Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Este trabalho foi suportado por concessões para AK da Ciência Israel Foundation, Israel O ministério da saúde, e DFG (Fundação Alemã de Pesquisa).

I. Eletroporação Manipulação de ovos <ol><li> Coloque os ovos em um conjunto de incubadora umidificada a 37-38 ° C, de preferência uma incubadora com um bandejas de balanço. </li><li> Embrião são electroporated após cerca de 66 horas de incubação, quando atingiram Hamburger &amp; Hamilton estágio (HH) 18-20. Nesta fase, a cabeça encontra-se em ângulos retos com o tronco (condição chamada de flexão cervical) e um vasto conjunto de vasos extra-embrionárias do sangue, como o a...

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	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

Eletroporação de DNA plasmídeo no embrião de galinha evolui como uma poderosa técnica para na expressão ectópica vivo. A combinação de enhancers específico, e eletroporação pinto fornece uma ferramenta rápida e eficiente para decifrar caminhos axonal de um grupo geneticamente definido de neurônios 1,3,5. Utilizando o Cre / LoxP e os sistemas de amplificação Gal4/UAS pode aumentar a intensidade e duração da expressão. A imagem que surge é de uma divergência complexo de pistas axonal que su...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

Emprego de elementos enhancer para dirigir a expressão de genes repórter em neurônios é um paradigma amplamente utilizado para rastreamento de projeção axonal. Para rastreamento de projeção axonal de interneurônios da coluna vertebral nos vertebrados, os genes de células germinativas alvo repórter rendimento rotulagem bilateralmente simétrica. Portanto, é difícil distinguir entre o ipsi-e contra-lateralmente axônios de projeção. Eletroporação unilateral dentro do tubo neural pinto fornece um meio útil para restringir a expressão de um gene repórter para um lado do sistema nervoso central, e seguir a projeção axonal em ambos os lados<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Este vídeo demonstra primeiro como lidar com os ovos antes da injeção. No estágio HH 18-20, DNA é injetado no nível sacral do tubo neural, então, eletrodos de tungstênio são colocados em paralelo ao embrião e curta pulsos elétricos são administrados com um gerador de pulsos. O ovo é selada com fita adesiva e colocados de volta para uma incubadora para o desenvolvimento. Três dias depois (E6) a medula espinhal é removido como uma preparação de livro aberto de embrião, fixa, e processados ​​para a coloração de toda anticorpo de montagem. O cordão espinhal manchada é montado na corrediça e visualizados através de microscopia confocal.

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Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Este vídeo demonstra como visualizar caminhos axonal de grupos geneticamente definido de neurônios na medula espinhal utilizando pinto embrionárias<em&gt; In ovo</em&gt; Eletroporação de genes repórter sob o controle de elementos específicos enhancer.

Decifrando Pathways Axonal dos Grupos geneticamente definidos de neurônios no tubo Neural Utilizando Pintainho In ovo Eletroporação

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

Em Electroporations Ovo de Estágio HH 10 embriões de galinha

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Biologia

Electroporation of Mycobacteria

Eletroporação de Micobactérias

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Ensaio para Indução Neural no embrião de galinha

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Pintinho Ex ovo Cultura e Ex ovo CAM Ensaio: como ele realmente funciona

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparação de embriões de Microscopia Eletrônica do Drosophila Tubo cardíaco embrionário

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Cultura primária e Eletroporação Plasmid do Órgão de Corti murino.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Imagens ao vivo da motilidade celular e citoesqueleto de actina de neurônios individuais e células da crista neural em embriões Zebrafish

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Purificação do M. magneticum Strain AMB-1 proteína associada Magnetosome MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

Rastreamento Deformações Tissue Morfogenéticas no embrião de galinha precoce

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Em Eletroporação Ovo na retina de pinto embrionário

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...