Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por becas de la Fundación de AK Israel Ciencia, el Ministerio de Salud de Israel, y la DFG (Fundación Alemana de Investigación).

I. La electroporación Manejo de huevo <ol><li> Coloque los huevos en una incubadora humidificada conjunto a 37-38 ° C, preferible una incubadora con una bandeja oscilante. </li><li> Embrión se electroporated después de 66 horas de la incubación, cuando han llegado a Hamburgo y Hamilton (HH) la etapa 18-20. En esta etapa se encuentra la cabeza en ángulo recto con el tronco (condición llamada flexión cervical) y un vasto conjunto de los vasos sanguíneos extra-embrionarias, como la ante...

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	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

Electroporación de ADN plásmido en el embrión de pollo se desarrolla como una técnica de gran alcance para la expresión ectópica en vivo. La combinación de potenciadores específicos, y la electroporación de pollo proporciona una herramienta rápida y eficaz para descifrar las vías axonal de un grupo definido genéticamente las neuronas 1,3,5. Utilizando el cre / loxP y los sistemas de amplificación GAL4/UAS puede aumentar los niveles y duración de la expresión. El panorama resultante es el de una...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

El empleo de elementos potenciadores para dirigir la expresión de genes reporteros en las neuronas es un paradigma ampliamente utilizado para el seguimiento de la proyección axonal. Para el seguimiento de la proyección axonal de interneuronas espinales en los vertebrados, la línea germinal objetivo genes reportero de etiquetado sobre simetría bilateral. Por lo tanto, es difícil distinguir entre la ipsi y contra-lateral se proyecta axones. Electroporación unilateral en el tubo neural de pollo proporciona un medio útil para limitar la expresión de un gen a un lado del sistema nervioso central, y de seguir la proyección axonal en ambos lados<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Este video muestra primero cómo manejar los huevos antes de la inyección. HH en la etapa 18-20, el ADN es inyectado en el nivel sacro del tubo neural, a continuación, los electrodos de tungsteno se colocan en paralelo al embrión y cortos impulsos eléctricos se administran con un generador de pulsos. El huevo es sellada con cinta adhesiva y se coloca de nuevo en una incubadora para un mayor desarrollo. Tres días más tarde (E6) de la médula espinal se retira como un libro abierto de la preparación de embriones, fija, y procesados ​​para la tinción de anticuerpos conjunto de montaje. La médula espinal teñido se monta en la diapositiva y se visualiza mediante microscopía confocal.

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Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Este video muestra la forma de visualizar las vías axonales de grupos genéticamente definidos de neuronas en la médula espinal de embriones de pollo que utilizan<em&gt; In ovo</em&gt; Electroporación de los genes reportero bajo el control de determinados elementos potenciadores.

Descifrar Caminos axonal de los grupos definidos genéticamente las neuronas en el tubo neural del polluelo Utilizando In ovo La electroporación

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

En Electroporations Ovo de embriones de pollo HH Etapa 10

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Investigación

Biología

Electroporation of Mycobacteria

Electroporación de micobacterias

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Ensayo de inducción neural en el embrión de pollo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Pollo Ex ovo Cultura y Ex ovo CAM Ensayo: cómo funciona realmente

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparación de embriones para Microscopía Electrónica de la Drosophila Tubo cardíaco embrionario

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Cultura primaria y electroporación plásmido del órgano de Corti murino.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Imágenes en directo de la motilidad celular y citoesqueleto de actina de las neuronas individuales y las células de la cresta neural en embriones de pez cebra

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

La purificación de la M. magneticum Tensión AMB-1 magnetosomas proteína asociada MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

El seguimiento de deformaciones morfogenética del tejido en el embrión de pollo temprano

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

En electroporación in ovo en la retina de embriones de pollo

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...