Name: isolation and enrichment of rat mesenchymal stem cells (mscs) and separation of single-colony derived mscs
Uploaded: 2010-03-22T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells MSCs and Separation of Single-colony Derived MSCs at JoVE.com

Çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (R01GM079688, R21RR024439 ve R21GM075838), Ulusal Bilim Vakfı (CBET 0.941.055) ve Mimar Sinan Vakfı tarafından desteklenmiştir.

1. Rat MKH izolasyonu Önceden 1&#39;de açıklandığı gibi, 6-8 hafta eski Sprague-Dawley erkek sıçan, 2 mezenkimal kök hücreleri izole edildi. İzole MKH plastik yüzeyine yapışır ve in vitro kültür sırasında kolayca genişletebilirsiniz. <ol><li> Hayvan anestezi odasına koyun ve yaklaşık beş dakika boyunca anestezi oldu. Anestezi sırasında, yanıp sönen, solunum ve motor aktivite oranı gözlemliyoruz. Motor aktivite durur ve yanıp sönen oran?...

<ol>
	<li>de Hemptinne, I., Vermeiren, C., Maloteaux, J. M., Hermans, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+glial+glutamate+transporters+in+adult+mesenchymal+stem+cells.">Induction of glial glutamate transporters in adult mesenchymal stem cells.</a> J Neurochem. 91, 155-166 (2004).</li><li>Porter, R. M., Huckle, W. R., Goldstein, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+dexamethasone+withdrawal+on+osteoblastic+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells.">Effect of dexamethasone withdrawal on osteoblastic differentiation of bone marrow stromal cells.</a> J Cell Biochem. 90, 13-22 (2003).</li><li>Chamberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+mesenchymal+stem+cells:+their+phenotype,+differentiation+capacity,+immunological+features,+and+potential+for+homing.">Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25, 2739-2749 (2007).</li><li>Abdallah, B. M., Kassem, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells:+from+basic+biology+to+clinical+applications.">Human mesenchymal stem cells: from basic biology to clinical applications.</a> Gene Ther. 15, 109-116 (2008).</li><li>Erica, L., Herzog, L. C., Diane, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krause+Plasticity+of+marrow-derived+stem+cells.">Krause Plasticity of marrow-derived stem cells.</a> Blood. 102, 3483-3493 (2003).</li><li>Colter, D. C., Sekiya, I., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+subpopulation+of+rapidly+self-renewing+and+multipotential+adult+stem+cells+in+colonies+of+human+marrow+stromal+cells.">Identification of a subpopulation of rapidly self-renewing and multipotential adult stem cells in colonies of human marrow stromal cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 7841-7845 (2001).</li></ol>

Bu protokol, izole etmek ve zenginleştirmek MKH anlatılmaktadır. Tek koloni elde edilen hücreleri ayırmak için bir yöntem de dahil edilmiştir. Başarılı bir izolasyon, zenginleştirme ve koloni ayrımı için önemli olan birkaç adım vardır. Hücre izolasyonu sıçan yaparken, bir hücre süzgeç ya da kan pıhtılaşması ve kemik enkaz kurtulmak için benzer büyüklükte bir steril naylon örgü süzülmeye tavsiye edilir. Gecede hücreleri kaplama sonra, birçok ölü hücreleri orta yüzen olacak ve ö...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1X D-PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14040-133</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11885-084</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>26140-079</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pen-Strep</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25200-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Imagnet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>552311</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin mouse IgG2a</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>555572</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin mouse IgG1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>555747</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin anti-rat CD54</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cedarlane Labs</td>
<td>CL054B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin anti-rat CD90</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cedarlane Labs</td>
<td>CL005B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin anti-rat CD45</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cedarlane Labs</td>
<td>CL001B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Imag buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>552362</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round-bottom tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>352063</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptavidin particles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>557812</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SA-PE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D systems</td>
<td>F0040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cloning cylinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C2059</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation and enrichment of rat mesenchymal stem cells (mscs) and separation of single-colony derived mscs

MKH, yetişkin kök hücrelerin tedavi edici uygulamalar için umut verici bir kaynak bir nüfus vardır. Bu hücreler, kemik iliğinden izole edilebilir ve plastik bağlılık nedeniyle hematopoietik kök hücreler (HKH&#39;lerin) kolaylıkla ayrılabilir. Bu protokol, sıçan femur ve tibiaları MKH izole etmek için nasıl açıklamaktadır. Izole hücreler manyetik hücre sıralayarak iki MKH yüzey belirteçleri CD54 ve CD90 karşı daha da zenginleştirilmiş. CD54 ve CD90 yüzey belirteçleri İfade sonra akış sitometri analizi ile teyit edildi. HSC işaretleyici CD45 sıralaması MKH HKH&#39;lerin tüketilmiş olup olmadığını kontrol etmek için de yer aldı. MKH doğal olarak oldukça heterojen. Farklı şekiller, proliferasyon ve farklılaşma yetenekleri hücrelerin alt popülasyonlar vardır. Bu alt popülasyonlar, bilinen tüm MKH belirteçlerinin ifade ve farklı alt popülasyonlar için hiçbir benzersiz marker henüz tespit edilmiştir. Bu nedenle, farklı alt popülasyonlar ayırmak için alternatif bir yaklaşım tek koloni elde edilen hücreler ayrı klonlama silindir kullanıyor. Tek koloniler elde edilen hücreler daha sonra kültür ve ayrı olarak değerlendirilir.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells MSCs and Separation of Single-colony Derived MSCs at JoVE.com

Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells MSCs and Separation of Single-colony Derived MSCs

Rat MKH, femur ve tibiaları izole edilmiş ve daha sonra manyetik hücre sıralama ile zenginleştirilmiş. Sıralama hücreler flow sitometri ile yüzey belirteçlerinin ifade teyit edildi. Bu hücreler de klonal yoğunluğu tek koloniler oluşturmak için kültüre edildi ve daha sonra bu kolonilerin klonlama silindir ile ayrıldı.

İzolasyon ve Rat Mezenkimal Kök Hücreler zenginleştirilmesi (MKH) ve MKH Türetilmiş Tek koloni Ayırma

MSCs are a population of adult stem cells that is a promising source for therapeutic applications. These cells can be isolated from the bone marrow and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells (MSCs) and Separation of Single-colony Derived MSCs

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

İzolasyon ve Hematopoetik Kök Hücre Transplantasyonu (HKH&#39;lerin)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

İnsan Göbek kordonu İzolasyon ve Hayvan Serum Genişleme Mezenkimal stromal hücreler (MKH) ve endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler (ECFCs) Türetilmiş

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Hoechst İzolasyonu ve Karakterizasyonu Düşük CD45 Negatif Fare Akciğer Mezenkimal Kök Hücre

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

İnsan Lipoaspirates den Yağ-türetilen Kök Hücre Manuel İzolasyon

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

Isolation of CD146+ Resident Lung Mesenchymal Stromal Cells from Rat Lungs

CD146 İzolasyonu<sup&gt; +</supSıçan Akcigerlerinden&gt; Resident Akciğer Mezenkimal Stromal hücreler

Mesenchymal stromal cells (MSCs) are increasingly recognized for their therapeutic potential in a wide range of diseases, including lung diseases. Besides ...

Isolation, Proliferation and Differentiation of Rhesus Macaque Adipose-Derived Stem Cells

Rhesus Macaque Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu, Proliferasyonu ve Farklılaşması

Adipose tissue provides a rich and accessible source of multipotent stem cells, which are able to self-renew. These adipose-derived stem cells (ADSCs) ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Kültürlenmiş İnsan Mezenkimal Kök Hücrelerinden Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Terapötik Uygulaması

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...