Name: expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris
Uploaded: 2010-02-25T16:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris at JoVE.com

ברצוננו להודות לקרן קנדית עבור חדשנות, פיתוח קולומביה הבריטית קרן ידע, לבין המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR) לתמיכה בעבודה זו. MT נתמך על ידי מענק ממרכז טולה היסוד במימון עבור גיוון התפתחות חיידקים (CMDE).

ביטוי של חלבונים רקומביננטי ב pastoris שמרים methylotrophic Pichia לפני שאתם מתחילים בפרוטוקול זה אתה צריך הגן העניין שלך משובטים באותה מסגרת בתוך פ הורה pastoris וקטור אותו רצף לבדוק הכניסה הנכונה של הגן של עניין וקטור. <p class="...

<ol>
	<li>Cereghino, G. P., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+yeast+in+biotechnology:+protein+production+and+genetic+analysis.">Applications of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis.</a> Curr Opin Biotechnol. 10, 422-427 (1999).</li><li>Cregg, J. M., Barringer, K. J., Hessler, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pichia+pastoris+as+a+Host+System+for+Transformations.">Pichia pastoris as a Host System for Transformations.</a> Mol. Cell. Biol. 5, 3376-3385 (1985).</li><li>Cregg, J. M., Cereghino, J. L., Shi, J., Higgins, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+protein+expression+in+Pichia+pastoris.">Recombinant protein expression in Pichia pastoris.</a> Mol Biotechnol. 16, 23-52 (2000).</li><li>Cereghino, G. P., Cereghino, J. L., Ilgen, C., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+recombinant+proteins+in+fermenter+cultures+of+the+yeast+Pichia+pastoris.">Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.</a> Curr Opin Biotechnol. 4, 329-332 (2002).</li></ol>

ביטוי חלבון באמצעות pastoris methylotrophic Pichia שמרים כמערכת המארחת מתואר בפרוטוקול זה. חלבון יכול להיות מופרש לתוך המדיום בהתאם וקטור שיבוט בשימוש. הפרשת חלבון רקומביננטי הופך את טיהור הבאים קל. עם זאת, התנאים המוצג יכול להיות מותאם במיוחד הביטוי של חלבונים שונים וש?...

expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris

ביטוי החלבון על pastoris Pichia חיידקים אוקריוטים לארח מציעה את האפשרות לייצר כמויות גדולות של חלבון רקומביננטי במערכת ביטוי מהירה וקלה לשימוש. בתור מיקרואורגניזם חד תאיים P. pastoris קל לתפעל גדל במהירות על מדיה זולה בצפיפויות גבוהות התא. להיות eukaryote, פ pastoris הוא מסוגל לבצע רבים שלאחר translational שינויים שבוצעו על ידי התאים האיקריוטים גבוהה את החלבונים רקומביננטי שהושגו לעבור קיפול חלבונים, עיבוד פרוטאוליטי, היווצרות קשר דיסולפיד glycosylation ו [1]. כפי שמרים פ methylotrophic pastoris מסוגל חילוף חומרים מתנול כמקור פחמן הבלעדי. האמרגן חזק מונואמין אלכוהול, AOX1, מוסדר בחוזקה המושרה על ידי מתנול הוא משמש הביטוי של הגן של עניין. לפיכך, הביטוי של חלבון זר יכול להיגרם על ידי הוספת מתנול עד בינוני הצמיחה [2, 3]. יתרון חשוב נוסף הוא הפרשת חלבון רקומביננטי לתוך מדיום גידול, תוך שימוש ברצף אות למקד את החלבון זרים מסלול הפרשה של pastoris פ. רק עם רמות נמוכות של חלבון אנדוגני המופרש לתקשורת על ידי שמרים עצמו ולא חלבונים להוסיף התקשורת, חלבון Heterologous בונה את רוב החלבון הכולל במדיום ומקל על הצעדים הבאים טיהור חלבון [3, 4]. וקטור משמש כאן (pPICZαA) מכיל את מקדם AOX1 לביטוי מוסדר היטב מתנול-Induced, של הגן של ריבית; האות α-factor עבור הפרשת הפרשת חלבון רקומביננטי, גן עמידות Zeocin לבחירה בשני E. coli ו Pichia ו פפטיד C-מסוף המכיל את c-myc epitope ו (6xHis) polyhistidine תג זיהוי וטיהור של חלבון רקומביננטי. אנחנו גם מראים ניתוח כתם המערבי של חלבון רקומביננטי באמצעות נוגדנים ספציפיים נגד myc-HRP הכרה epitope c-myc על וקטור האב.

Watch this Scientific Journal Video about Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris at JoVE.com

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

הפרוטוקול מתאר ביטוי חלבון באמצעות שמרים methylotrophic<em&gt; Pichia pastoris</em&gt;. הכנת תאים שמרים electrocompetent, טרנספורמציה של וקטור עם הגן של עניין אל<em&gt; פ &#39; pastoris</em&gt; ו-DNA טיהור שמרים מבוצעות גם. ניתוח המערבי כתם וטיהור חלבונים בונים את הצעדים האחרונים בפרוטוקול זה ביטוי חלבון.

ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים Methylotrophic Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

High-throughput Purification of Affinity-tagged Recombinant Proteins

טיהור תפוקה גבוהה של חלבונים רקומביננטי זיקה מתויגת-

X-ray crystallography is the method of choice for obtaining a detailed view of the structure of proteins. Such studies need to be complemented by further ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration היעילה של צמחים לביטוי חולף ברמה גבוהה של חלבונים רקומביננטי

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Temporal Quantification of MAPK Induced Expression in Single Yeast Cells

כימות זמניות של ביטוי MAPK מושרה בתאי שמרים יחיד

The quantification of gene expression at the  single cell level uncovers novel regulatory mechanisms obscured in measurements  performed at the population ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

הקרנת תפוקה גבוהה ביטוי כמותי וטיהור יישומים לחלבוני ארס רקומביננטי דיסולפיד עשירים הופק ב<em&gt; א coli</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

ביטוי חולף של חלבונים על ידי הידרודינמית ג&#39;ין משלוח בעכברים

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

High Yield Expression of Recombinant Human Proteins with the Transient Transfection of HEK293 Cells in Suspension

ביטוי תשואה גבוהה של חלבונים אנושיים רקומביננטי עם transfection חולף של תאי HEK293 בהשעיה

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and ...

Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry

קביעת פני התא יחסית והביטוי סה&quot;כ של תעלות יונים רקומביננטי שימוש cytometry זרימה

Inherited or de novo mutations in cation-selective channels may lead to sudden cardiac death. Alteration in the plasma membrane trafficking of these ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

ביטוי חולף ואת סלולר לוקליזציה של חלבונים רקומביננטי תאים בתרבית חרקים

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...