Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par des subventions à l&#39;AK de la Fondation d&#39;Israël sciences, le ministère israélien de la santé, et la DFG (Fondation allemande de recherche).

I. L&#39;électroporation La manipulation des œufs <ol><li> Placez les oeufs dans un incubateur humidifié à l&#39;ensemble 37-38 ° C, de préférence un incubateur avec un plateaux à bascule. </li><li> Embryon sont électroporées après environ 66 heures de l&#39;incubation, quand ils ont atteint Hamburger &amp; Hamilton (HH) stade de 18-20. A ce stade, la tête se trouve à angle droit avec le tronc (condition appelée flexion cervicale) et un vaste ensemble de vaisseaux sanguins extra...

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	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

L&#39;électroporation d&#39;ADN plasmidique dans l&#39;embryon de poulet évolue comme une technique puissante pour l&#39;expression ectopique vivo. La combinaison des exhausteurs spécifiques, et l&#39;électroporation chiches fournit un outil rapide et efficace pour déchiffrer les voies axonales d&#39;un groupe de neurones génétiquement défini 1,3,5. Utilisant le système Cre / LoxP et les systèmes d&#39;amplification Gal4/UAS peut augmenter le niveau et la durée d&#39;expression. L&#39;image qui ém...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

Emploi des éléments activateurs pour conduire l&#39;expression de gènes rapporteurs dans les neurones est un paradigme largement utilisé pour le suivi de la projection axonale. Pour le suivi de projection axonale des interneurones spinaux chez les vertébrés, les gènes de germe de rapporteur en ligne ciblée rendement de marquage bilatéralement symétrique. Par conséquent, il est difficile de distinguer entre les ipsi-et contra-latéral axones saillie. Électroporation unilatérale dans le poussin du tube neural fournit un moyen utile de restreindre l&#39;expression d&#39;un gène rapporteur d&#39;un côté du système nerveux central, et à suivre la projection axonale des deux côtés<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Cette vidéo montre d&#39;abord comment manipuler les oeufs avant l&#39;injection. Au stade de HH 18-20, l&#39;ADN est injecté dans le niveau sacré du tube neural, puis des électrodes de tungstène sont placés parallèlement à l&#39;embryon et de courtes impulsions électriques sont administrés avec un générateur d&#39;impulsions. L&#39;œuf est scellé avec du ruban adhésif et replacée dans un incubateur pour le développement ultérieur. Trois jours plus tard (E6) de la moelle épinière est enlevée comme une préparation à livre ouvert de l&#39;embryon, fixe, et traitées pour la coloration de l&#39;anticorps entier de montage. Le cordon teinté épinière est monté sur glissière et visualisés en utilisant la microscopie confocale.

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Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Cette vidéo montre comment visualiser les voies axonales des groupes génétiquement définis des neurones de la moelle épinière embryonnaire de poulet en utilisant<em&gt; In ovo</emÉlectroporation&gt; de gènes rapporteurs sous le contrôle des éléments activateurs spécifiques.

Décrypter Pathways axonale des groupes génétiquement définis de neurones dans le tube neural Chick Utilisant In ovo L&#39;électroporation

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

En électroporations Ovo d&#39;embryons au stade de poulet 10 HH

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Recherche

Biologie

Electroporation of Mycobacteria

Electroporation de mycobactéries

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Dosage de l&#39;induction neurale dans l&#39;embryon de poulet

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Poussin<em&gt; Ovo ex</em&gt; Culture et<em&gt; Ovo ex</em&gt; CAM Test: Comment il fonctionne vraiment

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

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Préparation d&#39;embryons pour la microscopie électronique des Drosophile Tube cardiaque embryonnaire

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Culture primaire et l&#39;électroporation plasmidique de l&#39;Organe de Corti murin.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Purification de la M. magneticum Strain AMB-1 Protein magnétosome Associated MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

Suivi des déformations des tissus morphogénétiques dans l&#39;embryon de poulet Early

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

En électroporation Ovo dans la rétine de poussin embryonnaire

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...