Name: primary human bronchial epithelial cells grown from explants
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00
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Die Autoren sind sehr dankbar, dass Dr. Richard Inculet für die Bereitstellung der bronchialen Gewebe. Research Ethics Board Genehmigungen wurden vom St. Josefs Healthcare Hamilton und der University of Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), Tissue and Archives Committee, Department of Pathology erhalten. Wir danken auch Ernie Spitzer (Electron Microscopy, McMaster University) für die Bereitstellung von TEM unserer ALI Kulturen und Daniela Farkas für die Bereitstellung einiger der Materialien für die Immunfärbung benötigt. Diese Arbeit wurde von einem Block Begriff Zuschuss von der Ontario Thoracic Society finanziert werden; Dr. Asma Yaghi wurde durch ein Stipendium FSORC, St. Joseph Healthcare, Hamilton, Ontario, Kanada unterstützt.

Menschliche Bronchial-Segmente bieten eine reichhaltige Quelle von primären bronchialen Epithelzellen. In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll für Wachstum und Expansion von humanen bronchialen Epithelzellen (HBE) Zellen aus frisch isolierten menschlichen Bronchien Segmenten. Dieses Protokoll besteht aus fünf Abschnitten: <ol><li> Beschichtungs-und Scratching 100mm Kulturplatten </li><li> Vorbereitung Bronchial Tissue Explantate </li><li> Bronchial Tissue Transplantation </li><li> Passage von HBE Cells </...

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	<li>Phillips, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Cells+on+Transwell+Inserts+-+Tips+and+Techniques+[Internet].">Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet].</a> Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li><li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells.">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li><li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium.">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li><li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1,+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation.">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li><li>Wetering, S. v. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+(SLPI)+production+by+human+bronchial+epithelial+cells:+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase.">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li><li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium.">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li><li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells.">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of epithelial cells. , 1-23 (1992).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+bronchial+epithelial+cell+cultures+in+Culture+of+specialized+cells+series.">Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series.</a> Culture of epithelial cells. , 181-196 (1992).</li></ol>

In dieser Studie stellten wir detaillierte Methoden für die Kultur-und Ausbau von primären humanen bronchialen Epithelzellen. Wir haben gezeigt, wie Explantate und Transplantationen von bronchialen Gewebe, in Medien, die Epithelzellen Wachstum zu fördern kultiviert, kann eine kontinuierliche Quelle der menschlichen Epithelzellen der Atemwege für Studien nichtgetrennte (unter Wasser) und differenziert (angebaut an den Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche) Zelle Modelle bieten . Diese Zellen können in Drogentests Systeme g...

Weitere Anforderungen: Inkubator, biologische Sicherheitswerkbank (BSC), Zentrifuge, 100mm Kulturplatten, sterilen Röhrchen (15 ml, 50 ml und 2 ml), sterile Pipettenspitzen, Skalpell Griff und Klingen, kleine scharfe Schere, Kittel und Handschuhe. Diese können Sie bei Ihrem bevorzugten Lieferanten bezogen werden.

primary human bronchial epithelial cells grown from explants

Menschliche bronchialen Epithelzellen sind für die Zell-Modelle von Krankheiten benötigt werden, und die Wirkung von Hilfsstoffen und pharmakologische Mittel zur Funktion und Struktur des menschlichen Epithelzellen zu untersuchen. Hier haben wir im Detail beschreiben die Methode der wachsenden bronchialen Epithelzellen der Bronchien Atemwege Gewebe, das durch den Chirurgen zu den Zeiten der Lungenchirurgie (zB Lungenkrebs oder Lungenvolumenreduktion Chirurgie) geerntet wird. Mit Ethik Genehmigung und Einwilligung, nimmt der Chirurg, was für Pathologie benötigt und bietet uns eine bronchiale Teil, der fern von der erkrankten Bereiche ist. Das Gewebe wird dann als eine Quelle der Explantate, die für den Anbau von primären bronchialen Epithelzellen in Kultur verwendet werden können verwendet. Bronchial-Segmente über 0,5-1cm lang und ≤ 1 cm im Durchmesser sind mit kaltem EBSS und überschüssiges Drüsengewebe entfernt wird gespült. Segmente sind aufgeschnitten und Hackfleisch in 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Gewebestücke. Die Stücke sind als Quelle von primären Zellen verwendet. Nach der Beschichtung 100mm Kultur-Platten für 1-2 Stunden mit einer Kombination aus Kollagen (30 pg / ml), Fibronektin (10 ug / ml) und BSA (10 ug / ml) werden die Platten in 4-5 Bereichen und Gewebe zerkratzt Stücke in die verkratzten Stellen platziert sind, dann Kulturmedium (DMEM / Ham F-12 mit Zusätzen) für epithelialen Zellwachstums wird hinzugefügt und die Platten werden in einem Brutschrank bei 37 ° C in 5% CO<sub&gt; 2</sub&gt; Befeuchtete Luft. Das Kulturmedium wird alle 3-4 Tage. Die Epithelzellen wachsen die Stücke bilden ca. 1,5 cm Durchmesser Ringe in 3-4 Wochen. Explantate kann bis zu 6-mal, indem sie in neue Pre-beschichteten Platten wieder verwendet werden. Die Zellen sind aufgehoben mit Trypsin / EDTA, gebündelt, gezählt und in T75 Zelle binden Flaschen wieder beschichtet, um ihre Zahl zu erhöhen. T75 Flaschen ausgesät mit 2-3 Millionen Zellen zu 80% Konfluenz in 4 Wochen wachsen. Expanded primären humanen epithelialen Zellen können kultiviert und dürfen auf Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche zu unterscheiden. Hier beschriebenen Methoden bieten eine reiche Quelle der menschlichen bronchialen Epithelzellen von frisch isolierten Geweben und damit für das Studium dieser Zellen als Modelle von Krankheiten und für Pharmakologie und Toxikologie-Screening.

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Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Hier beschreiben wir eine detaillierte Verfahren zur Züchtung von primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten des menschlichen bronchialen Atemwege Gewebe einschließlich differenzierter Wachstum auf einer Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche. Diese Methode bietet eine reichhaltige Quelle von primären Zellen zur Untersuchung der Rolle der Atemwegsepithel in der menschlichen Lunge Gesundheit und Krankheit.

Primären humanen bronchialen Epithelzellen aus Explantaten Grown

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Vorbereitung und Kultur der Rat Linsenepithelzellen Explantate für ein Studium der terminalen Differenzierung

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Forschung

Biologie

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex vivo-Kultur von primären humanen Eileiter Epithelzellen

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naive Adult Stem Cells Isolation von primären humanen Fibroblasten Kulturen

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Optimale Lentivirus Produktion und Zellkulturbedingungen notwendig für eine erfolgreiche transduzieren primären humanen bronchialen Epithelzellen

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Methoden Epithelial Transportprotein Funktion und Expression in Mutterdarm und Caco-2-Zellen gezüchtet in 3D zu studieren

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

Multizelluläres humanes Alveolarmodell bestehend aus Epithelzellen und primären Immunzellen zur Gefahrenbeurteilung

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

Erzeugung von murinen primären Dickdarmepithel-Monoschichten aus Darmkrypten

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Effiziente Dissektion und Kultur der primären Maus retinalen Pigmentepithelzellen

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...