Name: analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast
Uploaded: 2010-03-24T16:05:00
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<p class="jove_content"> 우리는 도움이 토론과 지원을위한 브라이언 G. 쿤과 클라우디아 B. 한나 감사합니다. 이 프로젝트는 데프에서 자금 업을 시작하여 지원했다. 생물 과학, R. 클라우디오 아길라르와 퍼듀 암 센터를 통해 R. 클라우디오 아길라르에 미국 암 학회 기관 연구 부여 퍼듀 대학. </p>

<p class="jove_title"> A.의 세포 배양 및 단백질 유도 </p><p class="jove_content"> 이 섹션은 효모 세포에서 regulatable 발기인의 단백질 표현의 유도로 다음 세포 배양 조건, Nocodazole와 세포주기 동기화를 설명합니다. </p><ol><li> 야생 유형 효모 스트레인 W303 <em>(leu2 - 3, 112 trp1 - 1 can1 - 100 ura3 - 1 ade2 - 1 his3 - 11, 15)은</em> 통제하에 관심을 우리의 유전자 (ENTH2)이 포함되어 높은 사본 (2μ) 플라스미드 DNA로 변환됩니다 메티오닌 - repressib...

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	<li>R&#246;nicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., M&#252;ller, R., Funk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+conditional+promoters+for+expression+of+heterologous+proteins+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Enzymol</em>. <b>283</b>, 313-322 (1997).</li><li>Gietz, R. D., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>High efficiency transformation with lithium acetate in Molecular Genetics of Yeast: A Practical Approach</em>. , 121-134 (1994).</li><li>Mukherjee, D., Coon, B. G., Edwards, D. F., Hanna, C. B., Longhi, S. A., McCaffery, J. M., Wendland, B., Retegui, L. A., Bi, E., Aguilar, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yeast+endocytic+protein+Epsin+2+functions+in+a+cell-division+signaling+pathway.">The yeast endocytic protein Epsin 2 functions in a cell-division signaling pathway.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Sci</em>. <b>122</b>, 2453-2463 (2009).</li><li>Sherman, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Getting started with yeast in Guide to Yeats genetics and Molecular Biology</em>. , 3-21 (1991).</li></ol>

<p class="jove_content"> 이 프로토콜은 단백질 overexpression시 형태학의 표현형 (적절한 세포 분열을 거쳐 수없는 효모 세포)의 개발을 모니터링하는 방법에 대해 설명합니다. 이 절차를 수행할 때 그것은 빠른 속도 전지하고, 모호한 결과를 손상 수 있으므로 권장 원심 분리 속도 pelleting하여 효모 세포를 수확하기 위해 기억하는 것이 중요합니다. 메틸렌 블루와 Calcofluor 흰색들은 독성으로 직전 이미징에 세포를 사는에 추...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Nocodazole</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO)</td>
<td>M1404</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methylene Blue 1% (w/v)</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR International</td>
<td>VW6276-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Calcofluor White</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO)</td>
<td>F3543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petroleum Jelly</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR International</td>
<td>VW3339-2</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

analysis of the development of a morphological phenotype as a function of protein concentration in budding yeast

<p class="jove_content">유전자 삭제 및 단백질 overexpression은 단백질의 기능을 연구하는 일반적인 방법입니다. 이 문서에서는, 우리는 인구의 단백질 농도의 기능 및 단일 세포 수준으로 표현형 개발의 분석을 위해 프로토콜을 설명<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. 이 프로토콜은 단백질의 overexpression를 기반으로하지만, 그것은 쉽게 단백질 표현의 억제에 따라 형태학의 phenotypes에 대해 적용할 수 있습니다. 우리 연구실은 endocytic 어댑터 단백질 epsin의 신호 특성을 공부에 관심을 가지고있다. 그 목적은 우리가 우리가 보존 - 이리 표현하는 지배적인 부정적인 접근 방식을 사용<u&gt; E</u&gt; psin<u&gt; N</u&gt; -<u&gt; T</u&gt; erminal<u&gt; H</u내생 epsin - 2 (Ent2 또는 YLR206W)의 기능을 방해하기 위해&gt; omology (ENTH) 도메인. 우리는 비계 단백질, septins의 가족의 mislocalization에 따라 달라집니다 세포 분열의 결함에 LED 야생 유형 세포 Ent2 (ENTH2)의 ENTH 도메인의 overexpression을 관찰했다.</p>

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Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

<p class="jove_content">유전자 삭제 및 단백질 overexpression은 단백질의 기능을 연구하는 일반적인 방법입니다. 이 문서에서는, 우리는 인구의 단백질 농도의 기능 및 단일 세포 수준으로 표현형 개발의 분석을 위해 프로토콜을 설명<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;.</p>

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