Name: murine model of cd40-activation of b cells
Uploaded: 2010-03-05T17:30:09
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

Biz lütfen Dr. Clemens Wendtner tmuCD40 Ligandla HeLa hücre hattı sağlamak için teşekkür ederiz.

Splenositlerin fare CD40 aktive B hücreleri (mCD40B) üretimi için protokol iki bölüme ayrılmıştır: Kısım A olarak kullanılacak plaka HeLa hücreleri (tmuCD40L HeLa), ifade fare CD40 ligand (CD40L) hazırlanmasında gösteriyor. besleyici hücreler bağlı. Bölüm B, gerçek bir fare CD40-B kültür açıklar. A. besleyici hücreler Hazırlama (tmuCD40L HeLa) TmuCD40L HeLa tamamen konfluent haline asla yapışık bir insan epitel hücre hattı,. Hücrel...

<ol>
	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, e1464-e1464 (2008).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+using+retrovirally+transduced+CD40-activated+B+cells.">Efficient generation of antigen-specific cytotoxic T cells using retrovirally transduced CD40-activated B cells.</a> J Immunol. 169 (4), 2164-2171 (2002).</li><li>Liebig, T. M., Fiedler, A., Zoghi, S., Shimabukuro-Vornhagen, A., Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+CD40-activated+B+cells.">Generation of human CD40-activated B cells.</a> J Vis Exp. 32, (2009).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107 (7), 2786-2789 (2006).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63 (11), 2836-2843 (2003).</li><li>Ahmadi, T., Flies, A., Efebera, Y., Sherr, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+Ligand-activated,+antigen-specific+B+cells+are+comparable+to+mature+dendritic+cells+in+presenting+protein+antigens+and+major+histocompatibility+complex+class+I-+and+class+II-binding+peptides.">CD40 Ligand-activated, antigen-specific B cells are comparable to mature dendritic cells in presenting protein antigens and major histocompatibility complex class I- and class II-binding peptides.</a> Immunology. 124 (1), 129-140 (2008).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. S. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99 (9), 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155 (2), 249-256 (2009).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25 (12), 659-664 (2004).</li><li>Mayr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+translocations+are+associated+with+poor+prognosis+in+chronic+lymphocytic+leukemia.">Chromosomal translocations are associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia.</a> Blood. 107 (2), 742-751 (2006).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15 (13), 955-965 (2008).</li></ol>

Bu protokolün, özellikle de verimli nesil fare CD40-aktive B hücreleri verimli CD40-uyarıcı ve kullanılan fare gerginlik türü, kökeni ile ilgili Değişiklikler mümkündür. Ahmedi et al. CD40 ligand fare ile transfekte fare fibroblastlar için benzer sonuçlar vermiştir. Xeno-antijen Bu bağlamda sunumda kesin olarak hariç, ama güvenlik ve in vivo toksisite ile ilgili yoğun çalışmalar insan transfekte HeLa hücreleri kullanarak bu ayarı inflamasyon veya oto-bağışıklık reaksiyonu için hi...

A. Medya Hazırlanışı: <table border="1"><tbody><tr><td> Besleyici hücre vahşi tip orta </td><td> Besleyici hücre seçimi orta </td><td></td></tr><tr><td> Reaktif </td><td> Konsantrasyon </td><td> Reaktif </td><td> Konsantrasyon </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> RPMI 1640 </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> 300 mcg / mL </td><td> L-Glutamine </td><td> 300 mcg / mL </td></tr><tr><td> FBS </td><td> % 10 </td><td> FBS </td><td> % 10 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 10 mM </td><td> Hepes </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamisin </td><td> 15 mcg / mL </td><td> Gentamisin </td><td> 15 mcg / mL </td></tr><tr><td></td><td></td><td> Hygromycin B </td><td> 0.2 mg / ml </td></tr></table><table border="1"><tbody><tr><td> mCD40-B yıkama orta </td><td> mCD40-B kültür ortamı </td></tr><tr><td> Reaktif </td><td> Konsantrasyon </td><td> Reaktif </td><td> Konsantrasyon </td></tr><tr></tr><tr><td> D-MEM </td><td> </td><td> D-MEM </td><td> </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> 580 mg / ml </td><td> L-Glutamine </td><td> 580 mg / ml </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 4,5 mg / ml </td><td> Glikoz </td><td> 4,5 mg / ml </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 10 mM </td><td> Hepes </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamisin </td><td> 15 mcg / mL </td><td> Gentamisin </td><td> 15 mcg / mL </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> MEM </td><td> 0.1mm (1x) </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> FBS </td><td> % 10 </td></tr></tbody></table> B. Çeşitli Reaktifler: <table border="1"><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Hiçbir sipariş </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 21.875 </td></tr><tr><td> D-MEM </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 41.965 </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS (10x) </td><td> PAA </td><td> Kedi No H15-011 </td></tr><tr><td> Gencin </td><td> Delta seçin </td><td> Art No 7395800 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Lonza </td><td> Kedi yok DE14-802C </td></tr><tr><td> Hepes Tampon </td><td> PAA </td><td> Kedi yok S11-001 </td></tr><tr><td> MEM NEAA </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 11140 </td></tr><tr><td> Hygromycin B </td><td> PAA </td><td> Kedi No P02-015 </td></tr><tr><td> Rekombinant murin İnterlökin-4 </td><td> Immunotools </td><td> Kedi yok 12340045 </td></tr><tr><td> Bir Siklosporin </td><td> Novartis </td><td> Kedi yok NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> Tripsin / EDTA (10x) </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 15400-054 </td></tr></table> C. Çeşitli Sarf Malzemeleri: <table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Hiçbir sipariş </td></tr><tr><td> Steril pipet uçları </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6-plaka </td><td> Nunc </td><td> Kedi yok 140.675 </td></tr><tr><td> 50ml konik tüp </td><td> BD Falcon ™ </td><td> Kedi yok 352.070 </td></tr><tr><td> Doku kültürü şişesi </td><td> Sarstedt </td><td> Kedi yok 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

murine model of cd40-activation of b cells

B hücreleri üzerinde araştırma CD40 aktivasyonu ve antijen sunumu kapasitesi iyileştirdiğini göstermiştir. Interlökin-4 ve CD40 ligand (CD40L) ile uyarıldığında, insan B hücreleri, 14 gün içinde son derece saf CD40-B hücreleri (çok büyük miktarda küçük miktarlarda periferik kan zorluklar olmadan açılabilir&gt; 10<sup&gt; 9</sup&gt; Hasta başına kanser hastalarının yanı sıra sağlıklı donörlerin hücrelerinin)<sup&gt; 1-4</sup&gt;. CD40-B hücreleri önemli lenf nodu homing molekülleri ifade ve T hücreleri çekebilecek<em&gt; In vitro</em<sup&gt; 5</sup&gt;. Ayrıca verimli T hücrelerine, süreç ve mevcut antijenlere kadar sürebilir<sup&gt; 6,7</sup&gt;. CD40-B hücreleri sadece başbakan naif değil gösterilen, aynı zamanda bellek T hücreleri genişletmek<sup&gt; 8,9</sup&gt;. Bu nedenle, CD40-aktive B hücreleri (CD40-B hücreleri) bir alternatif kaynak olarak çalışılmıştır immüno-uyarıcı hücre tabanlı immunotherapy1, 5,10 antijen sunan hücreler (APC). CD40-B hücreleri in vivo etkili T hücre yanıtları uyardığı ve fare CD40 aktive B hücreleri üretimi için bir hücre kültürü sistemi kurdu yatan mekanizma çalışma konusunda daha fazla çalışma için. Splenositlerin kullanılması veya CD40 aktivasyonu için C57BL / 6 fareler B hücreleri saflaştırılmış, optimal koşullar aşağıdaki gibi tespit edilmiştir: C57BL / 6 farelerinde (H-2b haplotip) lenfositler dalak itibaren yoğunluk gradiyenti santrifüj ve HeLa ile birlikte kültürlü arıtılmış rekombinant fare CD40 ligand (tmuCD40L HeLa) ifade hücreleri<sup&gt; 11</sup&gt;. Hücreler, 3-4 günde bir recultured ve CD40L, interlökin-4 gibi temel bileşenleri, mercaptoethanol ve siklosporin A takviye edilir. Bu protokolde insan CD40-B hücreleri (Şekil 1a, b) APC-fenotip benzer tam aktif fare CD40-B hücreleri (mCD40B) nasıl elde göstermektedir. CD40 stimülasyon hücre kültürü 14 gün içinde hızlı bir sonucudur ve yüksek saflıkta (&gt;% 90) CD19 + B hücreleri genişleme (Şekil 1c, d) yol açar. -Transfekte olmayan hücreleri ile kirlenmesini önlemek için, transfektanları fare CD40 ligand ekspresyonu (Şekil 2) düzenli olarak kontrol edilmesi. Murin CD40 aktive B hücreleri in vitro ve in vivo olarak APC olarak çalışması için kendi potansiyelini araştırmak için B-hücre aktivasyonu ve farklılaşması yanı sıra çalışma kullanılabilir. Ayrıca, tümörlere karşı tedavi veya önleyici aşı oluşturulması için umut verici bir aracı temsil eder ve bu yaklaşımın immünojenite ve güvenlik ile ilgili sorulara cevap vermeye yardımcı olacak<sup&gt; 12</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of CD40-activation of B cells at JoVE.com

Murine Model of CD40-activation of B cells

Bu video, CD40 aktivasyonu ve dokunulmazlık indüksiyonu eğitim için bir model antijen sunan hücre (APC) olarak da kullanılabilir C57BL / 6 farelerin dalak, fare B hücreleri genişleme prosedürü göstermektedir.

Murin Model B hücreleri CD40 aktivasyonu

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Sınıf Anahtarı Rekombinasyon murin B Hücreleri Saf İndüksiyon ve Değerlendirme

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Recombinant Retroviral Production and Infection of B Cells

B Hücreleri Rekombinant Retroviral Üretim ve Enfeksiyon

The transgenic expression of genes in eukaryotic cells is a powerful reverse genetic approach in which a gene of interest is expressed under the control ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Plaque Assay for Murine Norovirus

Mürin Norovirüs için Plak Testi

Murine norovirus (MNV) is the only member of the Norovirus genus that efficiently grows in tissue culture 1, 2. Cell lysis and cytopathic effect (CPE) are ...

Detection of True IgE-expressing Mouse B Lineage Cells

Doğru Algılama Fare B Lineage Hücreleri IgE-ifade

B lymphocyte immunoglobulin heavy chain (IgH) class switch recombination (CSR) is a process wherein initially expressed IgM switches to other IgH ...

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

Ölümsüzleştirilmiştir Sıralama B hücrelerinden Rekombinant İnsan IgG Monoklonal Antikorlarının Üretimi

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Fenotip ve Fonksiyon Analizi için algılama ve Nadir zenginleştirilmesi antijene özgü B hücreleri

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Yamultma akış kaynaklı geçiş antikorundan marjinal bölge B hücrelerinin in Vitro analizine

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

In Vitro Differentiation Model of Human Normal Memory B Cells to Long-lived Plasma Cells

Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

Plasma cells (PCs) secrete large amounts of antibodies and develop from B cells that have been activated. PCs are rare cells located in the bone marrow or ...