Name: fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method
Uploaded: 2010-11-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

Авторы хотели бы выразить благодарность членам лаборатории Хьюстон для критическое прочтение рукописи. Исследование проводится при поддержке Национального института здоровья (GM083999) присуждена DWH

1. Хирургическое удаление яичников тканей <ol class="lalpha"><li> Подготовить новую партию ооцитов культуральной среде (ОСМ; материалы), между 400-800 мл в зависимости от размера эксперимента. Отрегулируйте рН до 7.6-7.8, пока фенола красного превращается в темный цвет красный (шесть или около того кап?...

<ol>
	<li>Brun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+maturation+in+vitro:+contribution+of+the+oviduct+to+total+maturation+in+Xenopus+laevis.">Oocyte maturation in vitro: contribution of the oviduct to total maturation in Xenopus laevis.</a> Experientia. 31, 1275-1276 (1975).</li><li>Elinson, R. P., Pasceri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+UV-sensitive+targets+in+dorsoanterior+specification+of+frog+embryos.">Two UV-sensitive targets in dorsoanterior specification of frog embryos.</a> Development. 106, 511-518 (1989).</li><li>Heasman, J., Holwill, S., Wylie, C. C., C, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+of+cultured+Xenopus+oocytes+and+use+in+studies+of+maternally+inherited+molecules.">Fertilization of cultured Xenopus oocytes and use in studies of maternally inherited molecules.</a> Methods Cell Biol. 36, 213-230 (1991).</li><li>Holwill, S., Heasman, J., Crawley, C., Wylie, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axis+and+germ+line+deficiencies+caused+by+u.v+irradiation+of+Xenopus+oocytes+cultured+in+vitro.">Axis and germ line deficiencies caused by u.v irradiation of Xenopus oocytes cultured in vitro.</a> Development. 100, 735-743 (1987).</li><li>Houston, D. W., King, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+Xdazl,+a+germ+plasm-localized+RNA,+in+the+differentiation+of+primordial+germ+cells+in+Xenopus.">A critical role for Xdazl, a germ plasm-localized RNA, in the differentiation of primordial germ cells in Xenopus.</a> Development. 127, 447-456 (2000).</li><li>Mir, A., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+the+mother+can+help:+studying+maternal+Wnt+signaling+by+anti-sense-mediated+depletion+of+maternal+mRNAs+and+the+host+transfer+technique.">How the mother can help: studying maternal Wnt signaling by anti-sense-mediated depletion of maternal mRNAs and the host transfer technique.</a> Methods Mol Biol. 469, 417-429 (2008).</li><li>Rugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Experimental Embryology: Techniques and procedures. , (1962).</li><li>Smith, L. D., Ecker, R. E., Subtelny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+induction+of+physiological+maturation+in+Rana+pipiens+oocytes+removed+from+their+ovarian+follicles.">In vitro induction of physiological maturation in Rana pipiens oocytes removed from their ovarian follicles.</a> Dev Biol. 17, 627-643 (1968).</li><li>Smith, L. D., Xu, W., Varnold, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+and+oocyte+isolation.">Oogenesis and oocyte isolation.</a> Methods Cell Biol. 36, 45-60 (1991).</li><li>Woolf, T. M., Jennings, C. G., Rebagliati, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability,+toxicity+and+effectiveness+of+unmodified+and+phosphorothioate+antisense+oligodeoxynucleotides+in+Xenopus+oocytes+and+embryos.">The stability, toxicity and effectiveness of unmodified and phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides in Xenopus oocytes and embryos.</a> Nucleic Acids Res. 18, 1763-1769 (1990).</li><li>Wylie, C., Kofron, M., Payne, C., Anderson, R., Hosobuchi, M., Joseph, E., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+beta-catenin+establishes+a+'dorsal+signal'+in+early+Xenopus+embryos.">Maternal beta-catenin establishes a 'dorsal signal' in early Xenopus embryos.</a> Development. 122, 2987-2996 (1996).</li><li>Zhang, J., Houston, D. W., King, M. L., Payne, C., Wylie, C., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+maternal+VegT+in+establishing+the+primary+germ+layers+in+Xenopus+embryos.">The role of maternal VegT in establishing the primary germ layers in Xenopus embryos.</a> Cell. 94, 515-524 (1998).</li><li>Zuck, M. V., Wylie, C. C., Heasman, J., Richter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+mRNAs+in+Xenopus+embryos:+an+antisense+approach..">Maternal mRNAs in Xenopus embryos: an antisense approach..</a> A comparative methods approach to the study of oocytes and embryos. , 341-354 (1998).</li></ol>

Успешная передача приведет к оплодотворению и нормального расщепления&gt; 50% ооцитов (рис. 3). Обычно между 30-60% от переводимой ооцитов выживет прошлого этапа нейрулы. Мы обычно передачи 75-150 ооцитов в экспериментальной группе, которая даст достаточно эмбрионов в течение нескольких типов ?...

Решения и рецепты: OCM (ооцитов культурной среде; редактировался Уайли и др., 1996). <table border="0"><tbody><tr><td> 70% L-15 Лейбовиц в среде (содержащей L-глютамин) </td><td> (Invitrogen 11415-064) </td></tr><tr><td> 0,4 мг / мл бычьего сывороточного альбумина (БСА; часть V) </td><td> (Sigma-9418-50г) </td></tr><tr><td> 1x Пенициллин-Стрептомицин </td><td> (Sigma P-0781) </td></tr><tr><td colspan="2"> Отрегулируйте до рН 7.6-7.8 с 5N NaOH </td></tr><tr><td colspan="2"> Сделайте свежие еженедельные, хранить при температуре 18 ° C. </td></tr></tbody></table> 10X MMR (Решение Марка изменения Рингера;. Зак и др., 1998) <table border="0"><tbody><tr><td> 1M NaCl </td></tr><tr><td> 20 мМ KCl </td></tr><tr><td> 20 мМ CaCl 2 </td></tr><tr><td> 10 мМ MgCl 2 </td></tr><tr><td> 150 мМ HEPES </td></tr><tr><td> приспособиться к рН 7.6-7.8 </td></tr><tr><td> Хранить при температуре 4 ° С </td></tr></tbody></table> Анестетики решение <table border="0"><tbody><tr><td> 1 г / л 3-аминобензойной кислоты этиловый эфир (MS222) </td><td> (Sigma-5040) </td></tr><tr><td colspan="2"> 0,7 г / л бикарбоната натрия </td></tr><tr><td colspan="2"> Растворите в Amquel-очищенной воды </td></tr><tr><td colspan="2"> Сделайте свежие еженедельно </td></tr></tbody></table> Прогестерон запасов <table border="0"><tbody><tr><td> 10 мМ Прогестерон (Sigma P-0130) в 100% этанола </td></tr><tr><td> Развести в 1 мм в 100% этанола для 500x запаса / Рабочий раствор </td></tr><tr><td> Хранить при температуре от -20 ° C </td></tr></tbody></table> Vital красителей (изменение от Heasman и соавт., 1991) <table border="0"><tbody><tr><td> Синий: 0,1% Нила Синий </td><td> (Aldrich 121479-5G), </td></tr><tr><td> Красный: 0,25% нейтрального красного </td><td> (Sigma N-6634), </td></tr><tr><td> Браун: 1% Бисмарк Браун </td><td> (Sigma B-2759), </td></tr><tr><td colspan="2"> Зеленый (80 мкл синий + 80 мкл коричневый), </td></tr><tr><td colspan="2"> Сиреневый (80 мкл синий + 80 мкл красного цвета). </td></tr><tr><td colspan="2"> Шестой цвет, оранжевый (80 мкл красный + 80 мкл коричневый), также может быть использован, но часто трудно отличить от коричневого. </td></tr></tbody></table> Запасы синий, красный и коричневый состоят в деионизованной воде в 50 мл пробирки, инкубировали в течение 20 минут с качалки и вращается в клинической центрифуге. Супернатанты aliquotted в микроцентрифужную труб и хранить при температуре -20 ° C.

fertilization of xenopus oocytes using the host transfer method

Изучение вклада матерински унаследовал молекул позвоночных раннего развития часто препятствует времени и средств, необходимых для создания материнского эффекта мутанта животных. Кроме того, многие методы гиперэкспрессией или подавляют функции генов в организмах, таких как Xenopus и данио не в состоянии достаточно критическое целевой материнской сигнальных путей, таких как Wnt сигнализации. В Xenopus, манипулируя функции генов в культуре ооцитов, а затем удобрения них могут улучшить эти проблемы в некоторой степени. Ооциты вручную defolliculated из донорской ткани яичника, вводят или обработаны в культуре по своему желанию, а затем стимулировали прогестерон, чтобы вызвать созревание. Далее ооциты вводят в полость тела овуляция хост женщины лягушки, после чего они будут перемещаться через яйцевод хозяина и приобрести модификации и желе пальто необходимые для оплодотворения. В результате эмбрионов может быть увеличена до желаемой сцены и проанализированы последствия любых экспериментальных возмущений. Этот узел передачи метод был очень эффективен при выявлении основных механизмов раннего развития и позволяет широкий спектр экспериментальных возможностей не доступны в любой другой организм модель позвоночных.

Watch this Scientific Journal Video about Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method at JoVE.com

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Процедура для удобрения<em&gt; Xenopus ооцитов</em&gt; По методу передачи хосту.

Оплодотворение Xenopus ооцитов Использованием метода передачи хост

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

Ядерная передача в ооциты мыши

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

Retrieval of Mouse Oocytes

Восстановление мыши ооцитов

To date, only a few studies have reported successful manipulations of Peromyscus embryogenesis or reproductive biology.  Together with the Peromyscus ...

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

In Vitro ядерной Ассамблеи Использование фракционированный яиц Xenopus Экстракты

Nuclear membrane assembly is an essential step in the cell division cycle; this process can be replicated in the test tube by combining Xenopus sperm ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Патч зажим Запись ионных каналов, выраженные в ооцитов Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Микроинъекции Xenopus ооцитов Laevis

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

Высокая пропускная метод для криоконсервации спермы и данио рерио In Vitro Оплодотворение

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Визуализация РНК Локализация в Xenopus Ооцитов

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Ткань Определение Использование трансплантации животных Cap (ACT) в Пробирной Xenopus laevis</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Зажим Patch и перфузии Методы изучения ионных каналов, выраженные в Xenopus Ооцитов

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Study of the DNA Damage Checkpoint using Xenopus Egg Extracts

Исследование Checkpoint повреждения ДНК использовании<em&gt; Xenopus</em&gt; Экстракты Egg

On a daily basis, cells are subjected to a variety of endogenous and environmental insults. To combat these insults, cells have evolved DNA damage ...