Name: preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling
Uploaded: 2010-02-09T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling at JoVE.com

Vi tackar Ms V. Lephart för underhåll av fluga lager Detta arbete stöddes av National Institutes for Health bidrag (GM62916) och National Science Foundation (MCB0817107).

Följande protokoll för polytene kromosom squash förberedelse är anpassad från det förfarande som beskrivs i Johansen et al. (2009). 1. Kultur för tredje INSTAR Drosophila larver För att få optimal polytene kromosomer för hög förberedelser kvalitet squash, uncrowded odling villkor är viktiga (dvs plats runt 20 äggläggande hona flugor i en standard 4 &quot;flyga flaska och byta till en ny flaska varje dag). Välj den fetaste individer...

<ol>
	<li>Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+polymerase+II-mediated+transcription+at+active+loci+does+not+require+histone+H3S10+phosphorylation+in+Drosophila.">RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila.</a> Development. 135, 2917-2925 (2008).</li><li>DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+visualization+of+GFP-fusion+proteins+on+polytene+chromosomes.">Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes.</a> Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).</li><li>Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+studying+transcription+and+epigenetic+chromatin+modification+in+Drosophila+polytene+chromosome+squash+preparations+using+antibodies.">Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies.</a> Methods. 48, 387-397 (2009).</li></ol>

Införandet av ättiksyra och mjölksyra i konventionella protokoll squash fixering underlättar både interband upplösning och kromosomala armen sprids men tyvärr vissa epitoper inte överlever denna behandling. Ett exempel på en sådan epitop är H3S10ph (CAI et al., 2008). Sedan syrabehandling har också nackdelen att det släcker inneboende fluorescens GFP taggade-proteiner, DiMario et al. (2006) nyligen utvecklat en formaldehydbaserade &quot;syrafritt squash teknik&quot; som möjliggör direkt ...

preparation of drosophila polytene chromosome squashes for antibody labeling

Drosophila har länge varit en favorit modellsystem för att studera sambandet mellan kromatinstrukturen och genreglering på grund av den cytologiska fördelar som den jättelika saliv kromosomer körtel polytene tredje INSTAR larver. I denna vävnad kromosomerna genomgår många rundor av replikering i avsaknad av celldelning som ger upphov till cirka 1000 exemplar. De DNA kvar anpassat efter varje replikationsförmåga cykel resulterar i kraftigt förstorad kromosomer som ger en unik möjlighet att korrelera kromatin morfologi med lokalisering av specifika proteiner. Därför har det funnits en hög nivå av intresse i fastställandet av epigenetiska modifieringar närvarande vid olika gener i olika skeden av transkriptionen. Ett viktigt verktyg för sådana studier är märkning av polytene kromosomer med antikroppar mot enzymet, transkriptionsfaktor, eller histon ändring av intresse. Denna video protokoll illustrerar squash teknik som används i Johansen laboratoriet att förbereda Drosophila polytene kromosomer för antikroppar märkning.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling at JoVE.com

Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Denna video protokoll illustrerar squash teknik som används i Johansen laboratoriet att förbereda<em&gt; Drosophila</em&gt; Polytene kromosomer för antikroppar märkning.

Beredning av Drosophila polytene Kromosom Squash för Antibody Labeling

Drosophila has long been a favorite model system for studying the relationship between chromatin structure and gene regulation due to the cytological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Beredningen av Drosophila Embryon för Live-Imaging Använda droppe protokollet

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Fluorescerande märkning av Drosophila Heart strukturer

The Drosophila melanogaster dorsal vessel, or heart, is a tubular structure comprised of a single layer of contractile cardiomyocytes, pericardial cells ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Live dissekering av Drosophila Embryon: Effektivare metoder för screening Mutant Samlingar av Antibody färgning

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Beredning av Utveckla och vuxna Drosophila Brains och retinae för Live Imaging

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Beredning av Drosophila S2 celler för ljusmikroskop

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Beredning av vuxna Drosophila Ögon för Thin Sektionering och mikroskopisk analys

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

Studera Mitotisk Checkpoint genom att illustrera Dynamic kinetochore Protein beteende och kromosomer Motion i levande<em&gt; Drosophila</em&gt; Syncytiala Embryon

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Chromosome Preparation From Cultured Cells

Kromosom Förberedelser från odlade celler

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...