Name: fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method
Uploaded: 2010-11-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

فإن مثل كتاب شكر لأعضاء المختبر هيوستن لقراءة نقدية للمخطوطة. ويدعم البحث من المعاهد الوطنية للصحة (GM083999) منحت لDWH

1. الجراحية إزالة أنسجة المبيض <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد دفعة جديدة من مستنبت البويضة (OCM ؛ المواد) ، وبين 400-800 مل اعتمادا على حجم التجربة. ضبط الرقم الهيدروجيني ل7،6-7،8 ، حتى أحمر الفينول يتحول إلى اللون الأحمر الداكن (ستة أو حتى قطر...

<ol>
	<li>Brun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+maturation+in+vitro:+contribution+of+the+oviduct+to+total+maturation+in+Xenopus+laevis.">Oocyte maturation in vitro: contribution of the oviduct to total maturation in Xenopus laevis.</a> Experientia. 31, 1275-1276 (1975).</li><li>Elinson, R. P., Pasceri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+UV-sensitive+targets+in+dorsoanterior+specification+of+frog+embryos.">Two UV-sensitive targets in dorsoanterior specification of frog embryos.</a> Development. 106, 511-518 (1989).</li><li>Heasman, J., Holwill, S., Wylie, C. C., C, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+of+cultured+Xenopus+oocytes+and+use+in+studies+of+maternally+inherited+molecules.">Fertilization of cultured Xenopus oocytes and use in studies of maternally inherited molecules.</a> Methods Cell Biol. 36, 213-230 (1991).</li><li>Holwill, S., Heasman, J., Crawley, C., Wylie, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axis+and+germ+line+deficiencies+caused+by+u.v+irradiation+of+Xenopus+oocytes+cultured+in+vitro.">Axis and germ line deficiencies caused by u.v irradiation of Xenopus oocytes cultured in vitro.</a> Development. 100, 735-743 (1987).</li><li>Houston, D. W., King, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+Xdazl,+a+germ+plasm-localized+RNA,+in+the+differentiation+of+primordial+germ+cells+in+Xenopus.">A critical role for Xdazl, a germ plasm-localized RNA, in the differentiation of primordial germ cells in Xenopus.</a> Development. 127, 447-456 (2000).</li><li>Mir, A., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+the+mother+can+help:+studying+maternal+Wnt+signaling+by+anti-sense-mediated+depletion+of+maternal+mRNAs+and+the+host+transfer+technique.">How the mother can help: studying maternal Wnt signaling by anti-sense-mediated depletion of maternal mRNAs and the host transfer technique.</a> Methods Mol Biol. 469, 417-429 (2008).</li><li>Rugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Experimental Embryology: Techniques and procedures. , (1962).</li><li>Smith, L. D., Ecker, R. E., Subtelny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+induction+of+physiological+maturation+in+Rana+pipiens+oocytes+removed+from+their+ovarian+follicles.">In vitro induction of physiological maturation in Rana pipiens oocytes removed from their ovarian follicles.</a> Dev Biol. 17, 627-643 (1968).</li><li>Smith, L. D., Xu, W., Varnold, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+and+oocyte+isolation.">Oogenesis and oocyte isolation.</a> Methods Cell Biol. 36, 45-60 (1991).</li><li>Woolf, T. M., Jennings, C. G., Rebagliati, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability,+toxicity+and+effectiveness+of+unmodified+and+phosphorothioate+antisense+oligodeoxynucleotides+in+Xenopus+oocytes+and+embryos.">The stability, toxicity and effectiveness of unmodified and phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides in Xenopus oocytes and embryos.</a> Nucleic Acids Res. 18, 1763-1769 (1990).</li><li>Wylie, C., Kofron, M., Payne, C., Anderson, R., Hosobuchi, M., Joseph, E., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+beta-catenin+establishes+a+'dorsal+signal'+in+early+Xenopus+embryos.">Maternal beta-catenin establishes a 'dorsal signal' in early Xenopus embryos.</a> Development. 122, 2987-2996 (1996).</li><li>Zhang, J., Houston, D. W., King, M. L., Payne, C., Wylie, C., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+maternal+VegT+in+establishing+the+primary+germ+layers+in+Xenopus+embryos.">The role of maternal VegT in establishing the primary germ layers in Xenopus embryos.</a> Cell. 94, 515-524 (1998).</li><li>Zuck, M. V., Wylie, C. C., Heasman, J., Richter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+mRNAs+in+Xenopus+embryos:+an+antisense+approach..">Maternal mRNAs in Xenopus embryos: an antisense approach..</a> A comparative methods approach to the study of oocytes and embryos. , 341-354 (1998).</li></ol>

وهناك نتيجة ناجحة في نقل الإخصاب والانقسام الطبيعي 50 ٪&gt; من البويضات (الشكل 3). وعموما بين 30-60 ٪ من البويضات نقل البقاء على قيد الحياة في المراحل الماضية neurula. نحن عادة 75-150 نقل البويضات في المجموعة التجريبية ، والتي سوف تسفر الأجنة ما يكفي لعدة أنواع من التحليل (في الموق...

الحلول والوصفات : OCM (الثقافة سيت المتوسط ​​؛ معدلة من ويلي وآخرون ، 1996). <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 70 ٪ ليبوفيتش L - 15 متوسطة (التي تحتوي على الجلوتامين L -) </td><td> (Invitrogen 11415-064) </td></tr><tr><td> 0.4 ملغ / مل ألبومين المصل البقري (BSA ؛ جزء الخامس) </td><td> (سيغما A - 9418 - 50G) </td></tr><tr><td> 1X - البنسلين الستربتوميسين </td><td> (سيغما 0781 ف) </td></tr><tr><td colspan="2"> التكيف مع هيدروكسيد الصوديوم 7،6-7،8 درجة الحموضة 5N </td></tr><tr><td colspan="2"> جعل الطازجة الأسبوعية ، وتخزين حتى 18 درجة مئوية. </td></tr></tbody></table> 10X MMR (محلول مارك والتعديل رينغر ؛ Zuck وآخرون ، 1998) <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كلوريد الصوديوم 1M </td></tr><tr><td> 20 ملي بوكل </td></tr><tr><td> 20 ملي CaCl 2 </td></tr><tr><td> 10 ملي MgCl 2 </td></tr><tr><td> 150 ملي HEPES </td></tr><tr><td> ضبط الرقم الهيدروجيني ل7،6-7،8 </td></tr><tr><td> المحل في 4 درجات مئوية </td></tr></tbody></table> حل مخدر <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1 غرام / لتر 3 أمينوبنزوي استر حمض الأثيل (MS222) </td><td> (سيغما A - 5040) </td></tr><tr><td colspan="2"> بيكربونات الصوديوم 0.7 غم / لتر </td></tr><tr><td colspan="2"> تذوب في المياه المعالجة Amquel </td></tr><tr><td colspan="2"> جعل الطازجة الأسبوعية </td></tr></tbody></table> البروجسترون الأسهم <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> البروجسترون 10 ملم (P - 0130 سيغما) في الإيثانول بنسبة 100 ٪ </td></tr><tr><td> تمييع إلى 1 ملم في EtOH 100 ٪ للسهم 500x / حل تعمل </td></tr><tr><td> المحل في -20 درجة مئوية </td></tr></tbody></table> الأصباغ الحيوية (معدلة من Heasman وآخرون ، 1991) <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الزرقاء : 0.1 ٪ والنيل الأزرق </td><td> (121479 - الدريتش 5G) </td></tr><tr><td> الأحمر : الأحمر المحايدة 0.25 ٪ </td><td> (سيغما N - 6634) ، </td></tr><tr><td> البني : 1 ٪ بسمارك براون </td><td> (سيغما B - 2759) ، </td></tr><tr><td colspan="2"> أخضر (80 + 80 ميكرولتر زرقاء اللون البني ميكرولتر) </td></tr><tr><td colspan="2"> البنفسجي (80 + 80 ميكرولتر الأزرق أحمر ميكرولتر). </td></tr><tr><td colspan="2"> ويمكن أيضا اللون السادس ، أورانج (80 + 80 ميكرولتر الأحمر البني ميكرولتر) ، يمكن استخدام ولكن غالبا ما يكون من الصعب تمييزها عن البني. </td></tr></tbody></table> مصنوعة مخزونات الأزرق ، الأحمر ويصل براون في الماء منزوع الأيونات في 50 مل أنابيب ، حضنت لمدة 20 دقيقة مع هزاز ونسج في جهاز للطرد المركزي السريرية. وaliquotted في supernatants في أنابيب microfuge وتخزينها على -20 درجة مئوية.

fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method

دراسة مساهمة جزيئات الموروثة للأمهات لالفقاريات التنمية في وقت مبكر كثيرا ما يصطدم في الوقت والنفقات اللازمة لتوليد الحيوانات الأم وتأثير متحولة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن العديد من التقنيات لoverexpress أو تثبيط وظيفة الجينات في الكائنات الحية مثل الضفدع والزرد تفشل بما فيه الكفاية لاستهداف الحرجة الأمهات مسارات الإشارات ، مثل إشارات Wnt. في القيطم ، لا يمكن التلاعب في الجينات وظيفة المثقف والتسميد البويضات في وقت لاحق لهم تخفيف هذه المشاكل إلى حد ما. وdefolliculated يدويا من نسيج المبيض البويضات المانحة ، أو حقن العلاج في الثقافة كما هو مطلوب ، وحفزت ثم مع البروجسترون للحث على النضج. المقبل ، وقدم البويضات في تجويف الجسم لاستضافة الضفدع الإناث البيض ، وعندها سيكون من خلال قناة البيض انهم translocated المضيف والحصول على التعديلات والمعاطف هلام اللازمة للإخصاب. ويمكن عندئذ للأجنة الناتجة يتم رفعها إلى المرحلة المطلوبة وتحليلها عن آثار أي اضطرابات التجريبية. وقد كان هذا الأسلوب المضيف نقل فعالة للغاية في الكشف عن الآليات الأساسية للتنمية في وقت مبكر ، وتتيح مجموعة واسعة من الاحتمالات التجريبية غير متوفرة في أي كائن فقاري النموذج الآخر.

Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

إجراء التسميد<em&gt; البويضات القيطم</em&gt; من جانب المضيف أسلوب النقل.

تسميد البويضات القيطم باستخدام أسلوب نقل المضيف

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

نقل النووي في البويضات ماوس

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

Retrieval of Mouse Oocytes

استرجاع البويضات ماوس

To date, only a few studies have reported successful manipulations of Peromyscus embryogenesis or reproductive biology.  Together with the Peromyscus ...

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

في المختبر عن طريق الجمعية النووية مجزأ مقتطفات البيض القيطم

Nuclear membrane assembly is an essential step in the cell division cycle; this process can be replicated in the test tube by combining Xenopus sperm ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

التصحيح تسجيل المشبك من القنوات ايون معبرا عنه البويضات القيطم

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection من البويضات المورق القيطم

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

أسلوب الإنتاجية العالية للحصول على الحيوانات المنوية الحفظ بالتبريد واسماك الزرد في المختبر التسميد

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

تصور التعريب في الحمض النووي الريبي القيطم البويضات

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

تحديد الأنسجة باستخدام زرع رسملة الحيوان (ACT) في الفحص القيطم المورق</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

أعربت المشبك التصحيح وتقنيات الإرواء لدراسة في قنوات ايون القيطم البويضات

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

دراسة الحمض النووي حاجز الضرر باستخدام<em&gt; القيطم</emمقتطفات البيض&gt;

On a daily basis, cells are subjected to a variety of endogenous and environmental insults. To combat these insults, cells have evolved DNA damage ...