Name: primary human bronchial epithelial cells grown from explants
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants at JoVE.com

Författarna är mycket tacksamma till Dr Richard Inculet för att tillhandahålla bronkial vävnader. Forskningsetisk nämnd godkännanden har erhållits från St Josephs Healthcare Hamilton och The University of Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr David McCormack), vävnader och arkiv kommittén, avdelningen för patologi. Vi tackar också Ernie Spitzer (elektronmikroskopi, McMaster University) att ställa TEM av våra ALI kulturer och Daniela Farkas för att ge några av de material som behövs för immunfärgning. Detta arbete har finansierats av ett block term bidrag från Ontario Thoracic Society, Dr Asma Yaghi stöddes av en FSORC stipendium, St Josephs Healthcare, Hamilton, Ontario, Kanada.

Mänskliga Bronkial segment ger en rik källa till primära bronkerna epitelceller. I denna artikel beskriver vi ett protokoll för tillväxt och expansion av mänskliga bronkiell epitelceller (HBE) celler från nyligen isolerade humana bronkerna segment. Detta protokoll består av fem delar: <ol><li> Beläggning och sprätta 100mm odlingsplattor </li><li> Förbereda Bronkial Tissue explants </li><li> Bronkiell vävnad Transplantation </li><li> Passage av HBE celler </li><li> Växande cilier HBE Celler på Transwell...

<ol>
	<li>Phillips, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Cells+on+Transwell+Inserts+-+Tips+and+Techniques+[Internet].">Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet].</a> Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li><li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells.">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li><li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium.">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li><li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1,+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation.">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li><li>Wetering, S. v. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+(SLPI)+production+by+human+bronchial+epithelial+cells:+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase.">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li><li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium.">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li><li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells.">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of epithelial cells. , 1-23 (1992).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+bronchial+epithelial+cell+cultures+in+Culture+of+specialized+cells+series.">Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series.</a> Culture of epithelial cells. , 181-196 (1992).</li></ol>

I denna studie har vi lagt fram detaljerade metoder för kultur och utbyggnad av primära mänskliga bronkial epitelceller. Vi visade hur explants och transplantationer av bronkiell vävnad, odlade i media som främjar epitelceller tillväxt, kan ge en ständig källa till människans luftvägar epitelceller för studier av icke-differentierade (nedsänkt) och differentierad (som växer på luft-vätske-gränssnitt) cellmodeller . Dessa celler kan användas i system drogtester som mer liknar de celler i deras verkliga f...

Övriga krav: inkubator, biologiska säkerhetsskåp (BSC), centrifug, 100mm odlingsplattor, sterila rör (15 ml, 50 ml och 2 ml), sterila pipettspetsar, skalpell handtag och blad, liten vass sax, rockar och handskar. Dessa kan erhållas från din preferred suppliers.

primary human bronchial epithelial cells grown from explants

Mänskliga bronkial epitelceller behövs för cell modeller av sjukdom och att undersöka effekten av hjälpämnen och farmakologiska agenter på funktion och struktur av mänskliga epitelceller. Här beskriver vi i detalj den metod för växande bronkiell epitelceller från luftrören luftvägarna vävnad som skördas av kirurgen vid tiden för lungkirurgi (t.ex. lungcancer eller lungvolym minskning kirurgi). Med etik godkännande och informerat samtycke, tar kirurgen vad som behövs för patologi och ger oss en bronkial del som är långt från den sjuka områden. Vävnaden används sedan som en källa till explants som kan användas för odling av primära bronkerna epitelceller i kulturen. Bronkial segmenten ca 0,5-1cm lång och ≤ 1 cm i diameter sköljas med kallt EBSS och överflödigt parenkymvävnaden tas bort. Segment skärs öppna och finfördelats 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Bitar av vävnad. Bitarna används som en källa till primära celler. Efter beläggning 100mm odlingsplattor under 1-2 tim med en kombination av kollagen (30 mikrogram / ml), fibronektin (10 mikrogram / ml) och BSA (10 mikrogram / ml), är plattorna repade i 4-5 områden och vävnad stycken är placerade i repade områden, så odlingsmedium (DMEM / Ham F-12 med tillsatser) lämplig för epitelceller tillväxt tillsätts och tallrikar placeras i en inkubator vid 37 ° C i 5% CO<sub&gt; 2</sub&gt; Fuktad luft. Odlingsmediet byts var 3-4 dagar. Epitelceller växa från bitarna som bildar ca 1,5 ringar cm diameter i 3-4 veckor. Explants kan återanvändas upp till 6 gånger genom att flytta dem till nya pre-plåt. Celler lyfts med hjälp av trypsin / EDTA, poolade, räknad och åter klädd i T75 kolvar Cell Bind för att öka deras antal. T75 kolvar seedad med 2-3 miljoner celler att växa till 80% confluence i 4 veckor. Utökad primära humana epitelceller kan odlas och får skilja på luft-vätske-gränssnitt. Metoder som beskrivs här ger en rik källa av mänskliga bronkiell epitelceller från nyligen isolerade vävnader och möjliggör för att studera dessa celler som modeller för sjukdomen och för farmakologi och toxikologi screening.

Watch this Scientific Journal Video about Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants at JoVE.com

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Här beskriver vi en detaljerad metod för att odla primärt mänskligt bronkial epitelceller från explants mänskliga bronkiell luftvägar vävnad inklusive differentierad tillväxt på en luft-vätska gränssnitt. Denna metod ger en rik källa av galvaniska element för att undersöka den roll som slemhinnan i människans lunga hälsa och sjukdom.

Primär mänskliga Bronkial epitelceller vuxit från explants

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Upprättande och kultur Epithelial Råtta Lens explants för att studera terminal differentiering

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolering och odling av vuxna Epithelial stamceller från mänskliga Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex vivo Kultur av primära humana äggledaren epitelceller

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naiv Vuxna stamceller Isolering från primära humana fibroblastkulturer

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion och Analys av Epithelial till mesenkymala övergång

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Optimal lentivirus Produktion och cellodlingsbetingelser behövs för att framgångsrikt omvandla primära humana Bronkial epitelceller

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Metoder för att studera Epithelial Transport proteiners funktion och uttryck i Native tarm och Caco-2-celler odlade i 3D

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

Flercelliga Human Alveolar modell sammansatt av epitelceller och primära immunceller för hazard Assessment

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

Generation av Murine Primary Colon Epitelial Monolayers från intestinala krypter

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Effektiv dissekering och kultur av primära mus retinal pigment epitelceller

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...