימוש splenocytes או מטוהרים תאים B מעכברים C57BL / 6 להפעלה CD40, תנאים אופטימליים זוהו כדלקמן: החל מ splenocytes של C57BL / 6 עכברים (haplotype H-2B) לימפוציטים הם מטוהרים על ידי צנטריפוגה צפיפות שיפוע ושיתוף תרבותי עם הלה תאים להביע רקומביננטי Murine CD40 ליגנד (tmuCD40L הלה)<sup&gt; 11</sup&gt;. תאים הם recultured כל 3-4 ימים רכיבי מפתח כגון CD40L, interleukin-4, ו-Mercaptoethanol ציקלוספורין הם מתחדש. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד להשיג מופעל במלואו Murine CD40-B תאים (mCD40B) עם פנוטיפ דומה APC-CD40 ל-B תאים אנושיים (איור 1 א, ב). CD40-גירוי מוביל תולדה מהיר והרחבת טהורים ביותר (&gt; 90%) CD19 + B תאים בתוך 14 ימים של תרבית תאים (איור 1 ג, ד). כדי למנוע זיהום עם הלא transfected תאים, ביטוי של ליגנד CD40 Murine על transfectants חייב להיות מבוקר באופן קבוע (איור 2). Murine CD40 המופעל בתאי B יכול לשמש כדי ללמוד B-cell הפעלה התמיינות, וכן לחקור את הפוטנציאל שלהם לתפקד APC במבחנה in vivo. יתר על כן, הם מייצגים כלי מבטיח עבור יצירת חיסון או טיפול מונע נגד גידולים יסייע לענות על שאלות לגבי בטיחות immunogenicity של גישה זו<sup&gt; 12</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

Murine Model of CD40-activation of B cells

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את התהליך של הפעלת-CD40 והרחבה של תאים B Murine מ splenocytes של C57BL / 6 עכברים, אשר יכול לשמש תא מודל אנטיגן מציג (APC) ללמוד אינדוקציה של חסינות.

דגם Murine של הפעלת-CD40 בתאי B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

אינדוקציה והערכה של רקומבינציה החלף מחלקה ב מטוהרים תאים B Murine

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

רקומביננטי הפקה זיהום retroviral של תאים B

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Plaque Assay for Murine Norovirus

Assay רובד לnorovirus Murine

Murine norovirus (MNV) is the only member of the Norovirus genus that efficiently grows in tissue culture 1, 2. Cell lysis and cytopathic effect (CPE) are ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

איתור של True IgE להביע תאי Lineage העכבר B

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

דור של רקומביננטי אדם IgG נוגדנים חד שבטיים מתאים הממוינים B הונצחו

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

מודל Murine של הקבוצה B<em&gt; סטרפטוקוקוס</em&gt; נרתיקי Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

איתור והעשרה של נדיר- אנטיגן ספציפי בתאי B עבור ניתוח של הפנוטיפ ותפקוד

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

ניתוח של הטיה הנוצרות על-ידי זרימת נדידה של תאי B מאתר אזור שולי במבחנה

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

חוץ גופית במודל התמיינות תאי הזיכרון האנושי נורמלי B לתאי פלזמה חיים ארוכים

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...