Name: dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord
Uploaded: 2010-05-25T17:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por becas de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR), el Peter Lougheed Fundación de Investigación Médica, el Programa de McGill en Neuroingeniería, el Fonds de Recherche en Santé du Québec (FRSQ), y la Fundación Canadiense para la Innovación (CFI ). Sébastien D. Langlois fue apoyado por el Premio de Formación de Maestría de la Fonds de la recherche en santé du Québec (FRSQ) y por Frederick Banting y Charles Best Premio de Canadá de Postgrado Becas de Maestría de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR). Estamos muy agradecidos a Jessica MT Pham de asistencia y cifras.

1. La disección de la médula espinal de ratas embrionarias dorsal Recomendaciones generales Mantenga medio L-15 en el hielo y con frecuencia cambian el medio en el plato de la disección para mantener los embriones frescos. Esto ayuda a preservar la integridad del tejido. Todos los pasos se llevan a cabo con dos pares de pinzas Dumont # 5 menos que se indique. Para evitar la contaminación, pulverizar todas las herramientas y superficies de trabajo con etanol 70% y ...

<ol>
	<li>Charron, F., Stein, E., Jeong, J., McMahon, A. P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+is+an+axonal+chemoattractant+that+collaborates+with+netrin-1+in+midline+axon+guidance.">The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance.</a> Cell. , 113-1111 (2003).</li><li>Fabre, P., Shimogori, T., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+ipsilateral+retinal+ganglion+cell+axons+at+the+optic+chiasm+requires+the+Shh+Receptor+Boc.">Segregation of ipsilateral retinal ganglion cell axons at the optic chiasm requires the Shh Receptor Boc.</a> Journal of Neuroscience. 30, 266-275 (2010).</li><li>Helms, A. W., Johnson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitors+of+dorsal+commissural+interneurons+are+defined+by+MATH1+expression.">Progenitors of dorsal commissural interneurons are defined by MATH1 expression.</a> Development. 125, 919-928 (1998).</li><li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+hippocampal+neurons.">Culturing hippocampal neurons.</a> Nature Protocols. 1, 2406-2415 (2006).</li><li>Okada, A., Charron, F., Morin, S., Shin, D. S., Wong, K., Fabre, P. J., Tessier-Lavigne, M., McConnell, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boc+is+a+receptor+for+sonic+hedgehog+in+the+guidance+of+commissural+axons.">Boc is a receptor for sonic hedgehog in the guidance of commissural axons.</a> Nature. 444, 369-373 (2006).</li><li>Yam, P. T., Langlois, S. D., Morin, S., Charron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+guides+axons+through+a+noncanonical,+Src-family-kinase-dependent+signaling+pathway.">Sonic hedgehog guides axons through a noncanonical, Src-family-kinase-dependent signaling pathway.</a> Neuron. 62, 349-362 (2009).</li></ol>

Se ha descrito un método para analizar la cultura y las neuronas de la comisura de la médula espinal de ratas embrionarias. Este procedimiento ha sido de uso habitual en nuestro laboratorio para preparar de forma fiable las neuronas para estudiar los mecanismos celulares y moleculares de guiado de los axones. Para la biología celular y los experimentos inmunoquímica, la disección de una camada produce neuronas suficientes. Cuando se necesitan más células, como en muchos experimentos de bioquímica, la disección ...

La disección de la médula espinal de ratas embrionarias dorsal (ver Tabla I) <ul><li> E13 embarazo etapas rata </li><li> Etanol al 70% </li><li> Tijeras quirúrgicas, herramientas de Bellas Ciencia </li><li> Fórceps, Dumont n º 5, Herramientas de Bellas Ciencia </li><li> Placas de Petri </li><li> Medio L-15 </li><li> Microscopio de disección, Leica </li><li> Pipetas de plástico de transferencia </li><li> Micro tijeras, herramientas de Bellas Ciencia </li><li> Agujas de tungsteno y los titulares de pin (un gancho en forma de aguja, una L-forma de aguja, una aguja), Herramientas de Bellas Ciencia </li><li> Inactivado por calor suero de caballo (HiHS) </li><li> 15 tubos de plástico ml </li></ul> Comisural neurona cultura (véase también el Cuadro I) <ul><li> Incubadoras de cultivo de tejidos (37 ° C, 5% de CO2, humedad controlada) </li><li> Alemania Desag cubreobjetos de vidrio y / o plástico placas de cultivo de tejidos </li><li> Poli-L-lisina, Sigma </li><li> Estéril milliQ H 2 O </li><li> Neurobasal, Invitrogen </li><li> Inactivado por calor suero fetal bovino (HiFBS) </li><li> L-Glutamina </li><li> B27, Invitrogen </li><li> Penicilina / estreptomicina los antibióticos </li><li> 37 ° C baño de agua </li><li> Estéril Pipetas Pasteur </li><li> Bunsen quemador de gas </li><li> HBSS, Ca 2 + / Mg 2 + libre, Invitrogen </li><li> DNAsa, Worthington </li><li> MgSO4 </li><li> Centrífugo </li><li> Hemocitómetro </li><li> Solución de azul de tripano </li></ul>

dissection and culture of commissural neurons from embryonic spinal cord

Las neuronas comisurales han sido ampliamente utilizados para investigar los mecanismos subyacentes de guiado de los axones durante el desarrollo embrionario de la médula espinal. Los cuerpos celulares de estas neuronas se encuentran en la médula espinal dorsal y sus axones siguen trayectorias estereotipados durante el desarrollo embrionario. Axones de la comisura ventral proyecto inicialmente a la placa del piso. Después de cruzar la línea media, estos axones a su vez hacia adelante y proyectarse hacia el cerebro. Cada uno de estos pasos está regulado por la acción de las señales de orientación varias. Culturas altamente enriquecido en las neuronas comisurales son ideales para muchos experimentos abordar los mecanismos de pathfinding axón, incluidos los ensayos de inflexión, inmunoquímica y bioquímica. Aquí se describe un método para analizar la cultura y las neuronas de la comisura de la médula espinal de ratas E13 dorsal. En primer lugar, la médula espinal está aislado y tiras dorsales son diseccionados. El tejido dorsal luego se disocia en una suspensión de células por tripsinización y disrupción mecánica. Las neuronas son sembradas en cubreobjetos de vidrio con poli-L-lisina o placas de cultivo de tejidos. Después de 30 horas<em&gt; In vitro</em&gt;, La mayoría de las neuronas se han extendido de un axón. La pureza de la cultura (Yam<em&gt; Et al.</em&gt; 2009), por lo general más del 90%, puede ser evaluada por inmunomarcaje con la neurona de la comisura DCC marcadores, LH2 y TAG1 (Helms y Johnson, 1998). Esta preparación neuronal es una herramienta útil para<em&gt; In vitro</em&gt; Estudios de los mecanismos celulares y moleculares de crecimiento de los axones comisurales y orientación durante el desarrollo de la médula espinal.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord at JoVE.com

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Este vídeo demuestra un método para analizar la cultura y las neuronas de la comisura de la médula espinal de ratas E13 dorsal. Disociada neuronas comisurales son útiles para estudiar los mecanismos celulares y moleculares de crecimiento axonal y orientación.

La disección y la Cultura de las neuronas comisurales de médula espinal embrionaria

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection y cultivos primarios de neuronas del hipocampo de embriones de ratón y corticales

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Investigación

Neurociencias

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

La disección del ganglio y Cultura polluelo Statoacoustic y explantes médula espinal en geles de colágeno para ensayos neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Una unidad motora funcional en la placa de cultivo: Co-cultivo de explantes de la médula espinal y las células musculares

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DII-etiquetado de las neuronas DRG para el Estudio de ramificación axonal en una preparación Todo el montaje del cable del ratón embrionario espinal

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Disección, Cultura y Análisis de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Tejido de la retina embrionaria

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

Embriones de pollo de la Médula Espinal Slice Cultura Protocolo

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

La disección y de montaje lateral de embriones de pez cebra: Análisis para el Desarrollo de la médula espinal

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA-Seq Análisis de Expresión diferencial de genes en electroporación de embriones de pollo de la médula espinal

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Aislamiento, cultivo y mantenimiento a largo plazo de Primaria mesencefálico neuronas dopaminérgicas a partir de cerebros de embriones de roedores

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

El pez cebra<em&gt; In Situ</em&gt; Médula Espinal Preparación para Registros electrofisiológicos de Spinal Sensory y neuronas motoras

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...