Name: murine model of cd40-activation of b cells
Uploaded: 2010-03-05T17:30:09
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私たちは親切tmuCD40 - リガンド- HeLa細胞細胞株を提供するために博士はクレメンスWendtnerに感謝。

脾細胞からマウスCD40活性化B細胞（mCD40B）を生成するためのプロトコルは2つの部分に分かれています：パート板として使用されるマウスCD40リガンド（CD40L）を発現するHeLa細胞（tmuCD40L HeLa細胞）の調製を示していますフィーダー細胞に結合した。パートBは、実際のマウスCD40 - Bの文化を説明します。 フィーダー細胞のA.準備（tmuCD40L HeLa細胞） tmuCD40L He...

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	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, e1464-e1464 (2008).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+using+retrovirally+transduced+CD40-activated+B+cells.">Efficient generation of antigen-specific cytotoxic T cells using retrovirally transduced CD40-activated B cells.</a> J Immunol. 169 (4), 2164-2171 (2002).</li><li>Liebig, T. M., Fiedler, A., Zoghi, S., Shimabukuro-Vornhagen, A., Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+CD40-activated+B+cells.">Generation of human CD40-activated B cells.</a> J Vis Exp. 32, (2009).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107 (7), 2786-2789 (2006).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63 (11), 2836-2843 (2003).</li><li>Ahmadi, T., Flies, A., Efebera, Y., Sherr, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+Ligand-activated,+antigen-specific+B+cells+are+comparable+to+mature+dendritic+cells+in+presenting+protein+antigens+and+major+histocompatibility+complex+class+I-+and+class+II-binding+peptides.">CD40 Ligand-activated, antigen-specific B cells are comparable to mature dendritic cells in presenting protein antigens and major histocompatibility complex class I- and class II-binding peptides.</a> Immunology. 124 (1), 129-140 (2008).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. S. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99 (9), 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155 (2), 249-256 (2009).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25 (12), 659-664 (2004).</li><li>Mayr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+translocations+are+associated+with+poor+prognosis+in+chronic+lymphocytic+leukemia.">Chromosomal translocations are associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia.</a> Blood. 107 (2), 742-751 (2006).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15 (13), 955-965 (2008).</li></ol>

このプロトコルの変更も、マウスCD40活性化B細胞の効率的な世代に降伏、特にCD40刺激し、使用されるマウス系統のタイプの起源について、可能な限りされています。アフマディら。 CD40 -リガンドマウスでトランスフェクションしたマウス線維芽細胞に対して同様の結果が示されている。このコンテキストでは外来の抗原の提示を確実に除外されますが、in vivoでのセキュリティと毒性?...

メディアのA.の準備： <table border="1"><tbody><tr><td> フィーダー細胞の野生型媒体 </td><td> フィーダー細胞を選択培地 </td><td></td></tr><tr><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> RPMI 1640 </td><td></td></tr><tr><td> L -グルタミン</td><td> 300μg/ mLの</td><td> L -グルタミン</td><td> 300μg/ mLの</td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10パーセント</td><td> FBS </td><td> 10パーセント</td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mMの</td><td> HEPES </td><td> 10 mMの</td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td> 15μg/ mLの</td><td>ゲンタマイシン</td><td> 15μg/ mLの</td></tr><tr><td></td><td></td><td>ハイグロマイシンB </td><td>は0.2 mg / mLの</td></tr></table><table border="1"><tbody><tr><td> mCD40 - Bの洗浄媒体 </td><td> mCD40 - B培地 </td></tr><tr><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td></tr><tr></tr><tr><td> D - MEM </td><td> </td><td> D - MEM </td><td> </td></tr><tr><td> L -グルタミン</td><td> 580μg/ mLの</td><td> L -グルタミン</td><td> 580μg/ mLの</td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 4.5 mg / mLの</td><td>グルコース</td><td> 4.5 mg / mLの</td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mMの</td><td> HEPES </td><td> 10 mMの</td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td> 15μg/ mLの</td><td>ゲンタマイシン</td><td> 15μg/ mLの</td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> MEM </td><td> 0.1mmの（1X） </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> FBS </td><td> 10パーセント</td></tr></tbody></table> B.その他の試薬： <table border="1"><tr><td> 試薬 </td><td> 会社 </td><td> オーダーNo </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td>インビトロジェンギブコ</td><td> REF 21875 </td></tr><tr><td> D - MEM </td><td>インビトロジェンギブコ</td><td> REF 41965 </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS（10倍） </td><td> PAA </td><td>猫なしH15 - 011 </td></tr><tr><td> Gencin </td><td>デルタの選択</td><td>アートなし7395800 </td></tr><tr><td> FBS </td><td>ロンザ</td><td>猫なしDE14 - 802C </td></tr><tr><td> HEPESバッファー</td><td> PAA </td><td>猫なしS11 - 001 </td></tr><tr><td> MEM NEAA </td><td>インビトロジェンギブコ</td><td> REF 11140 </td></tr><tr><td>ハイグロマイシンB </td><td> PAA </td><td>猫なしP02 - 015 </td></tr><tr><td>組換えマウスインターロイキン-4 </td><td> Immunotools </td><td>猫なし12340045 </td></tr><tr><td>シクロスポリン</td><td>ノバルティス</td><td>猫なしNDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td>トリプシン/ EDTA（10倍） </td><td>インビトロジェンギブコ</td><td> REF 15400-054 </td></tr></table> C.その他の用品： <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 会社 </td><td> オーダーNo </td></tr><tr><td>滅菌ピペットチップ</td><td>ザルスタット</td><td></td></tr><tr><td> 6ウェルプレート</td><td> NUNC </td><td>猫なし140675 </td></tr><tr><td> 50mLのコニカルチューブ</td><td> BDファルコン™ </td><td>猫なし352070 </td></tr><tr><td>組織培養フラスコ</td><td>ザルスタット</td><td>猫なし83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

murine model of cd40-activation of b cells

B細胞の研究は、CD40の活性化が、その抗原提示能を改善することが示されています。インターロイキン-4およびCD40リガンド（CD40L）で刺激したとき、ヒトB細胞は、高純度のCD40 - B細胞の非常に大きな金額に14日以内に末梢血の少量から困難なく拡張することができます（&gt; 10<sup&gt; 9</sup健康なドナーだけでなく、癌患者から患者あたり&gt;細胞）<sup&gt; 1月4日</sup&gt;。 CD40 - B細胞が重要なリンパ節ホーミング分子を発現し、T細胞を引き付けることができる<em&gt; in vitroで</em<sup&gt; 5</sup&gt;。さらに彼らは、効率的にT細胞に、プロセスと存在する抗原を取る<sup&gt; 6,7</sup&gt;。 CD40 - B細胞は素数ナイーブではないだけに示して、だけでなく、メモリーT細胞を展開していた<sup&gt; 8,9</sup&gt;。したがって、CD40活性化B細胞（CD40 - B細胞）の細胞ベースのimmunotherapy1、5,10のための免疫刺激抗原提示細胞（APC）の代替源として研究されている。 CD40 - B細胞はin vivoで効果的なT細胞応答を誘導し、我々はマウスのCD40活性化B細胞の産生のために細胞培養系を確立し、基礎となるメカニズムを研究するかどうかをさらに研究するために。脾細胞を用いてまたはCD40 -活性化のためのC57BL / 6マウス由来のB細胞を精製し、最適な条件は次のように同定された：C57BL / 6マウス（ハプロタイプH - 2b）はリンパ球の脾臓細胞からの起動は、密度勾配遠心法により精製し、HeLa細胞と共培養されています組換えマウスCD40リガンド（tmuCD40L HeLa細胞）を発現する細胞<sup&gt; 11</sup&gt;。細胞は3-4日ごとにreculturedされており、そのようなCD40L、インターロイキン-4のような主要なコンポーネントは、-メルカプトエタノールおよびサイクロスポリンが補充されています。このプロトコルでは、ヒトCD40 - B細胞（図1A、B）と同様のAPC -表現型と完全に活性化マウスCD40 - B細胞を（mCD40B）を取得する方法を示しています。 CD40刺激は、急速な伸長や細胞培養の14日以内に高純度（&gt; 90％）CD19 + B細胞（図1C、D）の拡大につながる。非トランスフェクト細胞の混入を避けるために、トランスフェクタントでマウスCD40リガンドの発現は、（図2）定期的に制御する必要があります。マウスCD40活性化B細胞はB細胞の活性化と分化と同様にin vitroおよびin vivoにおけるAPCとして機能する潜在能力を調査するための研究に使用することができます。また、彼らは腫瘍に対する治療剤又は予防接種を確立するための有望なツールを示しており、このアプローチの安全性と免疫原性に関する質問に答えるために役立ちます。<sup&gt; 12</sup&gt;。

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Murine Model of CD40-activation of B cells

このビデオでは、我々は、CD40 -活性化と免疫の誘導を研究するためにモデル抗原提示細胞（APC）として使用することができますC57BL / 6マウスの脾臓細胞からマウスB細胞、の拡張の手順を示しています。

B細胞のCD40 -活性化のモデルマウス

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

マウスB細胞を精製における誘導とクラススイッチ組み換えの評価

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

B細胞の組換えレトロウイルスの生産と感染症

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

アレルゲン誘発性喘息のマウスモデル

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Plaque Assay for Murine Norovirus

マウスノロウイルスのプラークアッセイ

Murine norovirus (MNV) is the only member of the Norovirus genus that efficiently grows in tissue culture 1, 2. Cell lysis and cytopathic effect (CPE) are ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

真のIgE発現するマウスB系統細胞の検出

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

不死化ソートB細胞からの組換えヒトIgGモノクローナル抗体の作製

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

グループBのマウスモデル<em&gt;連鎖球菌</em&gt;膣植民地化

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

表現型および機能解析のためのレア抗原特異的B細胞の検出および濃縮

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

生体外でマウス縁帯 B 細胞のせん断流動誘起移行の解析

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

通常記憶 B 細胞の長命の形質細胞への分化モデル

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...