Name: expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris
Uploaded: 2010-02-25T16:50:00
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हम इस कार्य का समर्थन करने के लिए अभिनव, ब्रिटिश कोलंबिया नॉलेज डेवलपमेंट फंड और स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) के संस्थान कनाडा के लिए कनाडा फाउंडेशन धन्यवाद देना चाहूंगा. मीट्रिक टन तुला नींव वित्त पोषित माइक्रोबियल विविधता और इवोल्यूशन (कमोडोर) के लिए केंद्र से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया.

पुनः संयोजक प्रोटीन के methylotrophic खमीर Pichia pastoris में अभिव्यक्ति इससे पहले कि आप इस प्रोटोकॉल शुरू आप अपने हित के जीन एक पी. में फ्रेम में क्लोन होना चाहिए pastoris माता पिता वेक्टर और यह वेक्टर मे?...

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	<li>Cereghino, G. P., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+yeast+in+biotechnology:+protein+production+and+genetic+analysis.">Applications of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis.</a> Curr Opin Biotechnol. 10, 422-427 (1999).</li><li>Cregg, J. M., Barringer, K. J., Hessler, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pichia+pastoris+as+a+Host+System+for+Transformations.">Pichia pastoris as a Host System for Transformations.</a> Mol. Cell. Biol. 5, 3376-3385 (1985).</li><li>Cregg, J. M., Cereghino, J. L., Shi, J., Higgins, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+protein+expression+in+Pichia+pastoris.">Recombinant protein expression in Pichia pastoris.</a> Mol Biotechnol. 16, 23-52 (2000).</li><li>Cereghino, G. P., Cereghino, J. L., Ilgen, C., Cregg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+recombinant+proteins+in+fermenter+cultures+of+the+yeast+Pichia+pastoris.">Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.</a> Curr Opin Biotechnol. 4, 329-332 (2002).</li></ol>

प्रोटीन एक मेजबान सिस्टम के रूप में अभिव्यक्ति का उपयोग methylotrophic खमीर Pichia pastoris इस प्रोटोकॉल में वर्णित है. प्रोटीन प्रयुक्त क्लोनिंग सदिश के आधार पर मध्यम में secreted किया जा सकता है है. पुनः संयोजक प्रोटीन क...

expression of recombinant proteins in the methylotrophic yeast pichia pastoris

माइक्रोबियल यूकेरियोटिक मेजबान Pichia pastoris में प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए एक तेज और आसान उपयोग करने के लिए अभिव्यक्ति प्रणाली में पुनः संयोजक प्रोटीन की उच्च मात्रा में उत्पन्न की संभावना प्रदान करता है. के रूप में एक एकल celled सूक्ष्मजीव पी. pastoris हेरफेर करने के लिए आसान है और उच्च सेल घनत्व में सस्ती मीडिया पर तेजी से बढ़ता है . एक eukaryote, पी. होने के नाते pastoris बाद translational संशोधनों उच्च यूकेरियोटिक कोशिकाओं और पुनः संयोजक प्रोटीन प्राप्त द्वारा प्रदर्शन के कई प्रोटीन तह, proteolytic प्रसंस्करण, डाइसल्फ़ाइड बांड गठन और [1] ग्लाइकोसिलेशन से गुजरना करने के लिए प्रदर्शन करने में सक्षम है. के रूप में एक methylotrophic खमीर पी. pastoris अपने एकमात्र कार्बन स्रोत के रूप में मेथनॉल metabolizing के लिए सक्षम है . शराब oxidase, AOX1, के लिए मजबूत प्रमोटर कसकर विनियमित है और मेथनॉल से प्रेरित है और यह हित के जीन की अभिव्यक्ति के लिए प्रयोग किया जाता है. तदनुसार, मध्यम विकास के लिए मेथनॉल जोड़कर विदेशी प्रोटीन की अभिव्यक्ति प्रेरित किया जा सकता है [2, 3]. एक अन्य महत्वपूर्ण लाभ मध्यम विकास में पुनः संयोजक प्रोटीन का स्राव है, एक संकेत अनुक्रम का उपयोग कर पी. pastoris की स्रावी मार्ग विदेशी प्रोटीन लक्ष्य. अंतर्जात खमीर ही मीडिया के लिए secreted प्रोटीन और मीडिया को नहीं जोड़ा प्रोटीन का ही निम्न स्तर के साथ, एक heterologous प्रोटीन मध्यम में कुल प्रोटीन के बहुमत बनाता है और प्रोटीन शुद्धि चरणों का पालन की सुविधा [3, 4]. α कारक पुनः संयोजक प्रोटीन, दोनों ई. में एक Zeocin चयन के लिए प्रतिरोध जीन के स्राव के लिए स्राव संकेत; यहां इस्तेमाल किया वेक्टर (pPICZαA) कसकर विनियमित, मेथनॉल प्रेरित हित के जीन की अभिव्यक्ति के लिए AOX1 प्रमोटर शामिल कोलाई और Pichia और सी टर्मिनल पेप्टाइड युक्त सी Myc मिलान और पता लगाने और एक पुनः संयोजक प्रोटीन की शुद्धि के लिए एक polyhistidine टैग (6xHis) . हम भी विशिष्ट विरोधी myc-एचआरपी माता पिता वेक्टर पर मिलान सी Myc पहचानने एंटीबॉडी का उपयोग करते हुए पुनः संयोजक प्रोटीन के पश्चिमी धब्बा विश्लेषण दिखाते हैं.

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Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

प्रोटोकॉल methylotrophic खमीर का उपयोग प्रोटीन अभिव्यक्ति का वर्णन<em&gt; Pichia pastoris</em&gt;. electrocompetent खमीर कोशिकाओं, वेक्टर के साथ ब्याज की जीन में परिवर्तन की तैयारी<em&gt; पी. pastoris</em&gt; और खमीर डीएनए शुद्धि भी प्रदर्शन कर रहे हैं. पश्चिमी धब्बा विश्लेषण और प्रोटीन शुद्धि इस प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रोटोकॉल में अंतिम कदम का निर्माण.

पुनः संयोजक प्रोटीन के Methylotrophic खमीर में अभिव्यक्ति Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

सक्रिय टी. के पुनर्गठन इन विट्रो में castaneum टेलोमिरेज

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

High-throughput Purification of Affinity-tagged Recombinant Proteins

आत्मीयता टैग पुनः संयोजक प्रोटीन के शोधन उच्च throughput

X-ray crystallography is the method of choice for obtaining a detailed view of the structure of proteins. Such studies need to be complemented by further ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

पुनः संयोजक प्रोटीन का उच्च स्तर क्षणिक अभिव्यक्ति के लिए पौधे के कुशल Agroinfiltration

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Temporal Quantification of MAPK Induced Expression in Single Yeast Cells

एकल खमीर कोशिकाओं में MAPK प्रेरित अभिव्यक्ति की अस्थायी मात्रा

The quantification of gene expression at the  single cell level uncovers novel regulatory mechanisms obscured in measurements  performed at the population ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

में उत्पादित संयोजक Disulfide युक्त जहर प्रोटीन के लिए लागू उच्च Throughput मात्रात्मक अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग और शोधन<em&gt; ई. कोली</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

चूहे में द्रव्यगतिकी जीन डिलीवरी द्वारा प्रोटीन की क्षणिक अभिव्यक्ति

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

High Yield Expression of Recombinant Human Proteins with the Transient Transfection of HEK293 Cells in Suspension

निलंबन में HEK293 कोशिकाओं के क्षणिक अभिकर्मक के साथ पुनः संयोजक मानव प्रोटीन की उच्च उपज अभिव्यक्ति

The art of producing recombinant proteins with complex post-translational modifications represents a major challenge for studies of structure and ...

Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry

सापेक्ष कोशिका की सतह और संयोजक आयन चैनलों के कुल अभिव्यक्ति से फ्लो का उपयोग का निर्धारण

Inherited or de novo mutations in cation-selective channels may lead to sudden cardiac death. Alteration in the plasma membrane trafficking of these ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

क्षणिक अभिव्यक्ति और पुनः संयोजक प्रोटीन के सेलुलर स्थानीयकरण सुसंस्कृत कीट कोशिकाओं में

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...