Name: time-lapse imaging of mitosis after sirna transfection
Uploaded: 2010-06-06T18:00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل الجمعية الأميركية للسرطان (PF - 07 - 103 - 01 - CSM) ، والمعاهد الوطنية للصحة (R01 GM61275 وCA042014 P30) ، وسرطان الدم والغدد اللمفاوية المجتمع ، ومؤسسة هنتسمان للسرطان.

ترنسفكأيشن سيرنا وإعداد الخلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4 إعداد جيد LabTek ساترة غرف الثاني بإضافة 0.5mL من فبرونيكتين (10μg/mL) إلى كل بئر التي سيتم استخدامها. احتضان لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد سيرنا / Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) مجمعات للترنسفكأيشن العكسي وفقا لتعليمات الصانع ق. استخدام المبالغ الموصى بها لمدة جيدا طبق بشكل جيد في 24 دائرة لاستخدامها (100μL المجموع). يمكن أن تكون بديلا منتج مماثل / بروتوكول للترنسفكأيشن سيرنا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة فبرونيكتين من الآبار ساترة للغرف. إضافة 100μL من سيرنا / مجمعات RNAiMAX Lipofectamine إلى كل بئر التي سيتم استخدامها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 20000 هيستون H2B - mCherry ، معربا عن الخلايا (في 500μL) لكل تحتوي على خليط ترنسفكأيشن جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لاحتضان خلايا لمدة 24 ساعة قبل استبدال ~ ترنسفكأيشن مع خليط من 1mL الخلية العادية المتوسطة الثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان خلايا إضافية قبل 24 ساعة من الحصول على الصور (48 ساعة بعد ترنسفكأيشن). </li></ol> الإعداد المجهر والحصول على الصور <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هناك ثلاثة أجزاء رئيسية لاكتساب صورة الإعداد : 1) خلية الحاضنة التي تناسبها على المسرح المجهر ويحافظ على البيئة الرطبة ثابت من 37 درجة مئوية ، وأول أكسيد الكربون بنسبة 5 ٪ 2 ، 2) مجهر مقلوب مجهزة مرحلة الآلي ، الآلي ومضان brightfield مصاريع ، وعجلات تصفية الآلي ، و 3) مجموعة من البرامج التي تدمج الضوابط والمسرح ، مصاريع ، وعجلات التصفية. في الإعداد والتصوير لدينا ، ونحن نستخدم زنزانة مخصصة من مختبر الحاضنة أوكو التي يمكن استخدامها مع ساترة LabTek غرف الثانية. يتم التحكم في هذه المرحلة ، ومصاريع ، وعجلات تصفية حسب البرنامج Metamorph تلميح : المختبر أوكو مرحلة قمة النظام حاضنة تضم محولات لمجموعة متنوعة من لوحة مختلفة ، صحن ، أو أحجام ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف ساترة LabTek غرف الثاني في الحاضنة عن طريق فتح غطاء الحاضنة قبل تحسنت ومعايرتها ، واضعا في غرف ساترة المحول ، وعقد في مكان مع الطين النمذجة. ترك غطاء على ساترة غرف بحيث مستنبت الخلية لن تجف. إغلاق الغطاء والحاضنة الموقف كله على المسرح المجهر ، وضمان أن يتم عقد الحاضنة ثابتا في مكانه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Metamorph به ، إعداد التجربة الخاصة بك عن طريق اختيار &quot;تطبيقات / اقتناء المتعددة الأبعاد&quot; في شريط القوائم من البرنامج. وهذا سيجلب لك نافذة يمكنك من خلاله تحديد وتيرة وطول timelapse ، ومدة التعرض لكل لون (إذا فعل إعدادات متعددة) ، وعدد وموقع من مواقع المرحلة ، وعدد من المقاطع ض (إذا ) المطلوب. . حدد مكان حفظ ملفات البيانات تلميح : في حالة استخدام برامج أخرى من Metamorph ، وظائف قد تكون مختلفة قليلا ، ولكن المفهوم العام هو نفسه. Micromanager مصدر اقتناء البرمجيات مفتوحة ImageJ مقرها متوافق مع معظم الأجهزة الاجهزة ، هو بديل ممتاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> . لأغراض هذا البروتوكول ، سوف نقوم الحصول على صور على اثنين من موجات (brightfield وmCherry) كل 15 دقيقة لمدة 8 ساعات في المواقف المرحلة 15 تلميح : إذا كان المطلوب هو أفضل وقت القرار ، ثم يمكنك تقصير الفاصل الزمني بين عمليات الاستحواذ ، ولكن ويمكن استخدام عدد أقل من المناصب المرحلة ، وبالتالي أقل الخلايا الإنقسامية ستكون متاحة للتحليل. من المهم عند النظر إلى فترات زمنية تأخذ بعين الاعتبار الوقت اللازم لتصفية عجلة للتبديل بين مجموعات التصفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الوقت الأمثل لتعرض كل الطول الموجي من خلال التركيز أولا على حقل من الخلايا باستخدام brightfield الإضاءة. في البرنامج ، وضبط وظيفة ضبط تلقائي للصورة فقط للقناة brightfield (وهذا سوف يسمح البرنامج لضبط تلقائي في كل موقف قبل كل مرحلة الاستحواذ) تلميح : نحن نستخدم 40X الجافة المرحلة على النقيض من الهدف لاعطاء القرار الممتاز من دون الحاجة للنفط . ويمكن استخدام الأهداف الأخرى تبعا لقرار البصرية المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل إلى الطول الموجي mCherry والمفاجئة صورة باستخدام التعرض مللي ثانية 50. ضبط الوقت التعرض إلى الحد الأدنى المطلوب لترى صورة جيدة. فمن الضروري تحديد مقدار التعرض للضوء لضمان استمرار بقاء الخلية. كقاعدة عامة ، يمكن أن يتحقق هذا أفضل باستخدام فلتر الكثافة محايدة (للحد من تدفق ضوء الإثارة) ، والتعرض الكاميرا وقتا أطول وليس من خلال زيادة قوة الاضاءة. كرر هذا الإجراء عن أي موجات إضافية لاستخدامها تلميح : لتحديد بقاء على الأجل الطويل في التعرض الخلية نظرا لتجربتك ، يمكنك معاينة عدد من الصور خلية يمكن البقاء على قيد الحياة على مدى timelapse المرجوة من خلال تعديل مؤقتا التباعد timepoint من دقيقة إلى ثانية (أي 10 دقيقة. تصبح 10 ثانية). إذا خلاياك البقاء التعرض 100-200 (أوالعدد المناسب) ، ثم تعرض على ما يرام. إن لم يكن ، والحد من نورك الإثارة ، ووقت التعرض ، أو العدد الكلي من الصور لمحاكاة التجربة كاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، وحدد علامة عدد مناسب من مواقف مرحلة بحيث يمكنك تحقيق عينات كافية من السكان الخلية. سوف Metamorph تسجيل المواقف وسوف يعود هناك لاقتناء كل تلميح : عموما أنا أحاول العثور على المواقع التي يوجد الكثير من الخلايا إلى صورة ، ولكن ليست كثيرة بحيث تكون كثيفة جدا. أيضا ، فمن المهم لتحديد المواقف بما فيه الكفاية بحيث سيكون لديك فرصة جيدة لمراقبة عدد كبير من الخلايا تتقدم من خلال الانقسام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن تم تسجيل جميع timelapse ، والطول الموجي وقت التعرض ، ومرحلة معلومات الموقع ، حدد &quot;معاينة&quot; زر على الشاشة لتحديد ما إذا كان البرنامج هو السيطرة على المعدات بشكل مناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذات مرة كنت راضيا ، حدد &quot;الحصول على&quot; زر على الشاشة لبدء الشراء. ثم نسترخي والسماح للكمبيوتر ومجهر للقيام بهذا العمل تلميح : لاحظ من خلال الأتمتة واحد على الأقل جولة كاملة من اقتناء لضمان أن كل شيء يعمل بشكل صحيح. </li></ol> معالجة الصور وتحليلها <ol start="16" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد انتهاء عملية الاستحواذ ، فإن الخطوة التالية هي لنقل بيانات الصورة إلى شكل يمكن أن يكون أسهل في التعامل معها. لأغراض هذا البروتوكول ، وسوف يثبت أولا كيفية إنشاء الأفلام باستخدام Metamorph ، ثم كيفية توليد صورة مركبة باستخدام برنامج ImageJ. فإما أن يكون مفيدا تنسيق لأغراض القياس الكمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوة الأولى هي مراجعة البيانات. للقيام بذلك ، حدد &quot;تطبيقات / مراجعة بيانات متعددة الأبعاد&quot; في شريط القائمة. حدد موقع الملفات الخاصة بك ، ثم اختر &quot;عرض&quot;. هذا سيسمح لك لاستعراض كومة من الصور من كل مرحلة على حدة الموقف. حدد موقف المرحلة المطلوب ، ثم &quot;تحميل الصور&quot;. سوف تكون قادرة على النهوض من خلال بيانات الإطار حسب الإطار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتلك المناصب المرحلة التي تمر خلايا الانقسام (على النحو الذي يحدده كل من الحمض النووي والتشكل الخلوي) ، يمكنك صنع أفلام والمونتاج باستخدام Metamorph ، أو مع برامج أخرى مثل ImageJ (متوفرة مجانا من خلال المعاهد الوطنية للصحة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجعل الفيلم في Metamorph ، حدد &quot;عملية / حفظ الفيلم&quot; في شريط القائمة. هل سيكون قادرا على تحديد الأطر التي الاستخدام ، والسرعة ، ونوع ملف الفيلم. ثم حدد &quot;حفظ الفيلم&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء المونتاج ، وأنا كومة حفظ الصور كملف STK. ، والتي يمكن استخدامها في برامج أخرى مثل ImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الملف في ImageJ وتطوير الأطر حتى تجد خلية يمر الانقسام. . محصول محيط الخلية وحدد &quot;صورة / مكرر&quot; تلميح : تأكد لجميع الأطر مكررة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء المونتاج ، حدد &quot;صورة / الأكوام / اصنع مونتاج&quot; في شريط القائمة. هنا يمكنك تحديد الأطر التي تريد تضمينها ، وحجم وشكل المونتاج ، وإذا كنت تريد الحدود بين الإطارات. حدد هذه وضرب &quot;حسنا&quot;. . المونتاج حفظ كملف TIF والقيام بأي مزيد من المعالجة إما في ImageJ أو أدوبي فوتوشوب تلميح : تغيير الملفات المونتاج من تنسيق 16 بت المستخدمة من قبل Metamorph إلى 8 بت صيغة لمعالجة الصور أسهل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحساب الوقت في مراحل مختلفة من الانقسام ، وتحديد ر = 0 (أول بادرة من التكثيف الحمض النووي أو التقريب الخلية) ، حساب عدد من الإطارات حتى تتماشى الكروموسومات عند خط الاستواء (التوقيت في الطور الأول / طليعة الطور) ، إطارات حتى تبدأ لفصل الصبغيات (الكروموسومات) (التوقيت في الطورية) ، والإطارات حتى تبدأ الخلايا لتتسطح (طور الصعود / الطور النهائي / الحرائك الخلوية). الوقت محسوب في كل مرحلة الإنقسامية يعتمد على الفاصل الزمني بين كل إطار. </li></ol> ممثل النتائج <img src="/files/ftp_upload/1878/1878fig1tmb.jpg" border="0" /> الشكل 1 يوضح النتائج من تجربة نموذجية تحكم ترنسفكأيشن باستخدام خط سيرنا الخلية هيلا معربا عن هيستون H2B - mCherry. وقد استخدمت هذه الطريقة في تحديد توقيت بفعالية الإنقسامية ، وكشف عن دور غير متوقعة للNup153 nucleoporin في توقيت متأخر الانقسام 1. الرجاء <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/1878/1878fig1.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1.

<ol>
	<li>Mackay, D. R., Elgort, S. W., Ullman, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nucleoporin+Nup153+has+separable+roles+in+both+early+mitotic+progression+and+the+resolution+of+mitosis.">The nucleoporin Nup153 has separable roles in both early mitotic progression and the resolution of mitosis.</a> Mol Biol Cell. 20, 1652-1660 (2009).</li><li>Khodjakov, A., Rieder, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+division+process+in+living+tissue+culture+cells.">Imaging the division process in living tissue culture cells.</a> Methods. 38, 2-16 (2006).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat Methods. 2, 905-909 (2005).</li><li>Meraldi, P., Draviam, V. M., Sorger, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+and+checkpoints+in+the+regulation+of+mitotic+progression.">Timing and checkpoints in the regulation of mitotic progression.</a> Dev Cell. 7, 45-60 (2004).</li><li>Mora-Bermudez, F., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+structural+dynamics+of+chromosomes+in+living+cells+by+fluorescence+microscopy.">Measuring structural dynamics of chromosomes in living cells by fluorescence microscopy.</a> Methods. 41, 158-167 (2007).</li><li>Prosser, S. L., Fry, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+the+centrosome+cycle+in+mammalian+cells.">Fluorescence imaging of the centrosome cycle in mammalian cells.</a> Methods Mol Biol. 545, 165-183 (2009).</li><li>Malureanu, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BubR1+N+terminus+acts+as+a+soluble+inhibitor+of+cyclin+B+degradation+by+APC/C(Cdc20)+in+interphase.">BubR1 N terminus acts as a soluble inhibitor of cyclin B degradation by APC/C(Cdc20) in interphase.</a> Dev Cell. 16, 118-131 (2009).</li><li>Anderson, D. J., Hetzer, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reshaping+of+the+endoplasmic+reticulum+limits+the+rate+for+nuclear+envelope+formation.">Reshaping of the endoplasmic reticulum limits the rate for nuclear envelope formation.</a> J Cell Biol. 182, 911-924 (2008).</li><li>Beaudouin, J., Gerlich, D., Daigle, N., Eils, R., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+envelope+breakdown+proceeds+by+microtubule-induced+tearing+of+the+lamina.">Nuclear envelope breakdown proceeds by microtubule-induced tearing of the lamina.</a> Cell. 108, 83-96 (2002).</li><li>Marcus, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+spindle+behavior+using+confocal+microscopy.">Visualization of spindle behavior using confocal microscopy.</a> Methods Mol Med. 137, 125-137 (2007).</li><li>Steigemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aurora+B-mediated+abscission+checkpoint+protects+against+tetraploidization.">Aurora B-mediated abscission checkpoint protects against tetraploidization.</a> Cell. 136, 473-484 (2009).</li><li>Draviam, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+genomic+screen+identifies+a+role+for+TAO1+kinase+in+spindle-checkpoint+signalling.">A functional genomic screen identifies a role for TAO1 kinase in spindle-checkpoint signalling.</a> Nat Cell Biol. 9, 556-564 (2007).</li><li>Neumann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+RNAi+screening+by+time-lapse+imaging+of+live+human+cells.">High-throughput RNAi screening by time-lapse imaging of live human cells.</a> Nat Methods. 3, 385-390 (2006).</li><li>Stegmeier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaphase+initiation+is+regulated+by+antagonistic+ubiquitination+and+deubiquitination+activities.">Anaphase initiation is regulated by antagonistic ubiquitination and deubiquitination activities.</a> Nature. 446, 876-881 (2007).</li></ol>

مع التطورات الحديثة في مجال التصوير والتكنولوجيا بروتين فلوري ، أصبح التصوير يعيش الجانب الروتيني للتحليل الخلوي 2. مجموعة متنوعة من GFP (ومتغيرات الألوان الأخرى 3) الموسومة البروتينات متوفرة على نطاق واسع أو سهلة نسبيا لبناء ويمكن استخدامها لتعقب عدد من بصمات انقسام الخلايا بما في ذلك الحمض النووي / ديناميات كروموسوم 4 و 5 و 6 ازدواجية الجسيم المركزي ، cyclin B ديناميات 7 ، وانهيار المغلف النووية وإعادة التجميع 8 ، 9 ، 10 الإنقسامية تشكيل المغزل ، ومراحل مختلفة من الحرائك الخلوية 11. ويمكن استخدام البروتينات الموسومة بمفرده أو بالاشتراك عند الأطياف الإثارة / انبعاث به نيون متوافقة ، مما يسمح بتقييم التنسيق بين أحداث معينة. إذا كان قرار زيادة المكانية و / أو الزمان هو / هي المطلوبة ، سواء المجهري متحد البؤر المسح الضوئي ويمكن استخدام الليزر ، وقرص الغزل ، أو بالرنين المسح الضوئي ، وقائمة من الخيارات المجهري متطورة مع التزايد المستمر القرار ما زال ينمو. كما تم تصوير حي لالانقسام في الخلايا الثديية تكييفها للاستخدام في الإنتاجية العالية ورني شاشات جزيء صغير 12-14. وهكذا ، بينما التجارب الأولية ليالي one باستخدام هذه التقنية قد تكون بسيطة نسبيا ، وإمكانيات بناء على هذه الاستراتيجية هي واسعة النطاق.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Lipofectamine RNAiMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13778-075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab Tek II Chambered Coverglass (4-well)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>12-565-337</td>
<td>Additional chamber sizes are available</td>
</tr>
<tr>
<td>Fibronectin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F1141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stage-top cell incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OKO Lab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Can use any appropriate chamber</td>
</tr>
<tr>
<td>Automated inverted fluorescence microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Can use any appropriate microscope</td>
</tr>
<tr>
<td>Software package</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Metamorph</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Can use any appropriate software</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

time-lapse imaging of mitosis after sirna transfection

ويجري تنسيق محكم التغييرات في التنظيم الخلوي الصبغي والديناميات التي تحدث أثناء الانقسام الميراث لضمان دقة المحتوى الجيني والخليوي. يمكن أن تكون السمة المميزة للأحداث الانقسام ، مثل الحركة كروموسوم ، تعقبها بسهولة على أساس الخلايا الفردية باستخدام الوقت الفاصل بين المجهري مضان من خطوط الخلايا الثديية محددة معربا عن GFP الموسومة البروتينات. بالاشتراك مع رني المستندة إلى نضوب ، وهذا يمكن أن يكون وسيلة قوية للوقوف على المرحلة (ق) من حيث الانقسام العيوب تحدث بعد أن تم خفض مستويات بروتين معين. في هذا البروتوكول ، فإننا نقدم وسيلة أساسية لتقييم تأثير المواد المستنفدة بروتين الإنقسامية التنظيمية المحتملة على توقيت الانقسام. وtransfected الخلايا مع سيرنا ، وضعت في غرفة الحضانة مرحلة أعلى ، والتقط باستخدام المجهر مضان الآلي. نحن تصف كيفية استخدام البرمجيات لإقامة تجربة مرور الزمن ، وكيفية عملية تسلسل الصور لجعل إما لا تزال صورة المونتاج أو الأفلام ، وكيفية قياس وتحليل توقيت مراحل الإنقسامية باستخدام خلية خط معربا عن mCherry - الموسومة H2B هيستون. أخيرا ، نحن مناقشة اعتبارات هامة لتصميم تجربة مرور الزمن. هذه الاستراتيجية هي مكملة لنهج أخرى ، ويقدم مزايا 1) حساسية للتغيرات في الحركية التي قد لا تكون لوحظ عند النظر إلى الخلايا كما يبلغ عدد سكانها والتحليل 2) من الانقسام من دون الحاجة إلى مزامنة دورة الخلية باستخدام علاجات دوائية. المعلومات البصرية من تجارب التصوير هذه ، ليس فقط يسمح بتقييم مراحل فرعية من الانقسام ، ولكن يمكن أيضا أن توفر نظرة غير المتوقعة التي لن يكون واضحا من تحليل دورة الخلية عن طريق نظام مراقبة الأصول الميدانية.

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection at JoVE.com

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

نحن هنا وصف بروتوكول الأساسية للصورة وتحديد توقيت الإنقسامية من الخلايا الحية الثدييات زراعة الأنسجة بعد ترنسفكأيشن سيرنا.

الوقت الفاصل بين التصوير من الانقسام الميتوزي بعد ترنسفكأيشن سيرنا

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

رصد أكتين التفكيك مع مرور الزمن الميكروسكوب

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

ثنائي الفوتون axotomy والوقت الفاصل بين التصوير مبائر يعيش في الأجنة الزرد

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

تسجيل متعددة الخلايا في السلوك Myxococcus زانثس الأغشية الحيوية باستخدام الزمن الفاصل بين Microcinematography

A swarm of the &delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus contains millions of cells that act as a collective, coordinating movement through a series of ...

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

متعدد الألوان الوقت الفاصل بين التصوير من اسماك الزرد المعدلة وراثيا : تصور الخلايا الجذعية الشبكية تفعيلها من خلال الخلية المستهدفة تذرية متعلق بالخلايا العصبية

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

الوقت الفاصل بين مرحلة التطور الجنيني المبكر من الميكروسكوب في انواع معينة ايليجانس

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

التحليل الكمي للهجرة عشوائية من الخلايا باستخدام الوقت الفاصل بين الميكروسكوب فيديو

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

على المدى الطويل، عالية الدقة الفاصل الزمني متحد البؤر التصوير من<em&gt; الطفلق ل arabidopsis</em&gt; البشرة خلال إنبات

Imaging in vivo dynamics of cellular behavior throughout a developmental sequence can be a powerful technique for understanding the mechanics of tissue ...

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

في فيفو سيرنا ترنسفكأيشن والجينات ضربة قاضية في الحبل الشوكي عن طريق السريع موسع قطني داخل القراب الحقن في الفئران

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

أسلوب متعدد الاستخدامات لتركيب نبات يترك لتصوير الوقت الفاصل بين إينترافيتال

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...