Name: preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling
Uploaded: 2010-02-09T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling at JoVE.com

Agradecemos a la Sra. V. Lephart para el mantenimiento de poblaciones de moscas Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud de subvención (GM62916) y la National Science Foundation (MCB0817107).

El siguiente protocolo para la preparación de la calabaza politénicos cromosoma es una adaptación del procedimiento descrito en Johansen et al. (2009). 1. Cultura de tercer estadio las larvas de Drosophila Con el fin de obtener óptimos cromosomas politénicos de alta calidad de las preparaciones squash, las condiciones de cultivo con poca gente son esenciales (es decir, el lugar alrededor de 20 huevos moscas hembra en un estándar de 4 botella...

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	<li>Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+polymerase+II-mediated+transcription+at+active+loci+does+not+require+histone+H3S10+phosphorylation+in+Drosophila.">RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila.</a> Development. 135, 2917-2925 (2008).</li><li>DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+visualization+of+GFP-fusion+proteins+on+polytene+chromosomes.">Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes.</a> Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).</li><li>Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+transcription+and+epigenetic+chromatin+modification+in+Drosophila+polytene+chromosome+squash+preparations+using+antibodies.">Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies.</a> Methods. 48, 387-397 (2009).</li></ol>

La inclusión de los ácidos acético y láctico en los protocolos convencionales de squash fijación facilita tanto la resolución interbandas y brazo cromosómico de propagación, pero, lamentablemente, algunos epítopos no sobreviven a este tratamiento. Un ejemplo de este tipo es un epítopo H3S10ph (Cai et al., 2008). Dado que el tratamiento con ácido también tiene la desventaja de que apaga la fluorescencia intrínseca de las buenas prácticas agrarias de etiquetado proteínas, DiMario et al. (2...

preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling

Drosophila ha sido durante mucho tiempo un sistema modelo preferido para el estudio de la relación entre la estructura de la cromatina y la regulación de genes debido a las ventajas citológico siempre por el gigante de los cromosomas politénicos de las glándulas salivales de las larvas. En este tejido se someten a los cromosomas de muchas rondas de replicación en la ausencia de división celular que da lugar a unas 1000 copias. El ADN permanece alineado después de cada ciclo de replicación de los cromosomas que resulta muy ampliado que proporcionan una oportunidad única para relacionar la morfología de la cromatina con la localización de proteínas específicas. En consecuencia, ha habido un alto nivel de interés en la definición de las modificaciones epigenéticas presentes en genes diferentes y en diferentes etapas del proceso de transcripción. Una herramienta importante para estos estudios es el etiquetado de los cromosomas politénicos con anticuerpos frente a la enzima, el factor de transcripción, o modificación de las histonas de interés. Este protocolo de vídeo muestra la técnica de squash utilizados en el laboratorio para preparar Johansen Drosophila cromosomas politénicos para el etiquetado de anticuerpos.

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Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Este protocolo de vídeo muestra la técnica de squash utilizados en el laboratorio para preparar Johansen<em&gt; Drosophila</em&gt; Cromosomas politénicos para el etiquetado de anticuerpos.

Preparación de los cromosomas politénicos de Drosophila Calabazas para el Etiquetado de anticuerpos

Drosophila has long been a favorite model system for studying the relationship between chromatin structure and gene regulation due to the cytological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Preparación de cultivos neuronales a partir de embriones de Drosophila Midgastrula Etapa

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Investigación

Biología

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

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La preparación de los Drosophila Los embriones para Live-Imaging utilizando el protocolo de gota

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

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Marcaje fluorescente de Drosophila Estructuras del Corazón

The Drosophila melanogaster dorsal vessel, or heart, is a tubular structure comprised of a single layer of contractile cardiomyocytes, pericardial cells ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

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Preparación de embriones para Microscopía Electrónica de la Drosophila Tubo cardíaco embrionario

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

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La disección en vivo de Drosophila Los embriones: métodos simplificados para la detección colecciones mutantes tinción con anticuerpos

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

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Preparación de desarrollo y de adultos Drosophila Los cerebros y retinas de imágenes en vivo

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Preparación de Drosophila Células S2 para microscopía de luz

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

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Preparación de los adultos Drosophila Ojos de seccionamiento fino y análisis microscópico

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

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El estudio de puesto de control mitótico, ilustrando comportamiento dinámico de proteínas cinetocoro y el movimiento de cromosomas en vivo<em&gt; Drosophila</em&gt; Los embriones Sincitial

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Chromosome Preparation From Cultured Cells

Cromosoma Preparación de las células cultivadas

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...