Name: analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast
Uploaded: 2010-03-24T16:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast at JoVE.com

<p class="jove_content"> Nous remercions Brian G. Coon et Claudia B. Hanna pour des discussions utiles et de soutien. Ce projet a été soutenu par fonds de démarrage du Dép. des sciences biologiques, Université de Purdue à R. Claudio Aguilar et une société américaine du cancer Subvention de recherche institutionnelle à R. Claudio Aguilar via le Centre de Purdue Cancer. </p>

<p class="jove_title"> Culture cellulaire et d&#39;induction des protéines A. </p><p class="jove_content"> Cette section décrit les conditions de culture cellulaire, cycle cellulaire synchronisation avec Nocodazole, suivie par l&#39;induction de l&#39;expression de la protéine à partir d&#39;un promoteur régulable dans des cellules de levure. </p><ol><li> La souche de type sauvage de levure W303 <em>(leu2-3, 112 trp1-1 can1-100 ura3-1 ade2-1 his3-11, 15)</em> est transformé avec de copies (2μ) ADN plasmidique qui contient notre gène d&#...

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	<li>R&#246;nicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., M&#252;ller, R., Funk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+conditional+promoters+for+expression+of+heterologous+proteins+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Enzymol</em>. <b>283</b>, 313-322 (1997).</li><li>Gietz, R. D., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>High efficiency transformation with lithium acetate in Molecular Genetics of Yeast: A Practical Approach</em>. , 121-134 (1994).</li><li>Mukherjee, D., Coon, B. G., Edwards, D. F., Hanna, C. B., Longhi, S. A., McCaffery, J. M., Wendland, B., Retegui, L. A., Bi, E., Aguilar, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yeast+endocytic+protein+Epsin+2+functions+in+a+cell-division+signaling+pathway.">The yeast endocytic protein Epsin 2 functions in a cell-division signaling pathway.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Sci</em>. <b>122</b>, 2453-2463 (2009).</li><li>Sherman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Getting started with yeast in Guide to Yeats genetics and Molecular Biology</em>. , 3-21 (1991).</li></ol>

<p class="jove_content"> Ce protocole décrit comment suivre le développement d&#39;un phénotype morphologique (cellule de levure incapable de subir une division cellulaire proprement dite) sur surexpression de la protéine. Lorsque vous effectuez cette procédure, il est important de se rappeler de récolter des cellules de levure par granulation à la vitesse de centrifugation recommandé que des vitesses plus rapides peuvent endommager les cellules et les résultats obscurs. Le bleu de méthylène et du blanc de calcofluor doit être ajout...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd"><html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en"><div><table border="1"><thead><tr><th> Nom du produit </th><th> Type </th><th> Entreprise </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commenter </th></tr></thead><tbody><tr><td> Nocodazole </td><td> Réactif </td><td> Sigma (St. Louis, MO) </td><td> M1404 </td><td></td><tr><td> Bleu de méthylène à 1% (p / v) </td><td> Réactif </td><td> VWR International </td><td> VW6276-0 </td><td></td><tr><td> Calcofluor blanc </td><td> Réactif </td><td> Sigma (St. Louis, MO) </td><td> F3543 </td><td></td><tr><td> Vaseline </td><td> Réactif </td><td> VWR International </td><td> VW3339-2 </td><td></td></tbody></table></div>

analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast

<p class="jove_content">Délétion du gène et surexpression de la protéine sont des méthodes courantes pour l&#39;étude des fonctions des protéines. Dans cet article, nous décrivons un protocole pour l&#39;analyse du développement phénotype en fonction de la concentration de protéines au niveau de la population et une seule cellule dans<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Bien que ce protocole est basé sur la surexpression d&#39;une protéine, il peut facilement être adapté pour phénotypes morphologiques dépendant de la suppression de l&#39;expression des protéines. Notre laboratoire s&#39;intéresse à l&#39;étude des propriétés de signalisation de la protéine adaptatrice epsin endocytose. À cette fin, nous avons utilisé une approche dominante négative dans laquelle nous surexprimé l&#39;conservée<u&gt; E</u&gt; PSIN<u&gt; N</u&gt; -<u&gt; T</u&gt; Erminal<u&gt; H</u&gt; Omology (ENTH) de domaine dans le but d&#39;interférer avec les fonctions de endogène epsin-2 (Ent2 ou YLR206W). Nous avons observé que la surexpression du domaine de ENTH Ent2 (ENTH2) dans les cellules de type sauvage a conduit à un défaut de la division cellulaire qui dépend de la mauvaise localisation d&#39;une famille de protéines d&#39;échafaudage, septines.</p>

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Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

<p class="jove_content">Délétion du gène et surexpression de la protéine sont des méthodes courantes pour l&#39;étude des fonctions des protéines. Dans cet article, nous décrivons un protocole pour l&#39;analyse du développement phénotype en fonction de la concentration de protéines au niveau de la population et une seule cellule dans<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;.</p>

Analyse du développement d&#39;un phénotype morphologique en fonction de la concentration de protéines dans la levure bourgeonnante

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Research

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Biology

Use of Rotorod as a Method for the Qualitative Analysis of Walking in Rat

L&#39;utilisation de Rotorod comme une méthode pour l&#39;analyse qualitative de la marche chez le rat

High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a ...

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A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Un neuronale et astrocytes de co-culture de dosage pour l&#39;analyse du contenu haute de la neurotoxicité

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Mesure Life Span réplicative dans la levure bourgeonnante

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

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L&#39;importance de la concentration de protéines correct pour Cinétique et Détermination d&#39;affinité en analyse structure-fonction

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

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The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

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Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

Bourgeonnement de levure extraction et purification des protéines pour l&#39;étude de la fonction, Interactions, et des modifications post-traductionnelles

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

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The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

Protein Purification Technique qui permet la détection de sumoylation et Ubiquitination de levure bourgeonnante kinétochoriens protéines Ndc10 et Ndc80

Post-translational Modifications (PTMs), such as phosphorylation, methylation, acetylation, ubiquitination, and sumoylation, regulate the cellular ...

Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

Applications de pHluorin pour Quantitative, Kinetic et à haut débit Analyse des endocytose dans la levure bourgeonnante

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...