Name: dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הקנדי לבריאות מחקר (CIHR), את פיטר Lougheed למחקר רפואי הקרן, תוכנית מקגיל ב Neuroengineering, Fonds דה משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ), וכן קרן קנדה עבור חדשנות (CFI ). סבסטיאן ד Langlois נתמך על ידי פרס הדרכה מוסמך של Fonds de la משוכלל ונדיר en סנטה קוויבק (FRSQ) ועל ידי פרדריק בנטינג וצ&#39;רלס בסט פרס קנדה מלגות לתואר שני מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). אנחנו אסירי תודה על ג&#39;סיקה MT פאם לסיוע עם דמויות.

1. Dissection של חוט השדרה הגבי עוברי חולדה המלצות כלליות שמור L-15 בינוני על הקרח ולעתים קרובות לשנות את המדיום בצלחת לנתיחה כדי לשמור על העוברים מגניב. זה עוזר לשמור על שלמות רקמות. כל השלבים מתבצעים ע...

<ol>
	<li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance.">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li><li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc.">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li><li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression.">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons.">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li><li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical,+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway.">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li></ol>

תיארנו שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה עכברוש עובריים. הליך זה נעשה שימוש שגרתי במעבדה שלנו באופן מהימן להכין נוירונים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של הדרכה האקסון. עבור ביולוגיה של התא וניסויים immunochemistry, דיסקציה של פסולת מהן מניבה מספיק נוירונ...

Dissection של חוט השדרה הגבי עוברי עכברים (ראה גם טבלה I) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> E13 להריון מבוים עכברוש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתנול 70% </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים כירורגיות, כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלקחיים, דומון # 5, כלים המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות פטרי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L-15 בינוני </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dissection מיקרוסקופ, Leica </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת pipettes פלסטיק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microscissors, כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טונגסטן מחטים בעלי פינים (אחד וו בצורת מחט, אחת L-צורות מחט, אחד מחט ישר), כלי המדע פיין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חום מומת סוס סרום (HiHS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 צינורות פלסטיק מ&quot;ל </li></ul> Commissural נוירון תרבות (ראה גם טבלה I) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות רקמות החממות (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, לחות מבוקרים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגרמני Desag coverslips זכוכית ו / או פלסטיק תרבות מנות רקמה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פולי-L-ליזין, סיגמא </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי milliQ H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Neurobasal, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חום מומת בסרום שור עוברית (HiFBS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L-גלוטמין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> B27, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פניצילין / סטרפטומיצין אנטיביוטיקה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 37 ° C waterbath </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי פסטר pipettes </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בונזן מבער גז </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS, Ca 2 + / Mg 2 + חינם, Invitrogen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DNAse, וורטינגטון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MgSO 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרכזת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemacytometer </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypan פתרון כחול </li></ul>

dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord

נוירונים Commissural היה בשימוש נרחב כדי לחקור את המנגנונים הדרכה האקסון במהלך ההתפתחות העוברית חוט השדרה. גופי התא של הנוירונים האלה נמצאים בעמוד השדרה הגבי ו האקסונים שלהם לעקוב אחר מסלולי סטריאוטיפית במהלך ההתפתחות העוברית. אקסונים Commissural בתחילה הפרויקט ventrally כלפי floorplate. לאחר חציית קו האמצע, אקסונים אלה להפוך anteriorly הפרויקט לכיוון המוח. כל אחד משלבים אלה מוסדר על ידי פעולה של אותות הדרכה מספר. תרבויות מועשר בנוירונים commissural מתאימות בצורה אידיאלית עבור ניסויים רבים בהתמודדות עם מנגנוני pathfinding האקסון, כולל מבחני מפנה, immunochemistry וביוכימיה. כאן אנו מתארים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. ראשית, חוט השדרה מופרד רצועות הגב הם גזור החוצה. הרקמה הגב אז הוא ניתק את ההשעיה על ידי תא trypsinization והפרעה מכאנית. נוירונים הם מצופה על פולי-L-ליזין coverslips מצופים זכוכית או רקמות תרבות הכלים. לאחר 30 שעות<em&gt; במבחנה</em&gt; רוב הנוירונים הרחיבו האקסון. טוהר התרבות (ים<em&gt; Et al.</em&gt; 2009), בדרך כלל מעל 90%, ניתן להעריך על ידי immunolabeling עם DCC נוירון סמנים commissural, LH2 ו TAG1 (הלמס וג&#39;ונסון, 1998). זו הכנה העצבית הוא כלי שימושי עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; מחקרים של המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון הדרכה commissural ובמהלך התפתחות חוט השדרה.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

סרט הווידאו הזה מדגים שיטה לנתח ותרבות נוירונים commissural מחוט השדרה הגבי E13 חולדה. נוירונים commissural ניתק מועילים כדי ללמוד את המנגנונים תאית ומולקולרית של צמיחה האקסון והדרכה.

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection ותרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס עכבר עובריים קליפתיים

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Dissection והתרבות של גנגליון צ&#39;יק Statoacoustic Explants ואת חוט השדרה ג&#39;ל קולגן עבור מבחני תוצאה Neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

יחידת מנוע פונקציונלית בצלחת תרבות: עמית תרבות Explants חוט השדרה לתאי השריר

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DiI-תיוג של נוירונים DRG לחקר axonal מסעף בהכנת הר שלם של חוט השדרה עובריים בעכבר

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

פרוטוקול עוף עובר חוט שדרת Slice תרבות

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

נתיחה והרכבה לרוחב של עוברי דג הזברה: ניתוח התפתחות חוט השדרה

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA-Seq ניתוח של ביטוי הגנים בדיפרנציאל חוט השדרה Electroporated אפרוח עוברי

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...