Name: expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris
Uploaded: 2010-02-25T16:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris at JoVE.com

نود أن نشكر المؤسسة الكندية للإبداع ، ومعارف كولومبيا البريطانية صندوق التنمية ، والمعاهد الكندية للأبحاث الصحية (CIHR) لدعم هذا العمل. وأيد طن متري من الزمالة من مركز تولا مؤسسة ممولة للتنوع وتطور الميكروبية (CMDE).

التعبير عن البروتينات المؤتلف في pastoris الخميرة Pichia methylotrophic قبل البدء في هذا البروتوكول يجب أن يكون الجين اهتمامك المستنسخة في إطار في P. pastoris ناقلات الأم ، وأنها تسلسل للتأكد من التركيب الصحيح من الجينات في المصالح ف?...

<ol>
	<li>Cereghino, G. P., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+yeast+in+biotechnology:+protein+production+and+genetic+analysis.">Applications of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis.</a> Curr Opin Biotechnol. 10, 422-427 (1999).</li><li>Cregg, J. M., Barringer, K. J., Hessler, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pichia+pastoris+as+a+Host+System+for+Transformations.">Pichia pastoris as a Host System for Transformations.</a> Mol. Cell. Biol. 5, 3376-3385 (1985).</li><li>Cregg, J. M., Cereghino, J. L., Shi, J., Higgins, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+protein+expression+in+Pichia+pastoris.">Recombinant protein expression in Pichia pastoris.</a> Mol Biotechnol. 16, 23-52 (2000).</li><li>Cereghino, G. P., Cereghino, J. L., Ilgen, C., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+recombinant+proteins+in+fermenter+cultures+of+the+yeast+Pichia+pastoris.">Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.</a> Curr Opin Biotechnol. 4, 329-332 (2002).</li></ol>

يوصف التعبير البروتين باستخدام الخميرة Pichia methylotrophic pastoris كنظام المضيف في هذا البروتوكول. يمكن أن يفرز هذا البروتين في المتوسط ​​اعتمادا على ناقلات الاستنساخ المستخدمة. إفراز بروتين المؤتلف يجعل تنقية اللاحقة أسهل. ومع ذلك ، قد أظهرت الظروف أن يكون الأمثل ?...

expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris

بروتين تعبير في الميكروبية حقيقية النواة المضيفة pastoris Pichia توفر إمكانية توليد كميات عالية من البروتين المؤتلف في نظام التعبير سريع وسهل الاستخدام. ك P. الكائنات الحية الدقيقة وحيدة الخلية pastoris من السهل التلاعب وتنمو بسرعة على وسائل الاعلام الرخيصة بكثافة عالية الخلية. كونه حقيقي النواة ، P. pastoris قادرة على تنفيذ العديد من التعديلات بعد متعدية التي تؤديها خلايا حقيقية النواة العالي والحصول على البروتينات المؤتلف الخضوع للطي البروتين ، وتجهيز بروتين ، ثاني كبريتيد السندات ، وتكوين ارتباط بالغليكوزيل [1]. ك P. الخميرة methylotrophic pastoris قادر على التأييض الميثانول كمصدر وحيد للكربون. وينظم بإحكام المروج قوية لأوكسيديز الكحول ، AOX1 ، والميثانول والناجمة عن استخدامه للتعبير عن الجينات في المصالح. تبعا لذلك ، يمكن أن يكون ذلك حافزا للتعبير عن البروتين الخارجية بإضافة الميثانول إلى وسط النمو [2 ، 3]. ميزة أخرى هامة هي إفراز بروتين المؤتلف في متوسطة النمو ، وذلك باستخدام تسلسل إشارة إلى استهداف بروتين الأجنبية إلى مسار إفرازية من pastoris P.. مع مستويات منخفضة من البروتين فقط يفرز الذاتية على وسائل الاعلام نفسها الخميرة والبروتينات لا تضاف إلى وسائل الإعلام ، وهو بروتين غيروي يبني غالبية البروتين الكلي في الأجلين المتوسط ​​ويسهل الخطوات التالية لتنقية البروتين [3 ، 4]. الموجه المستخدمة هنا (pPICZαA) يحتوي على مروج AOX1 لتنظيم محكم التعبير الميثانول التي يسببها ، من الجينات في المصالح ؛ إشارة إفراز α عامل لإفراز البروتين المؤتلف ، والجينات المقاومة لاختيار Zeocin في كل من E. القولونية وPichia والببتيد C - المحطة تحتوي على حاتمة ج myc وpolyhistidine (6xHis) شعارا لكشف وتنقية البروتين المؤتلف. نعرض أيضا تحليل لطخة غربية من البروتين المؤتلف باستخدام محددة لمكافحة myc - HRP الضد الاعتراف حاتمة ج myc على ناقلات الأصل.

Watch this Scientific Journal Video about Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris at JoVE.com

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

بروتوكول يصف تعبير البروتين باستخدام الخميرة methylotrophic<em&gt; Pichia pastoris</em&gt;. إعداد electrocompetent خلايا الخميرة ، والتحول من ناقلات الجينات مع الاهتمام في<em&gt; P. pastoris</emوتجرى أيضا&gt; والخميرة تنقية الحمض النووي. الغربية لطخة تحليل وتنقية البروتين بناء الخطوات الأخيرة في هذا البروتين بروتوكول التعبير.

التعبير عن البروتينات المؤتلف في الخميرة Methylotrophic Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

High-throughput Purification of Affinity-tagged Recombinant Proteins

عالية الإنتاجية تنقية تقارب الموسومة البروتينات المؤتلف

X-ray crystallography is the method of choice for obtaining a detailed view of the structure of proteins. Such studies need to be complemented by further ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration كفاءة من النباتات للتعبير عابر الرفيع المستوى من البروتينات المؤتلف

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Temporal Quantification of MAPK Induced Expression in Single Yeast Cells

الكمي الزمانية التعبير MAPK المستحثة في خلايا الخميرة واحدة

The quantification of gene expression at the  single cell level uncovers novel regulatory mechanisms obscured in measurements  performed at the population ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

عالية الإنتاجية التعبير الكمي فحص وتنقية تطبق على المؤتلف ثاني كبريتيد الغنية البروتينات السم المنتجة في<em&gt; E. القولونية</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

التعبير عابرة من البروتينات عن طريق هيدرودينامي الجينات في الفئران التسليم

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

High Yield Expression of Recombinant Human Proteins with the Transient Transfection of HEK293 Cells in Suspension

ارتفاع العائد التعبير عن البروتينات المؤتلف الإنسان مع عابر ترنسفكأيشن من خلايا HEK293 في تعليق

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and ...

Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry

تقرير من سطح الخلية النسبي ومجموع التعبير عن قنوات المؤتلف ايون باستخدام التدفق الخلوي

Inherited or de novo mutations in cation-selective channels may lead to sudden cardiac death. Alteration in the plasma membrane trafficking of these ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

التعبير عابرة والخلوية توطين البروتينات المؤتلف في الخلايا مثقف الحشرات

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...