Name: preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling
Uploaded: 2010-02-09T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling at JoVE.com

Agradecemos a Sra. V. Lephart para manutenção de estoques voar Este trabalho foi financiado pelo National Institutes for Health subvenção (GM62916) e National Science Foundation subvenção (MCB0817107).

O seguinte protocolo para a preparação politênicos cromossomo de squash é uma adaptação do procedimento descrito no Johansen et al. (2009). 1. Cultura de larvas de terceiro instar Drosophila A fim de obter melhor cromossomos politênicos para preparações de squash de alta qualidade, condições de cultivo uncrowded são essenciais (ou seja, coloque em torno de 20 egg-laying moscas fêmeas em um padrão de garrafa fly 4 &quot;e mudar para u...

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	<li>Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+polymerase+II-mediated+transcription+at+active+loci+does+not+require+histone+H3S10+phosphorylation+in+Drosophila.">RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila.</a> Development. 135, 2917-2925 (2008).</li><li>DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+visualization+of+GFP-fusion+proteins+on+polytene+chromosomes.">Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes.</a> Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).</li><li>Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+transcription+and+epigenetic+chromatin+modification+in+Drosophila+polytene+chromosome+squash+preparations+using+antibodies.">Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies.</a> Methods. 48, 387-397 (2009).</li></ol>

A inclusão de ácido acético e láctico em protocolos convencionais de fixação de squash facilita tanto a resolução interband e braço cromossômico de propagação mas infelizmente alguns epítopos não sobrevivem este tratamento. Um exemplo de tal é um epítopo H3S10ph (Cai et al., 2008). Uma vez que o tratamento com ácido também tem a desvantagem de que sacia a fluorescência inerente de proteínas GFP, DiMario et al. (2006) desenvolveu recentemente um formaldeído-based &quot;técnica de s...

preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling

Drosophila tem sido um modelo de sistema favorito para estudar a relação entre estrutura da cromatina e regulação de genes devido às vantagens citológicos fornecidos pela gigante cromossomos politênicos da glândula salivar de larvas de terceiro ínstar. Neste tecido dos cromossomos passar por muitos ciclos de replicação, na ausência de divisão celular dando origem a cerca de 1000 cópias. O DNA permanece alinhada após cada ciclo replicativo, resultando em cromossomos muito alargada que fornecem uma oportunidade única para correlacionar a morfologia da cromatina com a localização de proteínas específicas. Conseqüentemente, tem havido um alto nível de interesse na definição das modificações epigenéticas presente em genes diferentes e em diferentes estágios do processo de transcrição. Uma ferramenta importante para esses estudos é a rotulagem dos cromossomos politênicos com anticorpos para a enzima, fator de transcrição, ou modificação das histonas de interesse. Este protocolo de vídeo ilustra a técnica de squash usado no laboratório de Johansen para preparar cromossomos politênicos de Drosophila para a rotulagem de anticorpos.

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Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Este protocolo de vídeo ilustra a técnica de squash usado em laboratório para preparar Johansen<em&gt; Drosophila</em&gt; Cromossomos politênicos para a rotulagem de anticorpos.

Preparação de Abóboras Drosophila cromossomos politênicos para Rotulagem de anticorpos

Drosophila has long been a favorite model system for studying the relationship between chromatin structure and gene regulation due to the cytological ...

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The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

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Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...