Name: fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method
Uploaded: 2010-11-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

लेखकों पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए ह्यूस्टन प्रयोगशाला का धन्यवाद सदस्यों के लिए करना चाहते हैं. अनुसंधान द्वारा समर्थित राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के (GM083999) DWH सम्मानित किया है

1. अंडाशय ऊतक के सर्जिकल हटाना <ol class="lalpha"><li> 400-800 एमएल प्रयोग के आकार पर निर्भर करता है के बीच; oocyte मध्यम संस्कृति के एक ताजा बैच (सामग्री OCM) तैयार करें. 7.6-7.8 पीएच समायोजित, जब तक phenol के लाल एक गहरे लाल रंग (5N NaOH के छह या ...

<ol>
	<li>Brun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+maturation+in+vitro:+contribution+of+the+oviduct+to+total+maturation+in+Xenopus+laevis.">Oocyte maturation in vitro: contribution of the oviduct to total maturation in Xenopus laevis.</a> Experientia. 31, 1275-1276 (1975).</li><li>Elinson, R. P., Pasceri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+UV-sensitive+targets+in+dorsoanterior+specification+of+frog+embryos.">Two UV-sensitive targets in dorsoanterior specification of frog embryos.</a> Development. 106, 511-518 (1989).</li><li>Heasman, J., Holwill, S., Wylie, C. C., C, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+of+cultured+Xenopus+oocytes+and+use+in+studies+of+maternally+inherited+molecules.">Fertilization of cultured Xenopus oocytes and use in studies of maternally inherited molecules.</a> Methods Cell Biol. 36, 213-230 (1991).</li><li>Holwill, S., Heasman, J., Crawley, C., Wylie, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axis+and+germ+line+deficiencies+caused+by+u.v+irradiation+of+Xenopus+oocytes+cultured+in+vitro.">Axis and germ line deficiencies caused by u.v irradiation of Xenopus oocytes cultured in vitro.</a> Development. 100, 735-743 (1987).</li><li>Houston, D. W., King, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+Xdazl,+a+germ+plasm-localized+RNA,+in+the+differentiation+of+primordial+germ+cells+in+Xenopus.">A critical role for Xdazl, a germ plasm-localized RNA, in the differentiation of primordial germ cells in Xenopus.</a> Development. 127, 447-456 (2000).</li><li>Mir, A., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+the+mother+can+help:+studying+maternal+Wnt+signaling+by+anti-sense-mediated+depletion+of+maternal+mRNAs+and+the+host+transfer+technique.">How the mother can help: studying maternal Wnt signaling by anti-sense-mediated depletion of maternal mRNAs and the host transfer technique.</a> Methods Mol Biol. 469, 417-429 (2008).</li><li>Rugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Experimental Embryology: Techniques and procedures. , (1962).</li><li>Smith, L. D., Ecker, R. E., Subtelny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+induction+of+physiological+maturation+in+Rana+pipiens+oocytes+removed+from+their+ovarian+follicles.">In vitro induction of physiological maturation in Rana pipiens oocytes removed from their ovarian follicles.</a> Dev Biol. 17, 627-643 (1968).</li><li>Smith, L. D., Xu, W., Varnold, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+and+oocyte+isolation.">Oogenesis and oocyte isolation.</a> Methods Cell Biol. 36, 45-60 (1991).</li><li>Woolf, T. M., Jennings, C. G., Rebagliati, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability,+toxicity+and+effectiveness+of+unmodified+and+phosphorothioate+antisense+oligodeoxynucleotides+in+Xenopus+oocytes+and+embryos.">The stability, toxicity and effectiveness of unmodified and phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides in Xenopus oocytes and embryos.</a> Nucleic Acids Res. 18, 1763-1769 (1990).</li><li>Wylie, C., Kofron, M., Payne, C., Anderson, R., Hosobuchi, M., Joseph, E., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+beta-catenin+establishes+a+'dorsal+signal'+in+early+Xenopus+embryos.">Maternal beta-catenin establishes a 'dorsal signal' in early Xenopus embryos.</a> Development. 122, 2987-2996 (1996).</li><li>Zhang, J., Houston, D. W., King, M. L., Payne, C., Wylie, C., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+maternal+VegT+in+establishing+the+primary+germ+layers+in+Xenopus+embryos.">The role of maternal VegT in establishing the primary germ layers in Xenopus embryos.</a> Cell. 94, 515-524 (1998).</li><li>Zuck, M. V., Wylie, C. C., Heasman, J., Richter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+mRNAs+in+Xenopus+embryos:+an+antisense+approach..">Maternal mRNAs in Xenopus embryos: an antisense approach..</a> A comparative methods approach to the study of oocytes and embryos. , 341-354 (1998).</li></ol>

एक सफल निषेचन और&gt; oocytes की 50% (चित्रा 3) के सामान्य विपाटन हस्तांतरण में परिणाम होगा. हस्तांतरित oocytes के आम तौर पर बीच 30-60% neurula चरणों पिछले बच जाएगा. हम आम तौर पर 75-150 oocytes प्रति प्रायोगिक समूह (बगल में, RT-पीसीआर) के रूप ?...

समाधान और व्यंजनों: OCM (Oocyte मध्यम संस्कृति, Wylie एट अल से संशोधित, 1996.) <table border="0"><tbody><tr><td> 70% लेबोविट्ज़ एल-15 मध्यम (एल-glutamine युक्त) </td><td> (11,415-064 Invitrogen) </td></tr><tr><td> 0.4 मिलीग्राम / एमएल गोजातीय सीरम albumin (BSA, अंश वी) </td><td> (सिग्मा एक 9418-50g) </td></tr><tr><td> 1x पेनिसिलिन - स्ट्रेप्टोमाइसिन </td><td> (सिग्मा पी - +०७८१) </td></tr><tr><td colspan="2"> 5N NaOH साथ 7.6-7.8 पीएच को समायोजित करें </td></tr><tr><td colspan="2"> 18 डिग्री सेल्सियस पर ताजा साप्ताहिक दुकान, बनाओ </td></tr></tbody></table> 10X MMR (मार्क संशोधित घंटी समाधान; Zuck एट अल, 1998) <table border="0"><tbody><tr><td> 1M NaCl </td></tr><tr><td> 20 मिमी KCl </td></tr><tr><td> 20 मिमी 2 CaCl </td></tr><tr><td> 10 मिमी 2 MgCl </td></tr><tr><td> 150 मिमी HEPES </td></tr><tr><td> पीएच 7.6-7.8 करने के लिए समायोजित </td></tr><tr><td> 4 में स्टोर डिग्री सेल्सियस </td></tr></tbody></table> संवेदनाहारी समाधान <table border="0"><tbody><tr><td> 1 / छ एल 3 Aminobenzoic एसिड इथाइल एस्टर (MS222) </td><td> (सिग्मा एक-5040) </td></tr><tr><td colspan="2"> 0.7 छ / एल सोडियम बिकारबोनिट </td></tr><tr><td colspan="2"> Amquel के इलाज के पानी में भंग </td></tr><tr><td colspan="2"> ताजा साप्ताहिक </td></tr></tbody></table> प्रोजेस्टेरोन शेयरों <table border="0"><tbody><tr><td> 100% इथेनॉल में 10 मिमी प्रोजेस्टेरोन (पी - 0130 सिग्मा) </td></tr><tr><td> एक 500x शेयर के लिए 100% EtOH में 1 मिमी पतला / काम कर समाधान </td></tr><tr><td> -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर </td></tr></tbody></table> महत्वपूर्ण रंजक (Heasman एट अल. 1991 से संशोधित) <table border="0"><tbody><tr><td> ब्लू: 0.1% नील ब्लू </td><td> (5G Aldrich-१२१४७९), </td></tr><tr><td> 0.25% तटस्थ लाल: लाल </td><td> (सिग्मा एन - 6634), </td></tr><tr><td> % 1 बिस्मार्क ब्राउन: ब्राउन </td><td> (सिग्मा बी - 2759) </td></tr><tr><td colspan="2"> ग्रीन (80 μl + नीले 80 μl भूरे रंग), </td></tr><tr><td colspan="2"> चमकीला गुलाबी रंग (80 μl नीले + 80 μl लाल). </td></tr><tr><td colspan="2"> छठे रंग, ऑरेंज (80 μl लाल + 80 μl भूरे रंग), लेकिन यह भी इस्तेमाल किया जा सकता है अक्सर भूरे रंग से अलग करना कठिन है. </td></tr></tbody></table> ब्लू, रेड और ब्राउन के स्टॉक विआयनीकृत जल में बना रहे हैं, 50 मिलीलीटर की नलियों में कमाल के साथ 20 मिनट के लिए incubated और एक नैदानिक ​​अपकेंद्रित्र में घूमती है. supernatants microfuge ट्यूबों में aliquotted हैं और -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत

fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method

मातृ प्रभाव उत्परिवर्ती पशुओं को उत्पन्न करने के लिए आवश्यक समय और खर्च से माता से विरासत में मिला अणुओं के योगदान के अध्ययन के प्रारंभिक विकास हड्डीवाला अक्सर आड़े आती है. इसके अतिरिक्त, तकनीक के कई overexpress या Xenopus और zebrafish जैसे जीवों में जीन समारोह को बाधित करने के लिए पर्याप्त महत्वपूर्ण WNT सिगनल के रूप में मातृ संकेत रास्ते, लक्ष्य असफल. Xenopus में, सुसंस्कृत oocytes में जीन समारोह से छेड़छाड़ और बाद में उन्हें fertilizing इन समस्याओं को कुछ हद तक उन्नति कर सकते हैं . Oocytes मैन्युअल रूप से दाता अंडाशय के ऊतकों से defolliculated हैं, इंजेक्शन या संस्कृति में इलाज के रूप में वांछित है, और तो प्रोजेस्टेरोन के साथ उत्तेजित करने के लिए परिपक्वता प्रेरित. अगला, oocytes एक ovulating मेजबान महिला मेंढक का शरीर गुहा में पेश कर रहे हैं, जिस वे मेजबान oviduct के माध्यम से translocated हो जाएगा और संशोधनों और जेली कोट निषेचन के लिए आवश्यक प्राप्त है. परिणामस्वरूप भ्रूण तब इच्छित मंच पर उठाया कर सकते हैं हो सकता है और किसी भी प्रयोगात्मक perturbations के प्रभाव के लिए विश्लेषण किया. यह मेजबान हस्तांतरण विधि जल्दी विकास के बुनियादी तंत्र uncovering में अत्यंत प्रभावी किया गया है और प्रयोगात्मक किसी भी अन्य हड्डीवाला मॉडल जीव में उपलब्ध नहीं है संभावनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला की अनुमति देता है.

Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Fertilizing के लिए प्रक्रिया<em&gt; Xenopus oocytes</em&gt; मेजबान हस्तांतरण विधि के द्वारा.

के निषेचन Xenopus oocytes होस्ट स्थानांतरण विधि का उपयोग

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

माउस oocytes में न्यूक्लियर ट्रांसफर

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

Retrieval of Mouse Oocytes

माउस oocytes की पुनर्प्राप्ति

To date, only a few studies have reported successful manipulations of Peromyscus embryogenesis or reproductive biology.  Together with the Peromyscus ...

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

इन विट्रो परमाणु विधानसभा में खंडित Xenopus अंडे के अर्क का प्रयोग

Nuclear membrane assembly is an essential step in the cell division cycle; this process can be replicated in the test tube by combining Xenopus sperm ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Xenopus oocytes में व्यक्त आयन चैनल के पैच दबाना रिकॉर्डिंग

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Xenopus Laevis oocytes के Microinjection

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

Zebrafish शुक्राणु cryopreservation के लिए एक उच्च throughput और विधि इन विट्रो में निषेचन

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing शाही सेना स्थानीयकरण में Xenopus Oocytes

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

ऊतक में पशु कैप (अधिनियम) प्रत्यारोपण परख का प्रयोग निर्धारण Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

पैच और आयन चैनल के अध्ययन के लिए दबाना छिड़काव तकनीक में व्यक्त Xenopus Oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

डीएनए की क्षति का उपयोग चेकप्वाइंट के अध्ययन<em&gt; Xenopus</em&gt; Egg अर्क

On a daily basis, cells are subjected to a variety of endogenous and environmental insults. To combat these insults, cells have evolved DNA damage ...