Name: analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast
Uploaded: 2010-03-24T16:05:00
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<p class="jove_content"> Ringraziamo Brian G. Coon e Claudia B. Hanna per le discussioni utili e supporto. Questo progetto è stato sostenuto da fondi di start-up dal Dep. di Scienze Biologiche, la Purdue University di Claudio R. Aguilar e un americano Cancer Society istituzionali Research Grant a Claudio R. Aguilar attraverso il Centro Purdue Cancro. </p>

<p class="jove_title"> A. coltura cellulare e induzione di proteine </p><p class="jove_content"> Questa sezione descrive le condizioni di coltura cellulare, ciclo cellulare sincronizzazione con Nocodazole, seguita da induzione di espressione della proteina da un promotore regolabile in cellule di lievito. </p><ol><li> Il selvaggio lievito ceppo del tipo W303 <em>(leu2-3, 112 TRP1-1 CAN1-100 ura3-1 ade2-1 his3-11, 15)</em> si trasforma con copia alto (2μ) DNA plasmide che contiene il nostro gene di interesse (ENTH2) sotto il controllo di metion...

<ol>
	<li>R&#246;nicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., M&#252;ller, R., Funk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+conditional+promoters+for+expression+of+heterologous+proteins+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Enzymol</em>. <b>283</b>, 313-322 (1997).</li><li>Gietz, R. D., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>High efficiency transformation with lithium acetate in Molecular Genetics of Yeast: A Practical Approach</em>. , 121-134 (1994).</li><li>Mukherjee, D., Coon, B. G., Edwards, D. F., Hanna, C. B., Longhi, S. A., McCaffery, J. M., Wendland, B., Retegui, L. A., Bi, E., Aguilar, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yeast+endocytic+protein+Epsin+2+functions+in+a+cell-division+signaling+pathway.">The yeast endocytic protein Epsin 2 functions in a cell-division signaling pathway.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Sci</em>. <b>122</b>, 2453-2463 (2009).</li><li>Sherman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Getting started with yeast in Guide to Yeats genetics and Molecular Biology</em>. , 3-21 (1991).</li></ol>

<p class="jove_content"> Questo protocollo descrive come monitorare lo sviluppo di un fenotipo morfologico (cellula di lievito in grado di sottoporsi corretta divisione cellulare) al momento della sovraespressione proteica. Nel fare questa procedura è importante ricordarsi di raccogliere le cellule di lievito da pellettatura alla velocità di centrifugazione raccomandata come velocità più elevate possono danneggiare le cellule ed i risultati oscuri. Blu di metilene e Calcofluor bianco deve essere aggiunto a vivere le cellule appena prima di ...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Nocodazole</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO)</td>
<td>M1404</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methylene Blue 1% (w/v)</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR International</td>
<td>VW6276-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Calcofluor White</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO)</td>
<td>F3543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petroleum Jelly</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR International</td>
<td>VW3339-2</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast

<p class="jove_content">Delezione del gene e l&#39;iperespressione delle proteine ​​sono metodi comuni per lo studio delle funzioni delle proteine. In questo articolo, descriviamo un protocollo per l&#39;analisi del fenotipo di sviluppo in funzione della concentrazione di proteine ​​a popolazione e monocellulari livelli<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Anche se questo protocollo si basa sulla sovraespressione di una proteina, può essere facilmente adattato per fenotipi morfologici dipende soppressione della espressione proteica. Il nostro laboratorio è interessato a studiare le proprietà di segnalazione delle epsin endocitico proteina adattatore. A tal fine abbiamo utilizzato un approccio dominante negativa in cui siamo sovra-espresso il conservati<u&gt; E</u&gt; Psin<u&gt; N</u&gt; -<u&gt; T</u&gt; Erminal<u&gt; H</u&gt; Omology (settimo) dominio al fine di interferire con le funzioni di endogeno epsin-2 (o Ent2 YLR206W). Abbiamo osservato che l&#39;iperespressione del dominio settimo di Ent2 (ENTH2) nelle cellule wild-type ha portato a un difetto di divisione cellulare, che dipende dalla mislocalization di una famiglia di proteine ​​ponteggi, septins.</p>

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Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

<p class="jove_content">Delezione del gene e l&#39;iperespressione delle proteine ​​sono metodi comuni per lo studio delle funzioni delle proteine. In questo articolo, descriviamo un protocollo per l&#39;analisi del fenotipo di sviluppo in funzione della concentrazione di proteine ​​a popolazione e monocellulari livelli<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;.</p>

Analisi dello sviluppo di un fenotipo morfologico come funzione della concentrazione di proteine ​​in lievito

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

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L&#39;uso di Rotorod come un metodo per l&#39;analisi qualitativa del Camminare in Rat

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A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Un neuronale e astrociti Co-Cultura Assay per l&#39;analisi dei contenuti elevati di neurotossicità

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Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Durata pannello misura replicazione in lievito

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

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The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

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Germogliamento lievito proteine ​​estrazione e purificazione per lo Studio della funzione, interazioni e modificazioni post-traduzionali

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Analisi di Nefrone Composizione e funzione del rene Zebrafish adulti

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Purificazione delle proteine ​​tecnica che permette la rilevazione di sumoilazione e Ubiquitinazione di lievito in erba cinetocore proteine ​​Ndc10 e Ndc80

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Le domande di pHluorin per quantitativa, Cinetica e high-throughput analisi di endocitosi in germogliamento lievito

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...

Analisi dello sviluppo di un fenotipo morfologico come funzione della concentrazione di proteine ​​in lievito

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