Name: deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Detta arbete har finansierats med bidrag till AK från Israel Science Foundation, Israel hälsoministeriet och DFG (tyska forskningsstiftelsen).

I. elektroporation Egg hantering <ol><li> Lägg äggen i en fuktad inkubator inställd på 37-38 ° C, helst en inkubator med en gungande brickor. </li><li> Embryo är electroporated efter ca 66 timmar inkubation, när de har nått Hamburger &amp; Hamilton (HH) stadium 18-20. I detta skede huvudet ligger vinkelrätt mot stammen (tillstånd som kallas livmoderhalscancer fotled) och en stor uppsättning extra embryonala blodkärl, såsom främre bör bakre, höger och vänster vitelline vener s...

<ol>
	<li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule.">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li><li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paths,+elongation,+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate.">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li><li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1.">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).</li><li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers.">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li><li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord.">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li></ol>

Elektroporation av plasmid DNA i kycklingembryo utvecklas som en kraftfull teknik för in vivo ektopiska uttryck. Kombinationen av specifika medel, och bruden elektroporation ger en snabb och effektivt verktyg för att dechiffrera axonal vägar av en genetiskt definierad grupp av nervceller 1,3,5. Använda Cre / LoxP och Gal4/UAS system förstärkningen kan öka nivåerna och varaktigheten av uttryck. Den nya bilden är av en komplex skillnaderna mellan axonal signaler som uppstår interneuron subpopulationer...

deciphering axonal pathways of genetically defined groups of neurons in the chick neural tube utilizing in ovo electroporation

Anställning av förstärkare element för att driva uttryck av reportern gener i nervceller är en allmänt använd paradigm för spårning axonal projektion. För spårning axonal projicering av spinal interneuronen hos ryggradsdjur, könscellernas riktade reporter gener ger bilateralt symmetrisk märkning. Därför är det svårt att skilja mellan ipsi-och kontraindikationer sidled utskjutande axoner. Ensidig elektroporation i ungen neuralröret ger ett användbart sätt att begränsa uttrycket av en reporter gen till ena sidan av det centrala nervsystemet, och att följa axonal projektion på båda sidor<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Denna video visar först hur att hantera äggen före injektion. Vid HH stadium 18-20, är ​​DNA injiceras i sakrala nivån på neuralröret, då volframelektroder placeras parallellt med embryot och korta elektriska pulser ges tillsammans med en pulsgenerator. Ägget är förseglade med tejp och läggs tillbaka i en inkubator för vidare utveckling. Tre dagar senare (E6) är ryggmärgen bort som en öppen bok förberedelse från embryo, fast, och behandlas för hela berget antikroppar färgning. Den färgade ryggmärgen är monterad på bilden och visualiseras med hjälp av konfokalmikroskopi.

Watch this Scientific Journal Video about Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation at JoVE.com

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Denna video visar hur du visualisera axonal vägar genetiskt definierade grupper av nervceller i embryonala ungen ryggmärgen att utnyttja<em&gt; I ovo</em&gt; Elektroporation av reporter gener under kontroll av specifika enhancer element.

Dechiffrera axonal vägar genetiskt definierade grupper av nervceller i Chick Neural Tube Använda I ovo Elektroporation

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Research

JoVE Journal

Biology

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Electroporation of Mycobacteria

Elektroporation av mykobakterier

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Assay för Neural induktion i Chick Embryo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick Ex ovo Kultur och Ex ovo CAM analysen: hur det verkligen fungerar

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primär Kultur och Plasmid elektroporation av Murine organ Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Bildproduktion för cell motilitet och Actin cytoskelettet av enskilda nervceller och neurala celler Crest i Zebrafish embryon

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Rening av M. magneticum Sila AMB-1 Magnetosome Medverkande Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

Spårning Deformationer Morphogenetic Tissue i tidig Chick Embryo

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

I Ovo Elektroporation i embryonal Chick Retina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...