Name: primary human bronchial epithelial cells grown from explants
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00
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Les auteurs sont très reconnaissants au Dr Richard Inculet pour fournir les tissus bronchiques. Éthique de la recherche approbations du Conseil ont été obtenus à partir de Saint-Joseph de Hamilton et l&#39;Université de Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), les tissus et les Archives du Comité, Département de pathologie. Nous remercions également Ernie Spitzer (microscopie électronique, Université McMaster) pour fournir TEMs de nos cultures ALI, et Farkas Daniela pour fournir une partie des matériaux nécessaires à la immunomarquage. Ce travail a été financé par une subvention terme Bloquer l&#39;Ontario Thoracic Society, le Dr Asma Yaghi a été soutenue par une bourse FSORC, soins de santé St-Joseph de Hamilton, Ontario, Canada.

Homme segments bronchiques constituent une source abondante de cellules épithéliales bronchiques primaires. Dans cet article nous décrivons un protocole pour la croissance et l&#39;expansion de l&#39;Homme épithéliales bronchiques (HBE) à partir de cellules fraîchement isolées humaine segments bronchiques. Ce protocole se compose de cinq sections: <ol><li> Revêtement et gratter plaques de culture 100mm </li><li> Préparation des explants de tissu bronchique </li><li> Les greffes de tissus bronchiques </li><...

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	<li>Phillips, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Cells+on+Transwell+Inserts+-+Tips+and+Techniques+[Internet].">Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet].</a> Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li><li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells.">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li><li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium.">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li><li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1,+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation.">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li><li>Wetering, S. v. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+(SLPI)+production+by+human+bronchial+epithelial+cells:+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase.">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li><li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium.">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li><li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells.">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of epithelial cells. , 1-23 (1992).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+bronchial+epithelial+cell+cultures+in+Culture+of+specialized+cells+series.">Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series.</a> Culture of epithelial cells. , 181-196 (1992).</li></ol>

Dans cette étude, nous avons présenté des méthodes détaillées pour la culture et l&#39;expansion de l&#39;enseignement primaire cellules épithéliales bronchiques humaines. Nous avons démontré comment des explants et des greffes de tissu bronchique, cultivées dans un milieu qui favorise la croissance des cellules épithéliales, peut fournir une source continue de cellules des voies respiratoires épithéliales humaines pour les études de non-différenciées des modèles cellulaires (immergée) et différenci...

Autres exigences: incubateur, du cabinet de sécurité biologique (BSC), une centrifugeuse, des plaques de culture de 100 mm, tubes stériles (15 ml, 50 ml et 2 ml), embouts de pipette stérile, poignée de scalpel et de lames, de petits ciseaux pointus, des blouses de laboratoire et des gants. Ceux-ci peuvent être obtenus auprès de vos fournisseurs préférés.

primary human bronchial epithelial cells grown from explants

Cellules épithéliales bronchiques humaines sont nécessaires pour les modèles cellulaires de la maladie et pour étudier l&#39;effet des excipients et des agents pharmacologiques sur la fonction et la structure des cellules épithéliales humaines. Ici nous décrivons en détail la méthode de culture des cellules épithéliales bronchiques du tissu bronchique qui est récolté par le chirurgien au moment de la chirurgie du poumon (cancer du poumon par exemple ou une chirurgie de réduction du volume pulmonaire). Avec l&#39;approbation de l&#39;éthique et le consentement éclairé, le chirurgien prend ce qui est nécessaire pour la pathologie et nous fournit une partie bronchique qui est éloignée des zones malades. Le tissu est ensuite utilisé comme source d&#39;explants qui peuvent être utilisés pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques en culture. Segments bronchiques environ 0,5 à 1 cm de long et 1 cm de diamètre ≤ sont rincés à l&#39;EBSS froide et l&#39;excès de tissu parenchymateux est enlevé. Les segments sont à ciel ouvert et hachées dans 2 à 3 mm<sup&gt; 3</sup&gt; Des morceaux de tissu. Les pièces sont utilisées comme source de cellules primaires. Après plaques 100mm revêtement de la culture pendant 1-2 heures avec une combinaison de collagène (30 ug / ml), la fibronectine (10 ug / ml), et de la BSA (10 pg / ml), les plaques sont rayés dans les zones 4-5 et tissus les pièces sont placées dans les zones rayé, puis un milieu de culture (DMEM / Ham F-12 avec des additifs) adapté à la croissance des cellules épithéliales est ajouté et les plaques sont placées dans une étuve à 37 ° C dans 5% de CO<sub&gt; 2</sub&gt; L&#39;air humidifié. Le milieu de culture est changé tous les 3-4 jours. Les cellules épithéliales se développer à partir des pièces formant les anneaux d&#39;environ 1,5 cm de diamètre dans les 3-4 semaines. Explants peuvent être réutilisées jusqu&#39;à 6 fois en les déplaçant dans de nouvelles plaques pré-enduites. Les cellules sont levées à l&#39;aide de trypsine / EDTA, mis en commun, comptés, et re-plaqué dans les flacons T75 Bind cellulaire pour augmenter leur nombre. Flacons T75 ensemencé avec 2-3 millions de cellules grandissent à 80% de confluence dans les 4 semaines. Élargi primaires des cellules épithéliales humaines peuvent être cultivées et autorisés à différencier sur l&#39;interface air-liquide. Les méthodes décrites ici fournissent une source abondante de cellules épithéliales bronchiques humaines provenant de tissus fraîchement isolées et permettent d&#39;étudier ces cellules comme des modèles de la maladie et pour la pharmacologie et des examens toxicologiques.

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Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Nous décrivons ici une méthode détaillée pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques humaines à partir d&#39;explants de tissus des voies aériennes bronchiques humaines, y compris la croissance différenciée sur une interface air-liquide. Cette méthode fournit une source abondante de cellules primaires pour enquêter sur le rôle de l&#39;épithélium des voies aériennes dans la santé des poumons et des maladies humaines.

Primaire cellules épithéliales bronchiques humaines Cultivé à partir d&#39;explants

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Préparation et de la culture d&#39;explants Objectif Rat épithéliales pour l&#39;étude de la différenciation terminale

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Recherche

Biologie

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolement et culture des cellules souches épithéliales adultes de la peau humaine

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Culture ex vivo des cellules humaines primaires épithéliales des trompes de Fallope

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naïve cellules souches adultes Isolation de cultures de fibroblastes humains primaires

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induction et analyse des épithéliale à mésenchymateuses transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Optimal Lentivirus Production et culture cellulaire Conditions nécessaires pour réussir Cellules transduction humains primaires épithéliales bronchiques

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Méthodes pour l&#39;étude épithéliale Transport Fonction Protein et expression dans Natif Intestin et Caco-2 cellules cultivées en 3D

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

Modèle alvéolaire humain multicellulaire composé de cellules épithéliales et de cellules immunitaires primaires pour l’évaluation des risques

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

Génération de monocouches épithéliales primaires murines du côlon à partir de cryptes intestinales

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Dissection efficace et culture des cellules épithéliales rétiniennes primaires de pigment de souris

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...