Name: comprehensive compositional analysis of plant cell walls (lignocellulosic biomass) part ii: carbohydrates
Uploaded: 2010-03-12T17:00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls Lignocellulosic biomass Part II: Carbohydrates at JoVE.com

אנו מודים מת&#39;יו רוברט Weatherhead עבור שירות טכני מעולה ג&#39;ון רלף, אוניברסיטת ויסקונסין עצה, דיונים חשובים, ואת מדגם עץ צפצפה. עבודה זו מומנה על ידי למדעי הכימיה, Geosciences ו Biosciences החטיבה, משרד האנרגיה של יסוד מדעי, משרד המדע, משרד האנרגיה של ארה&quot;ב (ללא פרס. DE-FG02-91ER20021) ועל ידי משרד האנרגיה האמריקני (DOE) האגמים הגדולים מחקר Bioenergy מרכז (DOE BER משרד המדע DE-FC02-07ER64494).

1. קיר בידוד נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטחון כ 60-70mg של אוויר או להקפיא חומר צמחי יבש עם 5.5 מ&quot;מ נירוסטה כדורי פלדה צינורית sarstedt 2ml בורג מכסה באמצעות retschmill (1 דקות, 25 הרץ). אלטרנטיבה, השימוש תפוקה גבוהה שחיקה מחלק iWall רובוט כינה מתואר חלק 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את כדורי פלדה לפני שתמשיך בהליך דופן התא בידוד פרוטוקול מפורט של הכנת החומר דופן התא מוצג חלק 3. עבור השלמות כאן את הצעדים נכתב בפרוטוקול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.5 מ&quot;ל של אתנול מימית 70%, ו מערבולת ביסודיות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה בסל&quot;ד 10,000 עבור 10 דקות עד גלולה שאריות אלכוהול מסיס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב או למזוג supernatant </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.5 מ&quot;ל של כלורופורם פתרון / מתנול (01:01 v / v) כדי שאריות ולנער צינור ביסודיות כדי resuspend גלולה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה בסל&quot;ד 10,000 עבור 10 דקות ו לשאוב או למזוג supernatant </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend גלולה ב ul 500 של אצטון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאדות הממס עם זרם של אוויר ב 35 ° C עד יבש אם דגימות מיובשות הצורך ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר, עד לעיבוד נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליזום את הסרת עמילן מן המדגם מחדש להשעות את גלולה ב 1.5 מ&quot;ל של 0.1 חיץ M sodiumacetate pH 5.0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע צינורות sarstedt וחום במשך 20 דקות. בשעה 80 ° C בבלוק חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרר את ההשעיה על הקרח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף את סוכני הבאים אל גלולה: 35 μl של Sodiumazide 0.01% (NaN 3), 35 עמילאז μl (50 μg/1mL H 2 O; ממינים Bacillus, SIGMA); 17 Pullulanase μl (18.7 יחידות מ acidopullulyticus חיידק; SIGMA) . שווי הצינור ואת המערבולת ביסודיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה היא מודגרות מעל בלילה 37 מעלות צלזיוס ב שייקר. מכוונת את הצינורות אופקית משופרת עוזרים ערבוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה חום 100 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות בתוך גוש חימום לסיים את מערכת העיכול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה (10,000 סל&quot;ד, 10 דקות) וזורקים supernatant עמילן המכיל solubilized </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הנותרים גלולה שלוש פעמים על ידי הוספת 1.5 מ&quot;ל מים, vortexing, centriguation ו decanting מים הכביסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend גלולה ב ul 500 של אצטון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאדות הממס עם זרם של אוויר ב 35 ° C עד יבש. זה עשוי להיות נחוץ גם כדי לשבור את החומר בתוך הצינור עם מרית לייבוש טוב יותר. חומר יבש מציג דופן התא המבודד (lignocellulosics). אם דגימות מיובשות הצורך ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר, עד לעיבוד נוסף. </li></ol> 2. מטריקס הרכב פוליסכריד שיטה זו היא למעשה שינוי של שיטת בהוצאת Albersheim 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את ההרכב monosaccharide החומר קיר לשקול 2 מ&quot;ג של החומר תא הקיר לתוך צינורות 2ml starstedt או ביד או באופן highthroughput באמצעות iWall, רובוט שחיקה במשקל רובוטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 20 UL של פתרון אינוסיטול (5mg/ml) כסטנדרט פנימי. עבור מדגם 2 מ&quot;ג קיר התא אנו ממליצים להוסיף 100 UG. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם צינור קירות ul 250 של אצטון כדי לאסוף את דופן התא חומר על החלק התחתון של הצינור, להתאדות אצטון מאוד עדין תחת זרימת האוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הידרוליזה של חומצה חלשה להוסיף 250 ul של חומצה trifluoroacetic 2M (TFA) מדגם אחד. הוסף TFA בקפידה כדי להבטיח אין להתיז את החומר על דפנות הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כובע בחוזקה דגירה של 90 דקות ב 121 מעלות צלזיוס בתוך גוש חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגניב אבני חימום דגימות על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינורות בסל&quot;ד 10,000 עבור 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה של 100 ul supernatant חומציים המכילים את פוליסכריד מטריצה ​​נגזר monosaccharide אל בורג צלוחיות זכוכית כובע לוודא שלא להפריע את החומר גלולה. גלולה יכול לשמש assay תאית גבישי להלן (ראה 3.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאדות את TFA בצינור זכוכית תחת זרם עדין של האוויר מכשיר אידוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 300 μl 2-Propanol, מערבולת להתאדות במהירות של 25 ° C (לחזור על סך של שלוש פעמים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלב הראשון של הליך אצטט alditol derivatization הוא לבצע הפחתה של מונוסכרידים כדי alditols המתאימים. לצורך זה להוסיף 200 μl של תמיסה נתרן borohydride לטעום כל מיובשים. הכן פתרון טריים בכל פעם באמצעות 10 מ&quot;ג של נתרן לכל borohydride 1ml של אמוניום הידרוקסידי 1M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעזוב בקבוקון זכוכית בטמפרטורת החדר למשך 1.5 שעות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל את הפתרון על ידי הוספת 150 ul של חומצה אצטית קרחונית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת ו להתאדות במהירות של 25 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 250 מערבולת μl חומצה אצטית / מתנול (01:09, V / V), ו להתאדות במהירות של 25 ˚ C </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 250 μl מתנול, ו להתאדות תחת זרם של אוויר (לחזור על סך של שלוש פעמים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור acetylation של alditols, הוסף 50 μl של אנהידריד אצטית ו - 50 μl של Pyridine, מערבולת דגירה של 20 דקות ב 121 מעלות צלזיוס בתוך גוש חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות מגניב בבלוק למטה עם קרח תוך לחכות לירידה זמנית כ לטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאדות את ריאגנטים תחת זרם אוויר עדין בטמפרטורת החדר. היזהר: acetates alditol תנודתיות מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 200 μl טולואן ו להתאדות באוויר תחת (x3) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכל השלבים הסופיים acetates alditol המחולצים. ראשית, להוסיף 500 ul של אתיל אצטט ומערבלים קלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 2 מ&quot;ל של מים, צינורות הכובע מערבולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינורות ב 2000 סל&quot;ד 5 דקות להשיג שכבות נפרדות ברור (אתיל אצטט על גבי מים בתחתית) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 50 ul שכבת אתיל אצטט לתוך GC / MS צלוחיות עם מוסיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל על ידי הוספת 100 ul של אצטון כדי בקבוקון-GC ו כובע. היקף המדגם כרכים דילול יכול להיות מותאם, כדי למנוע עומס יתר GC / MS אם המדגם הוא ריכוז גבוה מדי. GC-בקבוקון ניתן לאחסן 4 ° C, אם הניתוח GC / MS לא להמשיך מיד </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדגימות מוזרקים GC כי הוא מאובזר עם MS quadrupole, אבל גלאי יינון הלהבה מתאים גם. Supelco SP-2380 (30mm X 0.25mm x 0.25 הסרט מיקרומטר עובי) טור משמש עם עיכוב ממס 4min ושיעור זרימת 1.5ml/min. דוגמאות הזריקו חשופים תוכנית הטמפרטורה הבאים: להחזיק ראשוני ב 160 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות, 20 ° C / min כבש עד 200 ° C ו להחזיק 5 דקות, 20 ° C / min עד הרמפה 245 ° C ו להחזיק 12 דקות; ספייק ל 270 ° C ו להחזיק 5 דקות לפני הקירור לטמפרטורה הראשונית של 160 ° C 2.26) פיקס מזוהים פרופילים המוני ו / או פעמים השמירה על סטנדרטים.. מונוסכרידים הם לכמת מבוסס על עקומות סטנדרטיות. </li></ol> 3. תאית הקריסטל תוכן שיטה זו מתוארת למעשה על ידי Updegraf 8. ישנם מספר חומרי המוצא של תהליך זה: חומר מבודד דופן התא (ראה 1) או חומר הקיר שכבר טופלו TFA 2M (ראה 2.8) או גלולה הנותרים מיד לאחר הטיפול בחומצה (ראה 2.8) או TFA גלולה, כי כבר נשטף עם 2-propanol מיובשים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את הכדור TFA ב מ&quot;ל כתרים בורג זכוכית 1 שפופרת של מגיב Updegraff (חומצה אצטית: חומצה חנקתית: מים, 08:01:02 v / v). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור שווי בחוזקה, מערבולת, חום בבלוק חימום ב 100 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. כתוצאה מן הטיפול הזה רק תאית גבישי נשאר מסיסים גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות מגניב בבלוק על קרח לטמפרטורה של חדר או מצנן </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגות מדגמים בסל&quot;ד 10,000 עבור 15 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant להבטיח כי גלולה אינה מופרעת ללא חומר מן גלולה מוסר. לשם כך להשאיר כ. 150 ul של supernatant בצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1.5 מ&quot;ל מים, לנער, צנטריפוגות, וזורקים supernatant כפי שנעשה לעיל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור על הנוהל כביסה 3 פעמים נוספות באמצעות 1.5 מ&quot;ל של אצטון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האוויר יבש גלולה בעדינות רבה עם האוויר, או לתת יבש על הספסל הלילה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלולה (צלולוזה גבישי) כעת לחלוטין הידרוליזה לגלוקוז על ידי מה שנקרא הידרוליזה Saeman. לצורך זה להוסיף 175 חומצה גופרתית μl 72% ל הצינור sarstedt </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות מערבולת ו דגירה במשך 15 דקות אחר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 825 μl מים מערבולת ו </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגות מדגמים בסל&quot;ד 10,000 עבור 5 דקות. אולי יש קצת חומר מסיס חום, ליגנין, הנותרים בצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התוכן של גלוקוז supernatant הוא assayed באמצעות assay anthrone colorimetric. Assay זה מבוצעת צלחת 96 פוליסטירן היטב microtiter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור עקומת סטנדרט להשתמש מניות גלוקוז 1mg/ml (המאוחסן ב 0 ° C) וליצור כפולות 0, 2, 4, 6, 8, ו -10 תקנים UG על ידי pipetting 0, 2, 4, 6, 8 ו 10 ul לתוך הבאר המתאים נפרד. ממלאים כל ul טוב עד 100 עם מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 10 μl של supernatant כל המדגם 90 מ&quot;ל של מים לתוך תאים נפרדים אך על הצלחת microtiter אותו כתקן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 200 μl של מגיב Anthrone מוכן טרי (Anthrone מומס חומצה גופרתית מרוכזת, 2 מ&quot;ג anthrone / ml חומצה גופרתית) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת חום למשך 30 דקות ב 80 מעלות צלזיוס בתנור (חום מפזר אלומיניום). דגימות גלוקוז המכיל להפוך מצהוב לתוך כחול ירוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הצלחת להתקרר לטמפרטורת חדר ולנער היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרוא על צלחת קליטה של ​​625 מ&quot;מ באמצעות קורא צלחת microtiter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלוקוז (ולכן התוכן תאית גבישי) מחושב על בסיס ספיגת לעומת עקומת סטנדרט הוקמה על צלחת זהה. </li></ol> 4. נציג תוצאות דוגמה של ניתוח קיר מוצג באיור 2. במקרה זה צפצפה גזע (עץ) נותח על ידי נהלים שונים המתוארים בסעיף פרוטוקול. מטריקס פוהרכב lysaccharide מסומן על ידי chromatogram דוגמה זיהוי הנוכחי סוכר טיפוסי קירות תא צמח, fucose, רמנוז, קסילוז, arabinose, גלקטוז, מנוז וגלוקוז (ואת אינוסיטול תקן פנימי). המרכיב העיקרי של hemicellulosic צפצפה הוא xylan כפי שהפגינו התוכן קסילוז גבוהה. עם זאת, שפע של סוכרים אלה ישתנו בהתאם used4 זינה. גלוקוז בניתוח זה נגזר xyloglucan hemicellulose ו תאית אמורפי. בשל ניתוח הנתונים ניתן להציג mol% או UG / מ&quot;ג חומר הקיר (או משקל יבש). התוכן של תאית גבישי הוא מובן מאליו, יש לצפות לערכים של בין 20-50% ממשקל קיר יבש. על סמך התוצאות שהוצגו כאן והן I3 חלק הרכב lignocellulosic של עץ צפצפה ליגנין הוא 21%, hemicelluloses 30% ו 41% תאית גבישי. השאר יהיה אפר. <img src="/files/ftp_upload/1837/1837fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1:. סקירה כללית של ניתוח lignocellulosic קירות התא (lignocellulosics) מבודדים מן החומר הגולמי צמח מיובש. החומר הקיר משוקלל מכן לתוך aliquots ו לחלק את מבחני שונות. הרכב מטריקס פוליסכריד הוא הוקם לאחר טיפול בחומר קיר עם חומצה חלשה (2M TFA), derivatizing מונוסכרידים solubilized שהתקבל acetates alditol שלהם, ניתוח על ידי GC-MS. שאריות של הטיפול חומצה חלשה נשטף עם מגיב כביכול Updegraff ומשאיר רק תאית crystlline מסיסים מאחור. תאית היא solubilized על ידי חומצה גופרתית לכמת ידי assay colorimetric בקביעת תוכן גלוקוז. במקביל, התוכן הרכב ליגנין ניתן לקבוע כמתואר חלק 3. <img src="/files/ftp_upload/1837/1837fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2:. Lignocellulosic ניתוח מקיף של עץ צפצפה שבבי עץ של צפצפה (Populus tremoloides) היו נתונים פרוטוקול המתואר. העליון השמאלי: הרכב פוליסכריד מטריקס; Fuc fucose; RHA רמנוז; ערה arabinose; Xyl קסילוז, מנוז האדם; גל גלקטוז, גלוקוז Glc; תקן פנימי אינוסיטול.

<ol>
	<li>Albersheim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+analysis+of+sugars+in+plant+cell+wall+polysaccharides+by+gas-liquid+chromatography.">A method for the analysis of sugars in plant cell wall polysaccharides by gas-liquid chromatography.</a> Carbohydr. Res. 5, 340-340 (1967).</li><li>Carroll, A., Somerville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellulosic+Biofuels.">Cellulosic Biofuels.</a> Annu Rev Plant Biol. 60, 165-165 (2009).</li><li>Foster, C. E., Martin, T., Pauly, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+compositional+analysis+of+Plant+Cell+Walls+(Lignocellulosic+biomass),+Part+I:+Lignin.">Comprehensive compositional analysis of Plant Cell Walls (Lignocellulosic biomass), Part I: Lignin.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2010).</li><li>Pauly, M., Keegstra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-wall+carbohydrates+and+their+modification+as+a+resource+for+biofuels.">Cell-wall carbohydrates and their modification as a resource for biofuels.</a> Plant J. 54 (4), 559-559 (2008).</li><li>Somerville, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+systems+approach+to+understanding+plant-cell+walls.">Toward a systems approach to understanding plant-cell walls.</a> Science. 306 (5705), 2206-2206 (2004).</li><li>Teeri, T. T., Brumer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+characterisation+and+applications+of+enzymes+from+the+wood-forming+tissues+of+poplar:+Glycosyl+transferases+and+xyloglucan+endotransglycosylases.">Discovery, characterisation and applications of enzymes from the wood-forming tissues of poplar: Glycosyl transferases and xyloglucan endotransglycosylases.</a> Biocatalysis and Biotransformation. 21, 173-173 (2003).</li><li>UPDEGRAF, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SEMIMICRO+DETERMINATION+OF+CELLULOSE+IN+BIOLOGICAL+MATERIALS.">SEMIMICRO DETERMINATION OF CELLULOSE IN BIOLOGICAL MATERIALS.</a> Anal. Biochem. 32 (3), 420-420 (1969).</li></ol>

השיטות שתוארו לאפשר הערכה כמותית מהירה של הרכב ביומסה במפעל lignocellulosic. השיטה מאפשרת קביעת הרכב של חומרים כאלה כולל הרכב סוכר של סוכרים מטריצה ​​כלומר hemicelluloses, התוכן תאית גבישי. התפוקה של שיטות אנליטיות שונות לאדם משתנה. שימוש בפרוטוקולים המתואר כאן, 20 דגימות יכול להיות מעובד קומפוזיציות פוליסכריד מטריקס 30 עבור תוכן תאית גבישי. בשל אופיו הכמותי של הגידולים אופטימלי נתונים חומרי גלם, מגוון או גנוטיפים ניתן להעריך מבחינת התאמתם לייצור דלק ביולוגי.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Trifluoroacetic acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T6508</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>myo-Inositol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>I5125</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Borohydride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>213462</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pyridine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>J.T. Baker</td>
<td>3348-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acetic Anhydride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>320102</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spectromax Plus 384</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Devices</td>
<td>Plus384</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GC-MS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>7890A GC/5975C MSD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5.5mm Stainless Steel Balls</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Salem Ball Company</td>
<td>(N/A)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96 well plate heat spreader</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biocision</td>
<td>Coolsink 96F</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Retsch Mill</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>TissueLyser II</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating block</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Techne</td>
<td>Dri-block DB-3D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sample concentrator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Techne</td>
<td>FSC400D</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

comprehensive compositional analysis of plant cell walls (lignocellulosic biomass) part ii: carbohydrates

הצורך מתחדשת, פחמן ניטרלי, וחומרי גלם לתעשיית קיימא והחברה הפכה להיות אחד הנושאים הדחופים ביותר של המאה ה -21. זה לעורר עניין מחדש השימוש במוצרים צמח כחומרי גלם לייצור תעשייתי של דלק נוזלי לתחבורה<sup&gt; 2</sup&gt; ומוצרים אחרים כגון חומרי biocomposite<sup&gt; 6</sup&gt;. ביומסה הצמח נשאר אחד שלא נוצל שומרת לעצמה הגדולה ביותר על פני כדור הארץ<sup&gt; 4</sup&gt;. היא מורכבת בעיקר של קירות התא מורכב של פולימרים אנרגיה עשיר כולל תאית, hemicelluloses השונים, ליגנין פוליפנול<sup&gt; 5</sup&gt; ולכן נקראת לפעמים lignocellulosics. עם זאת, קירות תא הצמח התפתחו להיות סרבן השפלה כמו קירות לתרום רבות לחוסנה ואת השלמות המבנית של הצמח כולו. למרות הנוקשות הדרושים שלה, את דופן התא הוא ישות דינמית מאוד, כי הוא פעיל מטבולית ומשחק תפקידים מכריעים פעילויות התא רבים כגון גידול צמחים והבחנה<sup&gt; 5</sup&gt;. בשל הפונקציות השונות של קירות, קיים מגוון עצום מבניים בתוך חומות של מיני צמחים שונים, סוגי תאים בתוך מפעל יחיד<sup&gt; 4</sup&gt;. לפיכך, בהתאם למה מינים היבול, מגוון הצומח, או רקמות הצמח משמש biorefinery, מדרגות עיבוד depolymerisation על ידי תהליכים כימיים / אנזימטית ותסיסה הבאים של סוכרים שונים דלקים נוזליים צריך להיות מותאם אופטימיזציה. עובדה זו בבסיס הצורך אפיון יסודי של feedstocks ביומסה הצמח. כאן אנו מתארים מתודולוגיה אנליטית מקיפה המאפשרת קביעת הרכב lignocellulosics והוא מקובל בינוני ניתוח תפוקה גבוהה (איור 1). השיטה של ​​מתחיל עם הכנת חומר destarched דופן התא. Lignocellulosics וכתוצאה מכך הם התפצלה לקבוע הרכב monosaccharide של hemicelluloses ו מטריצה ​​אחרים polysaccharides1, ותוכנו של תאית גבישי<sup&gt; 7</sup&gt;. פרוטוקול לניתוח מרכיבי ליגנין ביומסה lignocellulosic נדון חלק<sup&gt; 3</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls Lignocellulosic biomass Part II: Carbohydrates at JoVE.com

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls Lignocellulosic biomass Part II: Carbohydrates

ביומסה הצמח הוא משאב מרכזי פחמן ניטרלי מתחדשת שיכול לשמש לייצור דלק ביולוגי. ביומסה הצמח מורכב בעיקר קירות התא, חומר מרוכב מורכבות מבנית כינה lignocellulosics. כאן אנו מתארים פרוטוקול לניתוח מקיף של התוכן והרכב של פחמימות קיר נגזר.

ניתוח מקיף של ההלחנה קירות התא הצומח (ביומסה Lignocellulosic) חלק II: פחמימות

The need for renewable, carbon neutral, and sustainable raw materials for industry and society has become one of the most pressing issues for the 21st ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls (Lignocellulosic biomass) Part II: Carbohydrates

Unit 1

Plant Cell Structure and Organization

SCIENTISTS IN ACTION

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1

Vaccinia זיהום בנגיף וניתוח הזמני של ביטוי גנים וירוס: חלק 1

The family Poxviridae consists of large double-stranded DNA containing viruses that replicate exclusively in the cytoplasm of infected cells.  Members of ...

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 2

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 2

Vaccinia זיהום בנגיף וניתוח הזמני של ביטוי גנים וירוס: חלק 2

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 3

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 3

Vaccinia זיהום בנגיף וניתוח הזמני של ביטוי גנים וירוס: חלק 3

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

הלבלב האנושי בידוד איילט: חלק ב: טיהור והתרבות של איי האדם

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

מיון פלואורסצנטי תא פעיל של Protoplasts הצמח

High-resolution, cell type-specific analysis of gene expression greatly enhances understanding of developmental regulation and responses to environmental ...

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls (Lignocellulosic biomass) Part I: Lignin

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls Lignocellulosic biomass Part I: Lignin

ניתוח מקיף של ההלחנה קירות התא הצומח (ביומסה Lignocellulosic) חלק א: ליגנין

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

ללא תווית באתרו הדמיה של Lignification בתוך קירות התא הצמח

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

Glycan Profiling of Plant Cell Wall Polymers using Microarrays

Profiling glycan של פולימרי דופן תא צמח באמצעות מערכים

Plant cell walls are complex matrixes of heterogeneous glycans which play an important role in the physiology and development of plants and provide the ...

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

מטבולית תיוג וממברנה היפוך חלוקה לניתוח השוואתי של proteomic<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em&gt; תא תרבויות השעיה

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling ...

An Efficient Method for Quantitative, Single-cell Analysis of Chromatin Modification and Nuclear Architecture in Whole-mount Ovules in Arabidopsis

An Efficient Method for Quantitative, Single-cell Analysis of Chromatin Modification and Nuclear Architecture in Whole-mount Ovules in Arabidopsis

שיטה יעילה לניתוח כמותי, תא בודד של הכרומטין שינוי ואדריכלות גרעינית בהר שלם-ביציות ב<em&gt; ארבידופסיס</em

In flowering plants, the somatic-to-reproductive cell fate transition is marked by the specification of spore mother cells (SMCs) in floral organs of the ...