Name: dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

この作品は、カナダ衛生研究所（CIHR）、ピーターライード医学研究財団、Neuroengineeringのマギルプログラムからの補助金によって支えられて、フォンデルシェルシュエンサンテケベック（FRSQ）、およびイノベーションのためのカナダ基金（CFI ）。セバスチャンD.ラングロワはデラルシェルシュエンサンテケベック（FRSQ）と健康研究（CIHR）のカナダの協会からフレデリックバンティングとチャールズベストカナダ大学院奨学金で修士賞フォンからマスターのトレーニング賞によってサポートされていました。我々は数字の支援のためのジェシカMTファムに感謝しています。

1。ラット胚の背側脊髄の解剖一般的な推奨事項氷の上でL - 15培地を維持し、頻繁に胚を低温に保つための解剖皿に培地を変更してください。これは、組織の整合性を維持することができます。記載がない限り、すべての手順は、デュモン＃5鉗子の二組で行われます。コンタミネーションを避けるために、70％エタノールですべてのツールと​​作業面?...

<ol>
	<li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance.">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li><li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc.">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li><li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression.">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons.">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li><li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical,+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway.">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li></ol>

我々は、ラット胚脊髄から交連神経細胞を細かく分析し、文化に方法を記載している。この手順は、定期的に確実に軸索ガイダンスの細胞および分子メカニズムを研究する神経細胞を準備する私たちのラボで使用されています。細胞生物学および免疫化学実験、一腹の子の解剖のために十分なニューロンを生成します。より多くの細胞がこのような多くの生化学の実験のように、必要な場合?...

ラット胚の背側脊髄の解剖（表Iも参照） <ul><li> E13ラットの妊娠は、上演</li><li> 70％エタノール</li><li>手術用はさみ、ファイン科学ツール</li><li>鉗子、デュモン＃5、ファイン科学ツール</li><li>ペトリ皿</li><li> L - 15培地</li><li>解剖顕微鏡、ライカ</li><li>プラスチック製のトランスファーピペット</li><li> Microscissors、ファイン科学ツール</li><li>タングステン針とピンホルダー（つのフックの形をした針、1つのL形状の針、1本の直線針）、ファイン科学ツール</li><li>熱不活化ウマ血清（HiHS） </li><li> 15ミリリットルプラスチックチューブ</li></ul>交連ニューロンの文化（I表も参照） <ul><li>組織培養インキュベーター（37℃、5％CO 2、湿度制御） </li><li>ドイツDesagのガラス製カバースリップおよび/またはプラスチック製組織培養ディッシュ</li><li>ポリ- L -リジン、シグマ</li><li>滅菌ミリQ H 2 O </li><li> Neurobasal、インビトロジェン</li><li>熱不活化ウシ胎児血清（HiFBS） </li><li> L -グルタミン</li><li> B27、インビトロジェン</li><li>ペニシリン/ストレプトマイシン系抗生物質</li><li> 37 ° Cの水浴</li><li>滅菌パスツールピペット</li><li>ブンゼンガスバーナー</li><li> HBSS、Ca 2 +の /のMg 2 +フリー、Invitrogen社</li><li> DNアーゼ、ワーシントン</li><li> MgSO 4を </li><li>遠心</li><li>血球計</li><li>トリパンブルー溶液</li></ul>

dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord

交連ニューロンが広く胚脊髄の開発中に軸索誘導のメカニズムを調査するために使用されている。これらのニューロンの細胞体は背側脊髄に位置しており、その軸索は、胚発生時にステレオタイプ化された軌道に従っています。交連軸索は、最初にfloorplateに向かって腹側に投影する。正中線を交差した後、これらの軸索が脳に向かって前方およびプロジェクトにします。これらの各ステップは、いくつかの指導の手がかりの作用によって調節されている。高度交連ニューロンに富んだ文化を理想的に回転アッセイ、免疫化学、生化学を含む軸索の経路探索のメカニズムを、対処する多くの実験に適しています。ここでは、E13ラット背側脊髄から交連神経細胞を細かく分析し、文化に方法を説明します。最初に、脊髄が隔離され、背板はグレー解剖されています。背側組織は、トリプシン処理し、機械的破砕により細胞懸濁液にして解離している。神経細胞はポリ- L -リジンでコーティングされたガラス製カバースリップまたは組織培養皿に播種されています。 30時間後<em&gt; in vitroで</em&gt;、ほとんどのニューロンは軸索を拡張している。文化の純度（ヤム<em&gt;ら。</em&gt; 2009）、通常は90％以上、交連ニューロンのマーカーDCC、LH2とTAG1（ヘルムズとジョンソン、1998）で免疫標識によって評価することができる。この神経細胞の準備はするのに便利なツールです。<em&gt; in vitroで</em&gt;脊髄の開発時の交連軸索成長とガイダンスの細胞および分子メカニズムの研究。

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

このビデオでは、E13ラット背側脊髄から交連神経細胞を細かく分析し、文化に方法を示しています。解離交連ニューロンの軸索成長とガイダンスの細胞および分子メカニズムを研究するのに便利です。

胚の脊髄から交連ニューロンの解剖と文化

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofectionとマウス胎児海馬および皮質ニューロンの初代培養

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

神経突起伸長アッセイのためのコラーゲンゲルのチックStatoacousticガングリオンと脊髄の外植片の解剖と文化

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

培養皿内の機能モーターユニット：脊髄外植片と筋細胞の共培養

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

マウス胚の脊髄の全載標本での分岐軸索勉強するDRGニューロンのDII -標識

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

の解離、文化、および分析<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚性網膜組織

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

ニワトリ胚脊髄スライス培養プロトコル

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

解剖やゼブラフィッシュ胚の横方向の取付：脊髄発達の解析

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

エレクトロポひよこ胚脊髄における遺伝子発現差のRNA-配列解析

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

胚性齧歯類の脳から単離、プライマリ脳ドーパミンニューロンの文化と長期メンテナンス

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

ゼブラフィッシュ<em&gt;その場での</em&gt;脊髄脊髄感覚運動ニューロンからの電気生理学的記録のための準備

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...