Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies aan AK van de Israel Science Foundation, het Israëlische Ministerie van gezondheid, en DFG (de Duitse Research Foundation).

I. Elektroporatie Eierbehandeling <ol><li> Leg de eieren in een vochtige incubator ingesteld op 37-38 ° C, bij voorkeur een incubator met een rockende laden. </li><li> Embryo worden geëlektroporeerd na ongeveer 66 uur van de incubatietijd, wanneer zij hebben bereikt Hamburger &amp; Hamilton (HH) fase 18-20. In dit stadium het hoofd ligt in een rechte hoek ten opzichte van de romp (aandoening, de zogenaamde cervicale buiging) en een uitgebreide set van extra-embryonale bloedvaten, zoals de v...

<ol>
	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

Elektroporatie van plasmide DNA in het kippenembryo ontwikkelt zich als een krachtige techniek voor in vivo ectopische expressie. De combinatie van specifieke enhancers, en chick elektroporatie biedt een snelle en efficiënte tool voor het ontcijferen van axonale paden van een genetisch bepaalde groep neuronen 1,3,5. Gebruik makend van de Cre / loxP en de Gal4/UAS versterking systemen kunnen vergroten het niveau en de duur van meningsuiting. De opkomende beeld is van een complex divergentie van axonale signal...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

Tewerkstelling van enhancer elementen om de expressie van reportergenen rijden in neuronen is een veel gebruikt model voor het bijhouden van axonale projectie. Voor het volgen van axonale projectie van spinale interneuronen in gewervelde dieren, kiemlijn gerichte reportergenen opbrengst bilateraal symmetrisch etikettering. Daarom is het moeilijk om onderscheid te maken tussen de ipsi-en contra-lateraal uitstekende axonen. Eenzijdige elektroporatie in het kuiken neurale buis is een nuttig middel om de expressie van een reportergen te beperken tot een kant van het centrale zenuwstelsel, en om axonale projectie te volgen aan beide zijden<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Deze video toont eerste hoe om te gaan de eieren voorafgaand aan de injectie. Bij HH stadium 18-20, DNA wordt geïnjecteerd in de sacrale niveau van de neurale buis, dan wolfraamelektroden zijn parallel geplaatst om het embryo en korte elektrische pulsen worden toegediend met een pulsgenerator. Het ei is afgedicht met tape en teruggeplaatst in een incubator voor verdere ontwikkeling. Drie dagen later (E6) het ruggenmerg wordt verwijderd als een open boek voorbereiding van embryo&#39;s, vaste en verwerkt voor de ganse berg antilichaam kleuring. De gebrandschilderde ruggenmerg is gemonteerd op dia en gevisualiseerd met behulp van confocale microscopie.

Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deze video laat zien hoe axonale paden van genetisch bepaalde groepen neuronen te visualiseren in de embryonale kuiken ruggenmerg gebruik te maken van<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporatie van de reportergenen onder de controle van specifieke enhancer elementen.

Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations van HH Stage 10 kippenembryo&#39;s

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Electroporation of Mycobacteria

Elektroporatie van mycobacteriën

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Test voor Neurale Inductie in het kippenembryo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Kuiken Ex ovo Cultuur en Ex ovo CAM test: Hoe het echt werkt

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primaire Cultuur en Plasmide Elektroporatie van de muizen orgaan van Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Live-Imaging van celbeweeglijkheid en actine cytoskelet van individuele neuronen en neurale cellen in de zebravis embryo&#39;s

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Zuivering van het M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome geassocieerd eiwit MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

Tracking Morfogenetische Tissue vervormingen in de vroege Chick Embryo

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Elektroporatie in Embryonale Chick Retina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...