Name: multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques
Uploaded: 2010-04-22T17:35:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques at JoVE.com

الدكتور برامود Nehete والسيدة Nehete بهارتي للدماء وعينات المكاك PBMC ؛ وأيد هذا العمل جزئيا من أموال منحة من المعاهد القومية للصحة رقم 46969 ، وأنتجت كل خلية ثقافة وسائل الإعلام من قبل وسائل الإعلام مختبر المركزي ، الذي تموله المعاهد الوطنية للصحة منح CA 16672.

ويمكن تقسيم الإجراءات لتحليلات مفصلة المظهرية والوظيفية من الكل فضلا عن مجموعات فرعية من الخلايا التائية الذاكرة إلى أربعة أجزاء هي : 1) إعداد وتحفيز الخلية مستضدي ، 2) بالمتر تلطيخ علامة ، 3) بين الخلايا تلطيخ خلوى و 4) التدفق الخلوي التحليلات. <p class="jove_title" style=";text-align:r...

<ol>
	<li>Ogg, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+HIV-1-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+and+plasma+load+of+viral+RNA.">Quantitation of HIV-1-specific cytotoxic T lymphocytes and plasma load of viral RNA.</a> Science. 279, 2103-2106 (1998).</li><li>Borrow, P., Lewicki, H., Hahn, B. H., Shaw, G. M., Oldstone, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-specific+CD8++cytotoxic+T-lymphocyte+activity+associated+with+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+infection.">Virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte activity associated with control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 infection.</a> J Virol. 68, 6103-6110 (1994).</li><li>Koup, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+association+of+cellular+immune+responses+with+the+initial+control+of+viremia+in+primary+human+immunodeficiency+virus+type+1+syndrome.">Temporal association of cellular immune responses with the initial control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 syndrome.</a> J Virol. 68, 4650-4655 (1994).</li><li>Walker, J. M., Maecker, H. T., Maino, V. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+flow+cytometric+analysis+in+SIV-infected+rhesus+macaque.">Multicolor flow cytometric analysis in SIV-infected rhesus macaque.</a> Methods Cell Biol. 75, 535-557 (2004).</li><li>Pitcher, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+homeostasis+of+T+cell+memory+in+rhesus+macaque.">Development and homeostasis of T cell memory in rhesus macaque.</a> J Immunol. 168, 29-43 (2002).</li><li>Jung, T., Schauer, U., Heusser, C., Neumann, C., Rieger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+intracellular+cytokines+by+flow+cytometry.">Detection of intracellular cytokines by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 159, 197-207 (1993).</li><li>Keeney, T. S., Nomura, L. E., Maecker, H. T., Sastry, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+macaque+whole+blood+for+antigen-specific+intracellular+cytokine+production+by+T+lymphocytes.">Flow cytometric analysis of macaque whole blood for antigen-specific intracellular cytokine production by T lymphocytes.</a> J Med Primatol. 32, 23-30 (2003).</li><li>Gauduin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+intracellular+cytokine+staining+for+the+quantitation+of+antigen-specific+CD4++T+cell+responses+in+rhesus+macaques.">Optimization of intracellular cytokine staining for the quantitation of antigen-specific CD4+ T cell responses in rhesus macaques.</a> J Immunol Methods. 288, 61-79 (2004).</li><li>Baumgarth, N., Roederer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+multicolor+flow+cytometry+for+immunophenotyping.">A practical approach to multicolor flow cytometry for immunophenotyping.</a> J Immunol Methods. 243, 77-97 (2000).</li><li>De Rosa, S. C., Herzenberg, L. A., Roederer, M. 1. 1. -. c. o. l. o. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=13-parameter+flow+cytometry:+identification+of+human+naive+T+cells+by+phenotype,+function,+and+T-cell+receptor+diversity.">13-parameter flow cytometry: identification of human naive T cells by phenotype, function, and T-cell receptor diversity.</a> Nat Med. 7, 245-248 (2001).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li></ol>

الحل والمخازن <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ficoll - Hypaque (Histopaquen - 1077 ، سيغما الدريخ ، وسانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RPMI - 1640 المتوسطة (HyClone المختبرات ، لوغان ، UT) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المصل البقري الجنين (FBS) ، (HyClone المختبرات ، لوغان ، UT) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L - الجلوتامين (سيغما الدريخ ؛ سانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البنسلين / الستربتوميسين (Invitrogen ؛ كارلسباد ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التريبان الأزرق الكاشف (سيغما الدريخ ؛ سانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 ملي تريس ، PH 8.6 ؛ تصفيتها وتخزينها في 4 درجات مئوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dulbecco في برنامج تلفزيوني (DPBS ، Ca2/Mg2-free ؛ الحياة التكنولوجيات ، روكفيل ، دكتوراه في الطب) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفق العازلة غسل : تكملة DPBS FBS مع 2 ٪ ، وتخزينها في 4 درجات مئوية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دينار بحريني Cytofix / Cytoperm التثبيت / Permeabilization الحل كيت دينار بحريني (العلوم البيولوجية وسان خوسيه ، كاليفورنيا) </li></ul> التنشيط وكلاء <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Phorbol 12 - 13 - myristate خلات (PMA) (سيغما الدريخ ، وسانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ionomycin (سيغما الدريخ ، وسانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Costimulatory خريطة موقع CD49d ، استنساخ 9F10 دينار بحريني (العلوم البيولوجية وسان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقارب المنقى F الضد (أ ب) 2 شظايا من الماعز المضادة للماوس مفتش (H + L) (كيركيغارد وبيري مختبر ، غايثرسبيرغ ، MD) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تنشيط عوامل محددة تشمل برك الببتيد ، الببتيد واحد ، أو البروتين الكامل </li></ul> مثبطات إفراز خلوى <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Brefedin A (لمنتدى بواو الاسيوى ، سيغما الدريخ ، وسانت لويس ، MO) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن استخدامها بدلا من غولجي التوصيل دينار بحريني (العلوم البيولوجية وسان خوسيه ، كاليفورنيا) </li></ul> الأضداد <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعيش / قتلى ماء قابل للتثبيت طقم الفلورسنت وصمة عار (Invitrogen ؛ كارلسباد ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD3 PE - Cy7 (SP34 - 2) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD4 المحيط الهادئ (زرقاء OKT4) ، (eBiosciences (سان دييغو ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD8 Alexa700 (RPA - T8) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD28 - PerCP cy5.5 (L293) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD95 APC (DX2) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإنترفيرون FITC (B27) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> IL - 2 PE (MQ1 - 17H12) ، (العلوم البيولوجية دينار بحريني ، سان خوسيه ، كاليفورنيا) </li></ul>

multicolor flow cytometry analyses of cellular immune response in rhesus macaques

النموذج المكاك ريسوس حاليا أفضل نموذج المتاحة لمكافحة فيروس الإيدز فيما يتعلق بفهم المرضية فضلا عن تطوير لقاحات وعلاجات<sup&gt; 1،2،3</sup&gt;. هنا ، نحن تصف طريقة لتحليلات مفصلة المظهرية والوظيفية من الاستجابات المناعية الخلوية ، وتحديدا بين الخلايا إنتاج السيتوكينات من CD4 + و + CD8 خلايا تي ، فضلا عن مجموعات فرعية الذاكرة الفردية. حصلنا على دقة القياسات الكمية والنوعية لإنتاج الإنترفيرون جاما (INF) وانترلوكين (IL) -2 في كل CD4 + و CD8 + T خلايا من المكاك ريسوس PBMC حفز مع سلطة النقد الفلسطينية بالاضافة الى ionomycin (PMA + I). كانت ملامح خلوى مختلفة في مجموعات فرعية مختلفة من خلايا الذاكرة. وعلاوة على ذلك ، قدمت لنا هذا البروتوكول حساسية لإظهار الكسور ولو كانت بسيطة من المستضد CD4 + ومحددة CD8 + الخلايا التائية فرعية داخل عينات من المكاك وهو قرد اسيوي PBMC المحصنين مع لقاح مضاد لفيروس نقص المناعة البشرية المغلف كوكتيل الببتيد وضعت في مختبر لدينا. والتدفق الخلوي تقنية متعددة الألوان هي أداة قوية لتحديد بدقة مجموعات مختلفة من الخلايا T<sup&gt; 4،5</sup&gt; مع خلوى المنتجة للقدرة<sup&gt; 6</sup&gt; التالي التحفيز غير محددة أو محددة مستضد<sup&gt; 5،7</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques at JoVE.com

Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques

نحن لشرح فائدة التدفق الخلوي متعدد الألوان مفصلة عن توصيف المظهري والوظيفية من الكل فضلا عن مجموعات فرعية من الذاكرة CD4 + CD8 + وخلايا T في المكاك وهو قرد اسيوي ، والنموذج المثالي لإجراء دراسات لقاح فيروس نقص المناعة البشرية / الإيدز.

تحليلات متعددة الألوان من التدفق الخلوي الاستجابة المناعية الخلوية في المكاك وهو قرد اسيوي

The rhesus macaque model is currently the best available model for HIV-AIDS with respect to understanding the pathogenesis as well as for the development ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

قياس نشاط خلايا في Calpain الثابتة والعيش من خلال التدفق الخلوي

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Seven Steps to Stellate Cells

سبع خطوات لخلايا النجمية

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

تحليل التدفق الخلوي للخلايا المناعية وفي الفئران Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

الإنسان في المختبر قمع وأداة الكشف عن الاعتراف للدولة في وقت مبكر من الخلل المناعي

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

الكشف عن جسيمات متناهية الصغر نيون التفاعل مع مجموعات سكانية فرعية خلية المناعة الأولية من قبل التدفق الخلوي

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

في تحليل المختبر من الاستجابة المناعية الخلوية بوساطة Myd88 لفيروس غرب النيل المسخ سلالة العدوى

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

تحليل قردي نقص المناعة CD8 للفيروسات محددة<sup&gt; +</sup&gt; خلايا تي في القرد قرود المكاك التي كتبها الببتيد-MHC-I Tetramer تلطيخ

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

تحليل نوعي وكمي المشبك محصنة في النظام البشري باستخدام التصوير التدفق الخلوي

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

كوانتيتيشن خلية واحدة مرناً و "سطح التعبير البروتين" في خلايا CD4 المصابين "فيروس نقص المناعة القردي"+ "تي الخلايا المعزولة" من macaques ريسوس

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...