Name: primary human bronchial epithelial cells grown from explants
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants at JoVE.com

Yazarların bronşiyal dokular sağlamak için Dr. Richard Inculet müteşekkiriz. Joseph Sağlık Hamilton ve The University of Western Ontario / Londra Sağlık Bilimleri Merkezi (Dr David McCormack), Doku ve Arşivler Komitesi, Patoloji Anabilim Dalı Araştırma Etik Kurul onayı alındı. Ayrıca bazı immün için gerekli malzemelerin sağlanması için ALI kültürlerin dardı ve Daniela Farkas sağlamak için Ernie Spitzer (Elektron Mikroskop, McMaster Üniversitesi) teşekkür ederim. Bu çalışma, Ontario Toraks Derneği Blok vadeli hibe ile finanse edilmiştir; Dr. Esma Yaghi FSORC burs, St Joseph Sağlık, Hamilton, Ontario, Kanada tarafından desteklenmiştir.

İnsan Bronşiyal bölümleri birincil bronşiyal epitel hücreleri bol miktarda kaynak sağlar. Bu yazıda, taze izole insan bronşiyal segmentleri İnsan bronşiyal epitel (HBE) hücreleri büyüme ve genişleme için bir protokol açıklar. Bu protokol, beş bölümden oluşmaktadır: <ol><li> Kaplama ve 100mm Kültür Tabaklar Kaşıma </li><li> Bronş Doku eksplantlar hazırlanması </li><li> Bronş Doku nakli </li><li> Passage HBE Hücreler </li><li> Transwells büyüyen siliyalı HBE Hücreler </li></ol><p cl...

<ol>
	<li>Phillips, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Cells+on+Transwell+Inserts+-+Tips+and+Techniques+[Internet].">Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet].</a> Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li><li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells.">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li><li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium.">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li><li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1,+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation.">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li><li>Wetering, S. v. a. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+(SLPI)+production+by+human+bronchial+epithelial+cells:+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase.">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li><li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium.">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li><li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells.">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culture of epithelial cells. , 1-23 (1992).</li><li>Freshney, R. I., Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+bronchial+epithelial+cell+cultures+in+Culture+of+specialized+cells+series.">Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series.</a> Culture of epithelial cells. , 181-196 (1992).</li></ol>

Bu çalışmada, kültür ve primer insan bronş epitel hücreleri genişlemesi için ayrıntılı yöntemler sundu. Biz eksplantlar ve epitel hücre büyümesini teşvik medya kültürü bronşiyal doku, nakli, insan hava yolu epitel hücreleri olmayan diferansiye (batık) ve farklı (hava-sıvı arayüzü üzerinde yetişen) hücre modelleri çalışmaları için sürekli bir kaynak sağlamak nasıl gösterdi . Bu hücreler, kendi gerçek fizyolojik ortamlarda hücreler daha yakından benzediği uyuşturucu testi sist...

Diğer gereksinimler: inkübatör, biyolojik güvenlik kabini (BSC), santrifüj, 100mm kültür plakaları, steril tüpler (15 ml, 50 ml ve 2 ml), steril pipet uçları, bisturi sapı ve bıçakları, küçük keskin bir makas, laboratuvar mont ve eldiven. Bu, tercih edilen tedarikçilerden temin edilebilir.

primary human bronchial epithelial cells grown from explants

İnsan bronşiyal epitel hücreleri hastalığın hücre modelleri için gerekli olan ve insan epitel hücrelerinin işlevi ve yapısı Yardımcı maddeler ve farmakolojik ajanların etkisini araştırmaktı. Burada akciğer ameliyatı (örneğin akciğer kanseri veya akciğer hacim küçültme ameliyatı) zaman cerrah tarafından hasat bronşiyal solunum yolu doku bronş epitel hücreleri büyüyen yöntemi ayrıntılı olarak açıklar. Etik onayı ve bilgilendirilmiş onam, cerrah patoloji için gerekli olan alır ve hastalıklı alanlar uzak bir bronş kısmı ile bize sunuyor. Dokusu primer bronş epitel hücreleri kültürde yetiştirmek için kullanılabilir eksplant kaynağı olarak kullanılır. 0.5-1cm uzunluğunda ve çapı ≤ 1cm hakkında Bronşiyal kesimleri, soğuk EBSS ve aşırı parankimal doku çıkarılır ile durulanır. Segmentler açık kesilmiş ve içine kıyılmış 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; Doku parçaları. Adet birincil hücre kaynağı olarak kullanılır. Kollajen bir kombinasyonu (30 mg / ml), fibronektin (10 mg / ml) ve BSA (10 mg / ml) ile 1-2 saat süreyle kaplama 100mm kültür levhalar, plakalar, 4-5 alanlar ve doku çizik % 5 CO adet çizik alanlar yerleştirilir, daha sonra epitel hücre büyümesi için uygun bir kültür ortamı (katkı maddeleri ile DMEM / Ham F-12) eklenir ve levhalar 37 bir kuluçka yerleştirilir ° C<sub&gt; 2</sub&gt; Nemlendirilmiş hava. Kültür ortamı, her 3-4 günde bir değiştirilir. Epitel hücreleri, 3-4 hafta içinde yaklaşık 1,5 cm çapında halkalar oluşturan parçalardan büyür. Eksplantlarındaki yeni ön kaplı levhalar içine taşıyarak 6 kata kadar yeniden kullanılır olabilir. Hücreler sayılır toplanmış tripsin / EDTA, kaldırdı, T75 Cep Bind şişeler ve sayılarını artırmak için yeniden kaplanmıştır. T75 şişeler numaralı seribaşı 2-3 milyon hücre 4 hafta% 80 izdiham birlikte büyümek için. Genişletilmiş birincil insan epitel hücreleri, kültür ve hava-sıvı arayüzü ayırt etmek için izin verilebilir. Yöntem taze izole dokularda insan bronşiyal epitel hücreleri bol kaynak sağlamak ve bu hücrelerin hastalık modelleri olarak eğitim ve farmakoloji ve toksikoloji tarama izin olarak tanımlanmıştır.

Watch this Scientific Journal Video about Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants at JoVE.com

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Burada bir hava-sıvı arayüzü farklılaştırılmış büyüme de dahil olmak üzere insan bronşiyal solunum yolu doku eksplantlar birincil insan bronşiyal epitel hücreleri büyümek için detaylı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, insan akciğer sağlığı ve hastalıkları, solunum yolu epitel rolünü araştırmak için birincil hücreleri bol miktarda kaynak sağlar.

Eksplantlar gelen Yetiştirilen İlköğretim İnsan Bronşiyal Epitel Hücreleri

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Terminal Farklılaşma incelenmesi için hazırlanması ve Rat Lens Epitel eksplantlar Kültür

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Kültür İlköğretim İnsan Fallop Tüp Epitel Hücreleri

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Optimal lentivirüs üretimi ve Hücre Kültürü Koşullar Gerekli Başarıyla transduce İlköğretim İnsan Bronş Epitel Hücreleri

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...

Methods to Study Epithelial Transport Protein Function and Expression in Native Intestine and Caco-2 Cells Grown in 3D

Yöntem 3D Yetiştirilen Yerli Barsak ve Caco-2 Hücreler Epitel Ulaşım Protein Fonksiyonu ve Anlatım Eğitim için

The intestinal epithelium has important transport and barrier functions that play key roles in normal physiological functions of the body while providing ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

Tehlike Değerlendirmesi İçin Epitel Hücreleri ve Primer İmmün Hücrelerden Oluşan Çok Hücreli İnsan Alveoler Modeli

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

Bağırsak Mezarlarından Murine Primer Kolon Epitel Monolayerlerinin Üretimi

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Birincil Fare Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Verimli Diseksiyonu ve Kültürü

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...