Name: dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Canadese Institutes of Health Research (CIHR), de Peter Lougheed Medical Research Foundation, de McGill Program in Neuroengineering, het Fonds de Recherche en Sante du Quebec (FRSQ), en de Canada Foundation voor Innovatie (CFI ). Sebastien D. Langlois werd ondersteund door een opleiding Master&#39;s Award van het Fonds de la Recherche en sante du Quebec (FRSQ) en door een Frederick Banting en Charles Best Graduate Canada Beurzen Master Award van de Canadese Institutes of Health Research (CIHR). Wij zijn dankbaar voor Jessica MT Pham voor hulp met cijfers.

1. Dissectie van embryonale rat dorsale ruggenmerg Algemene aanbevelingen Houd L-15-medium op het ijs en vaak het medium verandering in de dissectie schotel om de embryo&#39;s af te koelen. Dit spaart weefsel integriteit. Alle stappen worden uitgevoerd met twee paar van Dumont # 5 tang tenzij anders vermeld. Om contaminatie te voorkomen, spray alle gereedschappen en werkoppervlakken met 70% ethanol en houden dissectie medium fles gesloten. Voor de overdracht van embry...

<ol>
	<li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance.">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li><li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc.">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li><li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression.">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons.">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li><li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical,+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway.">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li></ol>

We hebben beschreven een methode te ontleden en cultuur commissural neuronen uit embryonale rat ruggenmerg. Deze procedure is routinematig gebruikt in ons lab om op betrouwbare wijze voor te bereiden neuronen om de cellulaire en moleculaire mechanismen van axon begeleiding te bestuderen. Voor celbiologie en immunochemie experimenten, dissectie van een nest produceert voldoende neuronen. Wanneer er meer cellen nodig zijn, kunnen dergelijke zoals in veel biochemie experimenten, dissectie van twee nestjes nodig zijn. Voor ...

Dissectie van embryonale rat dorsale ruggenmerg (zie ook tabel I) <ul><li> E13 zwangerschap geënsceneerd rat </li><li> Ethanol 70% </li><li> Chirurgische schaar, Fine Science Tools </li><li> Tang, Dumont # 5, Fine Science Tools </li><li> Petrischalen </li><li> L-15-medium </li><li> Dissection microscoop, Leica </li><li> Plastic overdracht pipetten </li><li> Microscissors, Fine Science Tools </li><li> Tungsten naalden en pin houders van (een haakvormige naald, een L-vormen naald, een rechte naald), Fine Science Tools </li><li> Hitte-geïnactiveerd Horse Serum (HiHS) </li><li> 15 ml plastic buizen </li></ul> Commissural neuron cultuur (zie ook tabel I) <ul><li> Weefselkweek incubatoren (37 ° C, 5% CO 2, vochtigheid) </li><li> Duitse Desag dekglaasjes en / of kunststof weefselkweek gerechten </li><li> Poly-L-lysine, Sigma </li><li> Steriele milliQ H 2 O </li><li> Neurobasal, Invitrogen </li><li> Hitte-geïnactiveerd foetaal runderserum (HiFBS) </li><li> L-Glutamine </li><li> B27, Invitrogen </li><li> Penicilline / streptomycine antibiotica </li><li> 37 ° C waterbad </li><li> Steriel Pasteur Pipetten </li><li> Bunsen gasbrander </li><li> HBSS, Ca 2 + / Mg 2 +-vrij, Invitrogen </li><li> DNAse, Worthington </li><li> MgSO 4 </li><li> Centrifuge </li><li> Hemacytometer </li><li> Trypan blauwe oplossing </li></ul>

dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord

Commissural neuronen zijn op grote schaal gebruikt om de mechanismen die ten grondslag liggen aan axon begeleiding tijdens de embryonale ontwikkeling van het ruggenmerg te onderzoeken. De cellichamen van deze neuronen bevinden zich in het dorsale ruggenmerg en hun axonen volgen stereotiepe trajecten tijdens de embryonale ontwikkeling. Commissural axonen in eerste instantie ventraal project de richting van de vloerplaat. Na het oversteken van de middellijn, deze axonen naar voren en het project richting de hersenen. Elk van deze stappen wordt gereguleerd door de werking van verschillende begeleiding cues. Culturen sterk verrijkt in commissural neuronen zijn bij uitstek geschikt voor vele experimenten het aanpakken van de mechanismen van axon pathfinding, waaronder het draaien assays, immunochemie en biochemie. Hier beschrijven we een methode te ontleden en cultuur commissural neuronen van de E13 rat dorsale ruggenmerg. Eerst wordt het ruggenmerg geïsoleerd en dorsale strips ontleed uit. De dorsale weefsel wordt dan gedissocieerd in een cel schorsing door behandeling met trypsine en mechanische storingen. Neuronen zijn uitgeplaat op poly-L-lysine-gecoat glas dekglaasjes of weefselkweek gerechten. Na 30 uur<em&gt; In vitro</em&gt; Hebben de meeste neuronen uitgebreid een axon. De zuiverheid van de cultuur (Yam<em&gt; Et al..</em&gt; 2009), meestal meer dan 90%, kan worden beoordeeld door immunokleuring met de commissural neuron markers DCC, LH2 en TAG1 (Helms en Johnson, 1998). Dit neuronale voorbereiding is een nuttig hulpmiddel voor<em&gt; In vitro</em&gt; Onderzoek naar de cellulaire en moleculaire mechanismen van commissural axon groei en begeleiding bij het ruggenmerg ontwikkeling.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Deze video toont een methode te ontleden en cultuur commissural neuronen van de E13 rat dorsale ruggenmerg. Gedissocieerd commissural neuronen zijn nuttig om de cellulaire en moleculaire mechanismen van axon groei en begeleiding te bestuderen.

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection en Primaire Cultuur van de embryonale Mouse hippocampus en de corticale neuronen

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Dissectie en Cultuur van Chick Statoacoustic Ganglion en Spinal Cord Explantaten in Collageen Gels voor neurietuitgroei Assays

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Een Functionele Motor-eenheid in de cultuur Dish: Co-cultuur van het ruggenmerg Explantaten-en spiercellen

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

Dii-Etikettering van de DRG neuronen om Study Axonale Vertakkingen in een hele berg Voorbereiding van muis embryonale ruggenmerg

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Cultuur en Analyse van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonale netvliesweefsel

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Cultuur Protocol

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

Dissectie en horizontale bevestiging van de zebravis embryo&#39;s: Analyse van Spinal Cord Development

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA-Seq Analyse van differentiële genexpressie in Geëlektroporeerde Chick Embryonale Spinal Cord

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Isolatie, Cultuur en onderhoud op lange termijn van de Primary mesencefale dopaminerge neuronen uit embryonale knaagdieren Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

zebravis<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Voorbereiding voor elektrofysiologische registraties van Spinal sensorische en motorische neuronen

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...