Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch Stipendien an AK von der Israel Science Foundation, The Israel Ministerium für Gesundheit und DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) unterstützt.

I. Die Elektroporation Egg Handling <ol><li> Legen Sie die Eier in einem befeuchteten Inkubator eingestellt auf 37-38 ° C, vorzugsweise einem Inkubator mit einem Schaukelstuhl Tabletts. </li><li> Embryo nach etwa 66 Stunden der Inkubation elektroporiert, wenn sie Hamburger und Hamilton (HH) Stufe 18-20 erreicht haben. In diesem Stadium der Kopf liegt im rechten Winkel zum Rumpf (Bedingung genannt zervikalen Biegung) und eine große Reihe von extra-embryonalen Blutgefäße, wie anterior, post...

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	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

Elektroporation von Plasmid-DNA in das Hühnerembryo entwickelt sich als eine leistungsstarke Technik für in vivo ektopische Expression. Die Kombination von spezifischen Enhancer und chick Elektroporation bietet eine schnelle und effiziente Werkzeug für die Entschlüsselung axonalen Wege eines genetisch definierten Gruppe von Neuronen 1,3,5. Mit Hilfe des Cre / loxP und die Gal4/UAS Verstärkung Systeme ergänzen die Höhe und Dauer der Ausdruck. Das entstehende Bild ist von einem komplexen Divergenz der ax...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

Beschäftigung von Enhancer-Elemente zur Expression von Reporter-Gene in Nervenzellen Laufwerk ist ein weit verbreitetes Paradigma für die Verfolgung von axonalen Projektion. Für Tracking axonale Projektion der spinalen Interneuronen bei Wirbeltieren, Ertrag Keimbahn gezielte Reportergene bilateral symmetrische Kennzeichnung. Daher ist es schwer, zwischen dem ipsi-und contra-seitlich abstehende Axonen zu unterscheiden. Einseitige Elektroporation in das Küken Neuralrohr stellt ein nützliches Mittel, um die Expression eines Reportergens zu einer Seite des zentralen Nervensystems zu beschränken und axonale Projektion auf beiden Seiten folgen<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Dieses Video zeigt zunächst, wie man die Eier vor der Injektion zu behandeln. In HH Stadium 18-20, DNA in die sakrale Ebene des Neuralrohrs eingespritzt wird, dann Wolfram-Elektroden sind parallel zu den Embryo gelegt und kurze elektrische Impulse werden mit einem Impulsgeber verwaltet. Das Ei ist mit Klebeband verschlossen und wieder in einen Inkubator für die weitere Entwicklung. Drei Tage später (E6) des Rückenmarks ist wie ein offenes Buch Vorbereitung von Embryo entnommen, fixiert und verarbeitet ganze Berg Antikörper-Färbung. Die Kirchenfenster Rückenmark ist am Schlitten montiert und visualisiert mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie.

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Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Dieses Video zeigt, wie axonale Wege der genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der embryonalen chick Rückenmark Nutzung visualisieren<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporation von Reporter-Gene unter der Kontrolle von spezifischen Enhancer-Elemente.

Die Entzifferung Axonal Pathways von genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der Küken Neuralrohr Verwendung In ovo Elektroporation

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations von HH Stage 10 Hühnerembryonen

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Forschung

Biologie

Electroporation of Mycobacteria

Elektroporation von Mykobakterien

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Assay für Neural Induction im Hühnerembryo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Küken Ex ovo Kultur und Ex ovo CAM-Assay: Wie es wirklich funktioniert

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Vorbereitung der Embryonen für Elektronenmikroskopie der Drosophila Embryonale Herz Rohr

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primäre Kultur und Plasmid Elektroporation der Murine Corti-Organ.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Live-Imaging von Zellbewegung und Aktin-Zytoskelett von einzelnen Neuronen und Zellen der Neuralleiste in Zebrafisch-Embryos

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Die Reinigung des M. magneticum Stamm AMB-1 Magnetosom assoziierten Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

Tracking Morphogenetic Tissue Verformungen in der frühen Hühnerembryo

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In ovo Elektroporation in embryonalen Hühnchenretina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...