Name: dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par des subventions des Instituts canadiens de recherche en santé du Canada (IRSC), le chercheur Peter Lougheed Medical Research Foundation, le Programme de McGill en neuroingénierie, le Fonds de Recherche en Santé du Québec (FRSQ) et la Fondation canadienne pour l&#39;innovation (FCI ). Sébastien D. Langlois a été soutenue par de bourse de formation à la maîtrise de la Fonds de la recherche en santé du Québec (FRSQ) et par une Frederick Banting et Charles Prix du Meilleur études supérieures du Canada Bourses de maîtrise des Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC). Nous sommes reconnaissants à Jessica Pham MT à l&#39;aide de chiffres.

1. Dissection de la moelle épinière de rats dorsale embryonnaire Les recommandations générales Gardez milieu L-15 sur la glace et changer fréquemment la moyenne dans le plat de dissection de garder les embryons frais. Cela permet de préserver l&#39;intégrité des tissus. Toutes les étapes sont réalisées avec deux paires de pinces # 5 Dumont sauf indication. Pour éviter la contamination, par pulvérisation tous les outils et les surfaces de travail avec 70% ...

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	<li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance.">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li><li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc.">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li><li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression.">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons.">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li><li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical,+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway.">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li></ol>

Nous avons décrit une méthode de disséquer et de la culture des neurones commissuraux de la moelle épinière de rats embryonnaires. Cette procédure a été couramment utilisée dans notre laboratoire pour préparer les neurones de manière fiable pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires du guidage axonal. Pour la biologie cellulaire et des expériences d&#39;immunochimie, la dissection d&#39;une litière suffisante produit des neurones. Lorsque plusieurs cellules sont nécessaires, comme dans de n...

Dissection de la moelle épinière de rats dorsale embryonnaire (voir aussi tableau I) <ul><li> E13 grossesse scène du rat </li><li> 70% d&#39;éthanol </li><li> Ciseaux chirurgicaux, Outils Fine Science </li><li> Pinces, Dumont # 5, Outils Fine Science </li><li> Boîtes de Pétri </li><li> Milieu L-15 </li><li> Microscope à dissection, Leica </li><li> Pipettes de transfert en plastique </li><li> Microciseaux, Outils Fine Science </li><li> Aiguilles de tungstène et les détenteurs de broches (un crochet en forme de l&#39;aiguille, un L-formes d&#39;aiguille, une aiguille droite), Outils Fine Science </li><li> Cheval inactivés par la chaleur du sérum (HiHS) </li><li> 15 ml tubes en plastique </li></ul> Commissurales neurone de la culture (voir aussi tableau I) <ul><li> Incubateurs de culture de tissus (37 ° C, 5% de CO 2, à l&#39;humidité contrôlée) </li><li> Allemande des lamelles en verre Desag et / ou en plastique des boîtes de culture tissulaire </li><li> Poly-L-lysine, Sigma </li><li> Stérile milliQ H 2 O </li><li> Neurobasal, Invitrogen </li><li> Inactivés par la chaleur sérum fœtal bovin (HiFBS) </li><li> L-Glutamine </li><li> B27, Invitrogen </li><li> Pénicilline / streptomycine antibiotiques </li><li> Bain-marie à 37 ° C </li><li> Stérile pipettes Pasteur </li><li> Bunsen brûleur à gaz </li><li> HBSS, Ca 2 + / Mg 2 + libre, Invitrogen </li><li> DNAse, Worthington </li><li> MgSO 4 </li><li> Centrifugeuse </li><li> Hémacytomètre </li><li> Solution de bleu trypan </li></ul>

dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord

Neurones commissuraux ont été largement utilisées pour étudier les mécanismes sous-jacents guidage axonal pendant le développement embryonnaire, la moelle épinière. Les corps cellulaires de ces neurones sont situés dans la moelle épinière dorsale et leurs axones suivent des trajectoires stéréotypées pendant le développement embryonnaire. Axones commissuraux initialement projet ventralement vers la plaque de sol. Après avoir traversé la ligne médiane, ces axones tourner vers l&#39;avant et le projet vers le cerveau. Chacune de ces étapes est réglementée par l&#39;action de plusieurs signaux de guidage. Cultures hautement enrichi dans les neurones commissuraux sont idéalement adaptés à de nombreuses expériences aborder les mécanismes de pathfinding axone, y compris les essais de tournage, l&#39;immunochimie et la biochimie. Ici, nous décrivons une méthode de disséquer et de la culture des neurones commissuraux de la moelle épinière de rats E13 dorsale. Tout d&#39;abord, la moelle épinière est isolé et bandes dorsales sont disséquées. Le tissu dorsale est alors dissocié en une suspension de cellules par trypsinisation et les perturbations mécaniques. Les neurones sont étalées sur des lamelles en verre poly-L-lysine ou de culture de tissus plats. Après 30 heures<em&gt; In vitro</em&gt;, La plupart des neurones ont prolongé d&#39;un axone. La pureté de la culture (Yam<em&gt; Et al.</em&gt; 2009), généralement plus de 90%, peut être évaluée par immunomarquage avec le neurone marqueurs CDC, commissurale LH2 et TAG1 (Helms et Johnson, 1998). Cette préparation neuronale est un outil utile pour<em&gt; In vitro</em&gt; Les études des mécanismes cellulaires et moléculaires de la croissance des axones commissuraux et des conseils lors du développement de la moelle épinière.

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Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Cette vidéo montre une méthode de disséquer et de la culture des neurones commissuraux de la moelle épinière de rats E13 dorsale. Dissocié neurones commissuraux sont utiles pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la croissance de l&#39;axone et d&#39;orientation.

Dissection et la culture de neurones de la moelle épinière commissurales embryonnaires

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

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