Name: implantation of ferumoxides labeled human mesenchymal stem cells in cartilage defects
Uploaded: 2010-04-05T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects at JoVE.com

Este trabalho foi financiado por uma doação do Instituto Nacional de Artrite e Doenças da Pele músculo-esqueléticas, NIH RO1AR054458.

1. Rotulagem de hMSCs com Endorem <ol><li> As células são cultivadas a 80% confluência pelo menos 18 horas antes de rotulagem. </li><li> Durante este tempo, a mídia rotulagem é preparada adicionando Endorem à amostra com uma dose de 100 ug Fe / ml de soro livre de mídia. </li><li> Depois que as células são cultivadas de confluência, a cultura da mídia é aspirado e as células são lavadas com PBS 1x ou soro livre de mídia. </li><li> Em seguida, enxágüe a solução é aspirada e da mídia rotulagem previ...

<ol>
	<li>Mauck, R. L., Yuan, X., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondrogenic+differentiation+and+functional+maturation+of+bovine+mesenchymal+stem+cells+in+long-term+agarose+culture.">Chondrogenic differentiation and functional maturation of bovine mesenchymal stem cells in long-term agarose culture.</a> Osteoarthritis Cartilage. 14, 179-189 (2006).</li><li>Pittenger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells.">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284, 143-147 (1999).</li><li>Rahfoth, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+allograft+chondrocytes+embedded+in+agarose+gel+into+cartilage+defects+of+rabbits.">Transplantation of allograft chondrocytes embedded in agarose gel into cartilage defects of rabbits.</a> Osteoarthritis Cartilage. 6, 50-65 (1998).</li><li>Henning, T. D., Boddington, S., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+hESCs+and+hMSCs+with+iron+oxide+nanoparticles+for+non-invasive+in+vivo+tracking+with+MR+imaging.">Labeling hESCs and hMSCs with iron oxide nanoparticles for non-invasive in vivo tracking with MR imaging.</a> J Vis Exp. , (2008).</li></ol>

O protocolo descrito fornece uma maneira reproduzível para rotular MSCs com nanopartículas de óxido de ferro e implante essas MSCs rotulados em defeitos da cartilagem. Essa técnica permite não-invasivo representação de transplantes de células-tronco em defeitos da cartilagem com ressonância magnética, que permite uma detecção precoce de falha MASI. A luxação ou de efluxo das células marcadas pode ser diagnosticada com base em um desaparecimento do rótulo do site transplante em imagens de MR. Um diagnóst...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>D-MEM High Glucose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>D5648</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS (Ca++, Mg++ free)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA 0.05%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25399-120</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ferumoxides (Endorem)</td>
<td>
</td>
<td>Guerbet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose Typ VII</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A9045</td>
<td>Dilute Agarose in PBS to final concentration of 4%</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

implantation of ferumoxides labeled human mesenchymal stem cells in cartilage defects

O campo da engenharia de tecidos integra os princípios da engenharia de biologia celular e medicina para a regeneração de células e tecidos específicos funcional. Matriz associada implantes de células-tronco (MASI) visam regenerar defeitos da cartilagem devido à artrite traumática ou lesões nas articulações. Células-tronco adultas mesenquimais (CTMs) têm a capacidade de se diferenciar em células da linhagem condrogênicos e têm mostrado resultados promissores para celular baseado em tecnologias de reparação da cartilagem articular. Autólogo MSCs pode ser isolado de uma variedade de tecidos, pode ser expandida em culturas de células, sem perder seu potencial de diferenciação, e demonstraram diferenciação condrogênicos in vitro e in vivo 1, 2. A fim de proporcionar a retenção local e viabilidade de MSCs transplantado em defeitos de cartilagem, um andaime é necessário, que também suporta a diferenciação e proliferação subsequente. A arquitetura da formação de tecido scaffold guias e permite a matriz extracelular, produzida pelas células-tronco, a se expandir. Investigações anteriores demonstraram que a 2% agarose andaime pode apoiar o desenvolvimento de cartilagem hialina estável e não induzir respostas imunes 3. Retenção a longo prazo de células-tronco transplantadas em MASI é fundamental para a regeneração da cartilagem. Rotulagem de CTMs com nanopartículas de óxido de ferro permite a longo prazo no rastreamento vivo com técnicas não invasivas RM 4. Esta apresentação vai demonstrar técnicas para a rotulagem MSCs com nanopartículas de óxido de ferro, a geração de células-agarose construções e implantação dessas construções em defeitos da cartilagem. As construções rotulado pode ser rastreado de forma não invasiva com MR-Imaging.

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Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects

Objetivo da apresentação é mostrar um método altamente reprodutível para gerar matriz associada implantes de células-tronco em defeitos da cartilagem, que pode ser visualizado com ressonância magnética. As células estaminais são rotulados com FDA-approved Ferumoxides, misturado com agarose, implantado em defeitos da cartilagem e fotografada com um scanner MR 7T.

Implantação de Ferumoxides identificadas células-tronco mesenquimais em defeitos da cartilagem

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Isolamento e animais de Expansão de soro livre de cordão umbilical humano Derivado células mesenquimais estromais (MSCs) e endoteliais Células Progenitoras Colony Forming (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Biologia

Peptides from Phage Display Library Modulate Gene Expression in Mesenchymal Cells and Potentiate Osteogenesis in Unicortical Bone Defects

Peptídeos de Phage Biblioteca Mostrar modular a expressão de genes em células mesenquimais e potenciar a osteogênese em defeitos ósseos unicorticais

Two novel synthetic peptides accelerate bone formation and can be delivered using a collagen matrix. The aim of this study was to investigate the effects ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolamento &amp; Caracterização da Hoechst Baixa CD45 Negativo Mouse Células-Tronco Mesenquimais de pulmão

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramação de células somáticas humanas em células tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) usando vetor retroviral com GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Indução e Análise de epitelial para mesenquimal Transição

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolamento e Cultura da Dental epiteliais células-tronco do Adulto Rato Incisivo

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Eficiente Geração induzida pelo homem células-tronco pluripotentes a partir de células somáticas humanas com Sendai-vírus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Profiling Individual células estaminais embrionárias humanas por RT-PCR quantitativo

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...

A Simple Benchtop Filtration Method to Isolate Small Extracellular Vesicles from Human Mesenchymal Stem Cells

Um Método Simples de Filtração de Bancada para Isolar Pequenas Vesículas Extracelulares de Células-Tronco Mesenquimais Humanas

The ultracentrifugation-based process is considered the common method for small extracellular vesicles (sEVs) isolation. However, the yield from this ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Isolamento, Caracterização e Aplicação Terapêutica de Vesículas Extracelulares a partir de Células-Tronco Mesenquimais Humanas Cultivadas

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...